Canlı Manyetik Rezonans Spektroskopisi Drosophila melanogaster Magic Açısı İplik kullanarak
Summary
Bu teknik, canlı moleküler karakterizasyonu için yüksek çözünürlüklü sihirli açısı proton MR spektroskopi (HRMAS 1H-MRS) iplik kullanımını sağlar<em> Drosophila melanogaster</em> Geleneksel 14.1 tesla spektrometre ile bir HRMAS sonda ile donatılmıştır.
Abstract
Yüksek Çözünürlüklü Magic Açısı İplik (HRMAS) proton manyetik rezonans spektroskopi (<sup> 1</sup> H-MRS), spektral çizgi genişlikleri artırır ve özleri, sağlam hücreler, hücre kültürleri, ve daha da önemlisi sağlam doku elde edilecek yüksek çözünürlüklü spektrumları metabolitleri ve hücresel süreçler arasındaki ilişkileri araştırmak için izin veren bir roman tahribatsız bir tekniktir.<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS çalışmaları henüz canlı meyve sineği rapor edilecek<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila</em> Basit bir genetik bir organizma olarak, bütün organizma düzeyinde incelenmesi gereken çok sayıda biyolojik fonksiyonları ve çeşitli evrimsel olarak korunmuş sinyal yolakları sağlar ve genetik ve fizyoloji araştırmak için kullanışlı bir modeldir. Bu amaçla, geliştirilen ve uygulanan<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS yöntemi canlı araştırmak için<em> Drosophila</em> Burada 14.1 T., biz bir HRMAS anahat<sup> 1</sup> H-MRS protokolü moleküler karakterizasyonu için<em> Drosophila</em> Bir HRMAS prob ile donatılmış bir konvansiyonel MR spektrometre. Bu teknik, bir roman<em> In vivo</em> Tahribatsız<em> Drosophila</emHastalığı biyobelirteçleri belirlenmesini sağlar ve böylece> metaboliti ölçüm yaklaşımı, terapötik gelişimine katkıda bulunabilir.
Protocol
Discussion
Son meyve in vivo MRG fizibilite raporu istisna ile 6 uçar, Drosophila de vivo MRS çalışmalarında henüz bildirilmiştir değil. İşbu Protokol, biyolojik olarak önemli moleküller tespit etmek için in vivo HRMAS 1 H-MRS yaklaşımı bir roman uygulanması açıklanmaktadır. Özellikle, biz sıfır sinek ölüm elde ederken, lipidler ve canlı Drosophila küçük metabolitleri yeterli edinimi süresi, yaklaşık 45 dakika, 14.1…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma, Laurence G. Rahme Ulusal Sağlık Enstitüleri (NIH) hibe AI063433, Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika Müdürü Sağlık Ulusal Enstitüsü Enstitüleri (NIH) Merkezi Grant (P50GM021700) tarafından kısmen desteklenmiştir. Çocuklar araştırma bursu (8893) A. Aria Tzika NMR çekirdek) ve Shriner Hastanesi. Biz Dionyssios Mintzopoulos doktora teşekkür Bu protokol ve Ovidiu C. Andronesi doktora geliştirme ilk aşamalarında yardım için TOBSY darbe dizisi ile ilgili yardım için.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
- Fan, T. W. M. Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures. Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).
- Null, B., Liu, C. W., Hedehus, M., Conolly, S., Davis, R. W. High-resolution, in vivo magnetic resonance imaging of Drosophila at 18.8 Tesla. PLoS One. 3, e2817-e2817 (2008).
- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
