Espectroscopia de Resonancia Magnética de vivir Drosophila melanogaster Utilizando Spinning Magic ángulo
Summary
Esta técnica permite el uso de ángulo mágico de alta resolución girar espectroscopia de resonancia magnética (HRMAS 1H-MRS) para la caracterización molecular de vivir<em> Drosophila melanogaster</em> Con un espectrómetro convencional de 14,1 teslas equipado con una sonda HRMAS.
Abstract
De alta resolución Magic Angle Spinning (HRMAS) espectroscopia de resonancia magnética de protones (<sup> 1</sup> H-MRS) es una novela técnica no destructiva que mejora espectral anchos de línea y permite a los espectros de alta resolución que se obtiene a partir de extractos, las células intactas, cultivos celulares y de tejidos más importante intacta para investigar las relaciones entre los metabolitos y los procesos celulares.<em> En vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS estudios aún no se han reportado en la mosca de la fruta en vivo<em> Drosophila melanogaster.</em><em> Drosophila,</em> Como un organismo más simple genética, permite las múltiples funciones biológicas y conservado evolutivamente distintas vías de señalización que se examinarán en el nivel de todo el organismo y es un modelo útil para la investigación genética y la fisiología. Con este fin, hemos desarrollado e implementado un<em> In vivo</em> HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS método para investigar en vivo<em> Drosophila</em> En el 14,1 T. A continuación, se describe un HRMAS<sup> 1</sup> H-MRS protocolo para la caracterización molecular de<em> Drosophila</em> Con un espectrómetro convencional de RM equipado con una sonda HRMAS. Esta técnica es una novela,<em> In vivo,</em> No destructivos<em> Drosophila</emEnfoque> medición de metabolitos, lo que permite la identificación de biomarcadores de enfermedades y por lo tanto puede contribuir al desarrollo de terapéuticas novedosas.
Protocol
Discussion
Con la excepción del reciente informe de la viabilidad de la resonancia magnética in vivo en moscas de la fruta 6, los estudios in vivo MRS en Drosophila aún no han sido reportados. En el presente Protocolo, se describe la implementación de una novela en vivo HRMAS 1 H-MRS enfoque para la detección de moléculas biológicamente importantes. En concreto, se detectaron metabolitos de los lípidos y los pequeños viven en moscas Drosophila en …
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado en parte por los Institutos Nacionales de Salud (NIH) otorgar AI063433 a Laurence G. Rahme, de los Institutos Nacional de Salud (NIH) Centro de Donación (P50GM021700) a Ronald G. Tompkins (A. Aria Tzika, Director de el núcleo de RMN), y el Hospital Shriner una beca de investigación para la Infancia (# 8893) para A. Aria Tzika. Damos las gracias a Dionyssios Mintzopoulos Ph.D. de asistencia en las fases iniciales del desarrollo de este protocolo y Ovidiu C. Andronesi Ph.D. para obtener ayuda con la secuencia de pulsos TOBSY.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
- Fan, T. W. M. Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures. Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).
- Null, B., Liu, C. W., Hedehus, M., Conolly, S., Davis, R. W. High-resolution, in vivo magnetic resonance imaging of Drosophila at 18.8 Tesla. PLoS One. 3, e2817-e2817 (2008).
- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
