Medir a rigidez à flexão de células bacterianas Usando uma armadilha óptica

Cultivar células de E. coli em meio de caldo Luria-Beltrani (LB) para a fase exponencial (OD = 0,2-0,4). Fazer crescer a cultura em LB suplementado com 50 mg / ml de cefalexina por 15 min para induzir crescimento filamentoso, e depois concentrar a cultura por 5 vezes por centrifugação. Faça PEI revestido lamela fluindo polyethylenimine 1% diluído em água em uma câmara de fluxo, e lavar com água depois de uma incubação de 5 minutos. O fluxo de cultura de células concentradas na câmara, e lavados com uma mistura de LB e cefalexina (50μg/mL), após 3 min para remover as células solto. Incubar na câmara a 37 ° C por 30 min-1 hora para permitir que as células anexado crescer antes de colocar no aparelho captura óptica. Faça polilisina revestido contas incubando contas 0,5 mícrons de diâmetro poliestireno (Bangs Labs) em polilisina 0,1% diluído em água por 30 min. Em seguida, lave as contas 3 vezes e ressuspender em água. Diluir a solução talão por um fator de dois em LB com cefalexina (50μg/mL), e adicioná-lo na câmara de fluxo. Opticamente armadilha um grânulo flutuante e tocá-lo para a ponta livre de uma célula. (Nós usamos uma Cidade Mad Labs estágio piezo para o controle do movimento da amostra.) Quando uma combinação adequada grânulo / célula for encontrada, lavar a câmara com cefalexina no LB (50μg/mL) para remover contas solto. Executar custom-written programa LabView para aplicar forças de flexão para celular e força-deslocamento registro de dados. Detalhes do programa Calibrar resposta do detector por digitalização raster anexado o talão dentro do feixe de laser de detecção e gravação 3D sinais de tensão PSD. Identificar eixo célula longa em imagem do microscópio. Mover células em passos em uma direção perpendicular ao eixo de células de comprimento. Registrar a distância percorrida eo deslocamento da armadilha óptica. Deslocamento para converter a força aplicada usando a rigidez armadilha previamente medidos e salvar o deslocamento da ponta e força para arquivo. Segredos para o Sucesso: No Passo 8), é preciso encontrar uma célula com um fim bem definidos preso. Algumas células são apenas preso em uma ponta, ea força de dobra na outra ponta leva a um giro de célula inteira, em vez de dobrar. Um par adequado é encontrado dobrando cada célula rapidamente à mão usando o movimento estágio joystick controlado. Resultados representativos: Figura 1. Esta figura mostra força-deslocamento de dados para uma única célula. A inclinação desta linha é a rigidez de flexão da célula.