Dissecção da glândula linfática larval: Isolando o Órgão Produtor de Hemócitos de Drosophila
Published: April 30, 2023
Abstract
Fonte: Reimels, T. A. e Pfleger, C.M. Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Larvas Drosophila. J. Vis. Exp. (2016).
Este vídeo descreve a glândula linfática drosophila — o local principal da hematopeiese na larva da mosca — e mostra um protocolo de exemplo para dissecar e montar o órgão para imunohistoquímica e imagens fluorescentes.
Protocol
Este protocolo é um trecho de Reimels e Pfleger, Métodos para Examinar a Glândula Linfática e Hemócitos em Drosophila Larvae, J. Vis. Exp. (2016). 1. Imunohistoquímica larval linfática da glândula NOTA: A glândula linfática está localizada aproximadamente um terço de comprimento da extremidade anterior de uma larva ligeiramente abaixo do cérebro no lado dorsal. (Ver seta na Figura 1</str…
Representative Results
Figura 1: Melanização de células de cristal vivo. A) As larvas foram colocadas individualmente em tubos PCR antes do aquecimento. Setas vermelhas indicam larvas que não estão na parte inferior dos tubos. B) Um padrão típico de melanização de células cristalinas após o aquecimento, que às vezes revela a glândula linfática (seta; lado dorsal mostrado, anterior é esqu…
Materials
| PBS tablets | MP Biomedicals | 2810305 | |
| dissecting dish | Corning | 7220-85 | |
| microcentrifuge tube | Denville | C2170 | |
| silicone dissecting pad, made from Sylgard 184 kit | Krayden (distributed through Fisher) | NC9644388 (Fisher catalog number) | Made in petri dish by mixing components of Sylgard elastomer kit according to manufacturer instructions. |
| stereomicroscope | Morrell Instruments (Nikon distributor) | mna42000, mma36300 | Nikon models SMZ1000 and SMZ645 |
| tissue wipe | VWR | 82003-820 | |
| forceps | Electron Microscopy Sciences | 72700-DZ | |
| p200 pipette | Eppendorf | 3120000054 | |
| formaldehyde | Fisher | BP531-500 | |
| Triton | Fisher | BP151-500 | |
| Tween 20 | Fisher | BP337-500 | |
| bovine serum albumin | Rocky Mountain Biologicals | BSA-BSH-01K | |
| normal goat serum | Sigma | G9023-10ML | |
| normal donkey serum | Sigma | D9663-10ML | |
| 200 proof ethanol | VWR | V1001 | |
| N-propyl gallate | MP Biomedicals | 102747 | |
| glycerol | VWR | EM-4750 | |
| DAPI (4',6-diamidino-2-phenylindole) | Fisher | 62248 | |
| microscope cover glass, 18 mm circular | Fisher | 12-545-100 | |
| glass microscope slides | Fisher | 22-034-980 | |
| 24-well plate | Corning | 351147 | |
| disposable transfer pipet | Fisher | 13-711-9AM | |
| fluorescence microscope | Zeiss | Axio Imager.Z1 |
Citer Cet Article
Larval Lymph Gland Dissection: Isolating the Drosophila Hemocyte-Producing Organ. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20117, doi: (2023).