ショウジョウバエ 神経筋接合(NMJ)の定量化:シナプス形態と機能を評価する方法
Published: April 30, 2023
Abstract
出典: Cas地表-Nobau, A., 他. ショウジョウバエ神経筋接合形態のハイスループットおよびマルチパラメトリック定量のための2つのアルゴリズム.J. ヴィス・エクス(2017).
ショウジョウバエ神経筋接合(NMJ)は、シナプスの形態と機能を研究するモデルとして使用されます。このビデオでは、NMJを特徴付けるために研究者が定量化する重要な機能について説明します。このプロトコル例は、自動的に定量化を実行できるソフトウェアを示しています。
Protocol
このプロトコルは、Castells-Nobauらからの抜粋であり、ショウジョウバエNユーロ筋接合形態のハイスループットおよびマルチパラメトリック定量化のための2つのアルゴリズム、J.Vis.(2017). 1. 画像処理前の要件 先に説明したように、第3のインスター放浪幼虫(L3)のショ ウジョウバエ オープンブックの準備を行います。 「ショウジ…
Representative Results
図1:不適切なマクロセグメンテーション結果の例 「ショウジョウバエ NMJモルフォメトリクス」または「ショウジョウバエ NMJブトンモルフォメトリクス」を実行した後の結果画像。シナプス端子の一部は黄色の輪郭(A)には含まれていません。背景の一部は、黄色の輪郭(B)によっ?…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citer Cet Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).