Comptage des unités de formation de colonies (FC) : Quantification des bactéries des corps volants
Published: April 30, 2023
Abstract
Source : Koyle, M. L., et coll. Élevage de la mouche des fruits et melanogaster de Drosophila dans des conditions axeniques et gnotobiotic. J. Vis. Exp. (2016).
Le microbiote drosophile a un impact sur le développement, l’immunité et la physiologie de l’animal. Cette vidéo décrit une méthode pour quantifier les bactéries des mouches en déterminant les unités formant la colonie à partir de préparations du corps entier. Le protocole en vedette démontre la technique avec les mouches, élevés dans des conditions gnotobiotic en utilisant quatre espèces bactériennes.
Protocol
Ce protocole est un extrait de Koyle et coll.,Élevage de la mouche des fruits Drosophila melanogaster Sous Axenic et Gnotobiotic Conditions, J. Vis. Exp. (2016). 1. Oeufs de déchorionate et transfert à la diète stérile Préparer l’armoire de biosécurité en pulvérisant l’intérieur (y compris les côtés) avec 70% d’éthanol. Essuyer le fond avec un tissu de laboratoire, et stériliser le capot avec de la lumière UV pendant ~ 15 min. Stérilis…
Representative Results
Fichier de code supplémentaire : Calculs d’échantillons. S’il vous plaît cliquez ici pour voir ce fichier (Cliquez à droite pour télécharger).
Materials
| Brewer's Yeast | MP Biomedicals, LLC. | 903312 | |
| Glucose | Sigma Aldrich | 158968-3KG | |
| Agar | Fisher–Lab Scientific | fly802010 | |
| Welch's 100% Grape Juice Concentrate | Walmart or other grocery store | 9116196 | |
| Cage: 32 oz. Translucent Round Deli Container | Webstaurant Store | 999L5032Y | |
| Translucent Round Deli Container Lid | Webstaurant Store | 999YNL500 | |
| Stock Bottles | Genesee Scientific | 32-130 | |
| Droso-Plugs | Genesee Scientific | 49-101 | |
| Nylon Mesh | Genesee Scientific | 57-102 | |
| Plastic Bushing | Home Depot | 100404002 | |
| Plastic Bushing Cap | Home Depot | 100153897 | |
| Specimen Cup | MedSupply Partners | K01-207067 | |
| Repeater M4 | Eppendorf | 4982000322 | |
| 50 ml Centrifuge Tubes | TrueLine Centrifuge Tubes | TR2003 | |
| Food Boxes | USA Scientific | 2316-5001 | |
| Lysing Matrix D Bulk | MP Biomedicals, LLC. | 116540434 | |
| Filter Pipette Tips, 300 µl | USA Scientific | 1120-9810 | |
| Petri Dishes | Laboratory Product Sales | M089303 | |
| Ethanol | Decon Laboratories, INC. | 2701 | |
| Paintbrush | Walmart | 5133 | |
| Forceps | Fisher | 08-882 | |
| Household Bleach (6-8% Hypochlorite) | Walmart | 550646751 | |
| Universal Peptone | Genesee Scientific | 20-260 | |
| Yeast Extract | Fisher Scientific | BP1422-500 | |
| Dipotassium Phosphate | Sigma Aldrich | P3786-1KG | |
| Ammonium Citrate | Sigma Aldrich | 25102-500g | |
| Sodium Acetate | VWR | 97061-994 | |
| Magnesium Sulfate | Fisher Scientific | M63-500 | |
| Manganese Sulfate | Sigma Aldrich | 10034-96-5 | |
| MRS Powder | Sigma Aldrich | 69966-500G | |
| 96 Well Plate Reader | BioTek (Epoch) | NA | |
| 1.7 ml Centrifuge Tubes | USA Scientific | 1615-5500 | |
| Filter Pipette Tips, 1,000 µl | USA Scientific | 1122-1830 | |
| 96 Well Plates | Greiner Bio-One | 655101 | |
| Ceramic Beads | MP Biomedicals, LLC. | 6540-434 | |
| Tissue Homogenizer | MP Biomedicals, LLC. | 116004500 | |
| Class 1 BioSafety Cabinet | Thermo Scientific | Model 1395 |
Citer Cet Article
Counting Colony Forming Units (CFUs): Quantifying Bacteria from Fly Bodies. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20120, doi: (2023).