Магнитно-резонансной спектроскопии живых Дрозофилы С помощью магии прядильной Угол
Summary
Эта технология позволяет использовать с высоким разрешением магическим углом спиннинг протона МР-спектроскопия (HRMAS 1H-MRS) для молекулярных характеристик живых<em> Дрозофилы</em> С обычными 14,1 тесла спектрометр оснащен датчиком HRMAS.
Abstract
Высокого разрешения магическим углом Спиннинг (HRMAS) протонной магнитно-резонансной спектроскопии (<sup> 1</sup> Н-MRS) является новым неразрушающий метод, который улучшает спектральную линию, ширины и позволяет спектров высокого разрешения, которые будут получены экстракты, интактных клеток, клеточных культур, и что более важно неповрежденной ткани для исследования взаимоотношений между метаболитов и клеточных процессов.<em> В естественных условиях</em> HRMAS<sup> 1</sup> Н-MRS исследования до сих пор не сообщалось в живой плодовой мухи<em> Дрозофилы.</em><em> Дрозофилы,</em> Как простой генетический организм, позволяет несколько биологических функций и различных эволюционно консервативных сигнальных путей, которая будет рассмотрена на весь уровень организма и является полезной моделью для исследования генетики и физиологии. С этой целью мы разработали и внедрили<em> В естественных условиях</em> HRMAS<sup> 1</sup> Н-MRS метод для исследования живых<em> Drosophila</em> В 14,1 Т. Здесь мы опишем HRMAS<sup> 1</sup> Н-MRS протокол для молекулярная характеристика<em> Drosophila</em> С обычными спектрометра MR оснащена датчиком HRMAS. Эта техника роман,<em> В живом организме,</em> Неразрушающего<em> Drosophila</em> Метаболита подход измерения, который позволяет выявлять болезнь биомаркеров и таким образом может способствовать развитию новых терапевтических.
Protocol
Discussion
За исключением последнего доклада возможности в естественных условиях МРТ у плодовых мушек 6, в естественных условиях MRS исследования у дрозофилы до сих пор не сообщалось. В настоящее время протокол, мы описываем реализацию романа в естественных условиях HRMAS <su…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была выполнена при частичной поддержке Национального института здоровья (NIH) предоставлять AI063433 к Лоуренс Г. Rahme, Национального института Институтов Здоровья (NIH) Центр Грант (P50GM021700) Рональда Г. Томпкинс (А. Ария Tzika, директор основные ЯМР), и больница Шрайнер по делам детей исследовательского гранта (# 8893) А. Ария Tzika. Мы благодарим Dionyssios Mintzopoulos кандидат за помощь в начальные фазы развития этого протокола и Овидиу С. Andronesi кандидат за помощь в TOBSY импульсной последовательности.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Deuterium oxide | Reagent | Sigma-Aldrich | 7789-20-0 | |
| 3-(trimethylsilyl)propionic-2,2,3,3-d4 acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 24493-21-8 | |
| agar, sucrose, yeast, cornmeal | Food | Genesee Scientific Corporation | http://www.flystuff.com/ | |
| Oregon RS or Canton-S flies | Adult fly lines | Bloomington Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/ | |
| Paintbrush | Equipment | (size 0) | ||
| 2ml tubes | Equipment | Fisher Scientific | K749521-1590 | |
| Fly incubators | Equipment | high humidity capacity (60-75%), adjustable temperature, and a 12 h:12 h light: dark cycle. | ||
| Bruker Bio-Spin Avance NMR spectrometer (600.13 MHz) 4mm triple resonance (1H, 13C, 2H) HRMAS probe | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| BTO-2000 unit in combination with a MAS pneumatic unit | Equipment | Bruker Bio-Spin | ||
| 4mm zirconium oxide rotor (capacity 50 ul) | Equipment | Bruker Bio-Spin | B3829 (Bruker store) | |
| MestReC (Mestrelab Research) | Software | 1D NMR spectra analysis http://mestrelab.com/ |
||
| SPARKY 3, USCF | Software | 2D NMR spectra
analysis
http://www.cgl.ucsf.edu/home/sparky/ |
References
- Apidianakis, Y., Rahme, L. G. Drosophila melanogaster as a model host for studying Pseudomonas aeruginosa infection. Nat Protoc. 4, 1285-1294 (2009).
- Meiboom, S., Gill, D. Modified spin-echo method for measuring nuclear relaxation time. Rev Sci Instrum. 29, 688-691 (1958).
- Andronesi, O. C., Mintzopoulos, D., Struppe, J., Black, P. M., Tzika, A. A. Solid-state NMR adiabatic TOBSY sequences provide enhanced sensitivity for multidimensional high-resolution magic-angle-spinning 1H MR spectroscopy. J Magn Reson. 193, 251-258 (2008).
- Astrakas, L. G. Proton NMR spectroscopy shows lipids accumulate in skeletal muscle in response to burn trauma-induced apoptosis. Faseb J. 19, 1431-1440 (2005).
- Fan, T. W. M. Metabolite profiling by one- and two dimensional NMR analysis of complex mixtures. Prog Nuc Magn Reson Spec. 28, 161-219 (1996).
- Null, B., Liu, C. W., Hedehus, M., Conolly, S., Davis, R. W. High-resolution, in vivo magnetic resonance imaging of Drosophila at 18.8 Tesla. PLoS One. 3, e2817-e2817 (2008).
- Zektzer, A. S. Improved signal to noise in high-resolution magic angle spinning total correlation spectroscopy studies of prostate tissues using rotor-synchronized adiabatic pulses. Magn Reson Med. 53, 41-48 (2005).
