Volwassen Drosophila-hersenen monteren: een methode om dia's voor confocale beeldvorming voor te bereiden
Published: April 30, 2023
Abstract
Bron: Kelly, S.M., et al. Dissectie en immunofluorescente kleuring van mushroom body en fotoreceptor neuronen in volwassen drosophila melanogaster hersenen. J.Vis. Exp. (2017).
Deze video beschrijft een methode om intacte hersenen van volwassen vliegen onder een brugschuif te monteren en toont het protocol dat wordt uitgevoerd op immunostained hersenen voor fluorescerende microscopie.
Protocol
Dit protocol is een fragment uit Kelly et al., Dissectie en immunofluorescente kleuring van mushroom body en fotoreceptor neuronen in volwassen drosophila melanogaster hersenen, J. Vis. Exp. (2017). 1. Montage volwassen D. melanogaster hersenen op microscoop dia’s en beeldvorming Bouw een “brug” glijbaan. Plaats twee “base” coverslips ongeveer 1 cm uit elkaar op een positief geladen dia. Zorg ervoor dat de positief geladen kant van de dia naar bove…
Representative Results
Figuur 1: Het monteren van hersenen ter voorbereiding op immunofluorescentie beeldvorming. (A) Hersenen zijn gemonteerd op SuperFrost Plus-dia’s met een brugdeksel om afvlakking van de hersenen te voorkomen. Twee “base” cover slips worden aan een Superfrost Plus positief geladen glijbaan met duidelijke vingernagellak gelijmd en ontleedde hersenen worden vervolgens op de glijbaan ertussen geplaatst. Een du…
Materials
| Microdissection forceps/tweezers | Ted Pella | 505-NM | |
| VectaShield | Vector Labs | H-1000 | |
| SuperFrost Plus Slides | ThermoFisher | 99-910-01 | |
| Coverslips | ThermoFisher | 12-553-454 | |
| fingernail polish | Electron Microscope Services (EMS) | 72180 | |
| stereomicroscope | Leica S6D with KL300 LED light source | ||
| Kimwipe | Fisher | 06-666 |
Citer Cet Article
Mounting Adult Drosophila Brains: A Method to Prepare Slides for Confocal Imaging. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20106, doi: (2023).