Drosophila Neuromusculaire junction (NMJ) kwantificering: een methode om synaptische morfologie en functie te beoordelen
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Castells-Nobau, A., et al. Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology. J.Vis. Exp. (2017).
De Drosophila neuromusculaire verbinding (NMJ) wordt gebruikt als model om de morfologie en functie van synapsen te bestuderen. Deze video beschrijft belangrijke kenmerken die onderzoekers kwantificeren om de NMJ te karakteriseren. Het voorbeeldprotocol demonstreert een software die de kwantificering automatisch kan uitvoeren.
Protocol
Dit protocol is een uittreksel uit Castells-Nobau et al., Two Algorithms for High-throughput and Multi-parametric Quantification of Drosophila Neuromuscular Junction Morphology, J. Vis. Exp. (2017). 1. Vereisten voorafgaand aan beeldverwerking Voer Drosophila open boekpreparaten uit van derde instar zwervende larven (L3), zoals eerder beschreven. Co-immunolabel Drosophila NMJ terminals met behulp van een combinatie van twee mark…
Representative Results
Figuur 1: Voorbeelden van ongepaste macrosegmentatieresultaten. Resultaat afbeeldingen na het uitvoeren van “Drosophila NMJ Morphometrics” of “Drosophila NMJ Bouton Morphometrics”. Delen van de synaptische terminal zijn niet opgenomen in de gele omtrek (A). Delen van de achtergrond worden in de synaptische terminal opgenomen door de gele omtrek (B). Blauwe skeletlijn str…
Materials
| Immunostaining | Dilution | ||
| Mouse anti-discs large 1 | Developmental Studies Hybridoma Bank | AFFN-DLG1-4D6 | 1/25 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Rabbit anti-horseradish peroxidase | Jackson IR | 323-005-021 | 1/500 |
| Rabbit anti-Synaptotagmin | Gift from Hugo Bellen | Jan-00 | |
| Mouse anti-Cysteine string protein | Developmental Studies Hybridoma Bank | DCSP-1(ab49) | 1/10 (conjungated using the Zenon Alexa Fluor 528 Labeling Kit) |
| Mouse anti-Bruchpilot | Developmental Studies Hybridoma Bank | nc82 | Jan-50 |
| Goat anti-mouse Alexa Fluor 488 | Life technologies | A11029 | 1/200 |
| Goat anti-rabbit Alexa Fluor 568 | Life technologies | A11011 | 1/500 |
| Zenon Alexa Fluor 568 Mouse IgG1 Labeling Kit | ThermoFisher | Z25006 | |
| ProLong Gold Antifade Mountant | ThermoFisher | P36930 | |
| Equipment | |||
| Confocal microscope or fluorescence microscope | Leica SP5 | ||
| Zeiss Axio imager | |||
| Computer | Mac or Pc | ||
| Software | |||
| FIJI |
Citer Cet Article
Drosophila Neuromuscular Junction (NMJ) Quantification: A Method to Assess Synaptic Morphology and Function. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20107, doi: (2023).