<em>Drosophila</em> Egg Collection and Dechorionation: A Method to Remove the Outermost Egg Layer

doi:10.3791/20119

JoVE Journal > Embryo

Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.

Embryo

דרוזופילה (לא כולל) איסוף ביצים ודקורציה: שיטה להסרת שכבת הביצה החיצונית ביותר

Published: April 30, 2023

Abstract

מקור: קויל, M. L., ואח ‘. גידול זבוב הפירות Drosophila melanogaster תחת תנאים אקסניק וגנוטוביוטיקה. ג’יי ויס אקספ. (2016).

עובר דרוזופילה מוקף בקרומים החיצוניים המגוננים. כדי לקבל גישה לעובר, chorion–החיצוני ביותר של הממברנות–מוסר לעתים קרובות. וידאו זה מתאר שיטה נפוצה של dechorionation באמצעות hypochlorite נתרן. פרוטוקול הדוגמה מדגים את ההליך תוך שימוש בטכניקות סטריליות הנחוצות לגידול בעלי חיים צירניים או גנוטוביוטיים.

Protocol

פרוטוקול זה הוא קטע מתוך Koyle et al., גידול זבוב הפירות Drosophila melanogaster תחת תנאים אקסניק ו Gnotobiotic, J. Vis. Exp. (2016). 1. הכן כלובים מטילי ביצים הפוך צלחות אגר מיץ ענבים על ידי microwaving 100 מ”ל מים, 10 גרם שמרי בירה, 10 גרם גלוקוז, ו 1 גרם של אגר. מביאים לרתיחה 3 פעמים בשלב 1.1 ומוסיפי?…

Materials

Brewer's Yeast	MP Biomedicals, LLC.	903312	http://www.mpbio.com/product.php?pid=02903312
Glucose	Sigma Aldrich	158968-3KG	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/aldrich/158968?lang=en&region=US
Agar	Fisher–Lab Scientific	fly802010	https://www.fishersci.com/shop/products/drosophila-agar-8-100mesh-10kg/nc9349177
Welch's 100% Grape Juice Concentrate	Walmart or other grocery store	9116196	http://www.walmart.com/ip/Welch-s-Frozen-100-Grape-Juice-Concentrate-11.5-oz/10804406
Cage: 32 oz. Translucent Round Deli Container	Webstaurant Store	999L5032Y	http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-sd5032y-32-oz-translucent-round-deli-container-24-pack/999L5032Y.html
Translucent Round Deli Container Lid	Webstaurant Store	999YNL500	http://www.webstaurantstore.com/newspring-delitainer-ynl500-translucent-round-deli-container-lid-60-pack/999YNL500.html
Stock Bottles	Genesee Scientific	32-130	https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=32-130
Droso-Plugs	Genesee Scientific	49-101	https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=49-101
Nylon Mesh	Genesee Scientific	57-102	https://geneseesci.com/shop-online/product-details/715/?product=57-102
Plastic Bushing	Home Depot	100404002	http://www.homedepot.com/p/Carlon-1-in-Non-Metallic-Terminal-Adapter-E943FR-CTN/100404002
Plastic Bushing Cap	Home Depot	100153897	http://www.homedepot.com/p/1-1-4- in-Rigid-Plastic-Insulated-Bushing-2-Pack-27529/100153897
Specimen Cup	MedSupply Partners	K01-207067	http://www.medsupplypartners.com/covidien-specimen-containers.html
Repeater M4	Eppendorf	4982000322	https://online-shop.eppendorf.us/US-en/Manual-Liquid-Handling-44563/Dispensers–Burettes-44566/Repeater-M4-PF-44619.html
50 ml Centrifuge Tubes	TrueLine Centrifuge Tubes	TR2003	https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=TR2003
Food Boxes	USA Scientific	2316-5001	http://www.usascientific.com/search.aspx?find=2316-5001
Lysing Matrix D Bulk	MP Biomedicals, LLC.	116540434	http://www.mpbio.com/search.php?q=6540-434&s=Search
Filter Pipette Tips, 300 μl	USA Scientific	1120-9810	http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1120-9810
Petri Dishes	Laboratory Product Sales	M089303	https://www.lpsinc.com/Catalog4.asp?catalog_nu=M089303
Ethanol	Decon Laboratories, INC.	2701	http://www.deconlabs.com/products.php?ID=88
Paintbrush	Walmart	5133	http://www.walmart.com/ip/Chenille-Kraft-5133-Acrylic-Handled-Brush-Set-Assorted-Sizes-colors-8-Brushes-set/41446005
Forceps	Fisher	08-882	https://www.fishersci.com/shop/products/fisherbrand-medium-pointed-forceps-3/p-128693
Household Bleach (6-8% Hypochlorite)	Walmart	550646751	http://www.walmart.com/ip/Clorox-Concentrated-Regular-Bleach-121-fl-oz/21618295
Universal Peptone	Genesee Scientific	20-260	https://geneseesci.com/shop-online/product-details/?product=20-260
Yeast Extract	Fisher Scientific	BP1422-500	https://www.fishersci.com/shop/products/fisher-bioreagents-microbiology-media-additives-yeast-extract-3/bp1422500?matchedCatNo=BP1422500
Dipotassium Phosphate	Sigma Aldrich	P3786-1KG	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/
Ammonium Citrate	Sigma Aldrich	25102-500g	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/
Sodium Acetate	VWR	97061-994	https://us.vwr.com/store/catalog/product.jsp?catalog_number=97061-994
Magnesium Sulfate	Fisher Scientific	M63-500	https://www.fishersci.com/shop/products/magnesium-sulfate-heptahydrate-crystalline-certified-acs-fisher-chemical-3/m63500?matchedCatNo=M63500
Manganese Sulfate	Sigma Aldrich	10034-96-5	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/
MRS Powder	Sigma Aldrich	69966-500G	http://www.sigmaaldrich.com/catalog/product/sial/69966?lang=en&region=US
96 Well Plate Reader	BioTek (Epoch)	NA	http://www.biotek.com/products/microplate_detection/
1.7 ml Centrifuge Tubes	USA Scientific	1615-5500	http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1615-5500
Filter Pipette Tips, 1,000 μl	USA Scientific	1122-1830	http://www.usascientific.com/search.aspx?find=1122-1830
96 Well Plates	Greiner Bio-One	655101	https://shop.gbo.com/en/usa/articles/
Ceramic Beads	MP Biomedicals, LLC.	6540-434	http://www.mpbio.com/product.php?pid=116540434
Tissue Homogenizer	MP Biomedicals, LLC.	116004500	http://www.mpbio.com/product.php?pid=116004500
Class 1 BioSafety Cabinet	Thermo Scientific	Model 1395	http://www.thermoscientific.com/en/product/1300-series-class-ii-type-a2-biological-safety-cabinet-packages.html

Play Video

PDF

DOWNLOAD MATERIALS LIST

Citer Cet Article

Drosophila Egg Collection and Dechorionation: A Method to Remove the Outermost Egg Layer. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20119, doi: (2023).