Isolierung von Maus Bauchhöhle Cells
Summary
Die Bauchhöhle bei Säugetieren enthält verschiedene Immunzellen Bevölkerung entscheidend für angeborenen Immunantwort. Eine effiziente Isolierung Methode ist für biochemische und funktionelle Analyse dieser Zellen erforderlich ist. Hier bieten wir eine umfassende Methode zur Isolierung von Bauchhöhle Zellen in der Maus.
Abstract
Die Bauchhöhle ist eine Membran-gebundene und mit Flüssigkeit gefüllte Bauchhöhle von Säugetieren, die die Leber, die Milz, die meisten von den Magen-Darm-Trakt und anderen Innereien enthält. Es birgt eine Reihe von Immunzellen einschließlich Makrophagen, B-Zellen und T-Zellen. Die Anwesenheit einer großen Zahl von naiven Makrophagen in die Bauchhöhle macht es zu einem bevorzugten Standort für die Sammlung von naiven Gewebe Makrophagen (1). Die Bauchhöhle ist auch wichtig, die Studie von B-Zellen durch die Anwesenheit eines einzigartigen Bauchhöhle ansässige B-Zell-Untergruppe als B1-Zellen zusätzlich zur konventionellen B2-Zellen bekannt. B1-Zellen werden in B1a und B1b-Zellen, die durch die Oberflächenexpression von CD11b und CD5 unterschieden werden können unterteilt. B1-Zellen sind eine wichtige Quelle der natürlichen IgM frühzeitige Schutz vor einer Vielzahl von Erregern (2-4). Diese Zellen sind autoreaktive in der Natur (5), sondern wie sie kontrolliert werden, um Autoimmunität zu verhindern, ist noch nicht vollständig verstanden. Im Gegenteil, CD5<sup> +</sup> B1a-Zellen besitzen einige regulatorische Eigenschaften durch ihre IL-10 produzieren Kapazität (6). Daher sind Bauchhöhle B1-Zellen eine interessante Zellpopulation aufgrund ihrer unterschiedlichen Funktion und viele unadressierte Fragen mit ihrer Entwicklung und Regulierung verbundenen studieren. Die Isolierung der Bauchhöhle ansässigen Immunzellen ist wegen des Fehlens einer definierten Struktur im Inneren der Bauchhöhle tricky. Unser Protokoll beschreibt ein Verfahren zur Gewinnung von lebensfähigen Immunzellen aus der Bauchhöhle von Mäusen, die dann für phänotypische Analyse mittels Durchflusszytometrie und für verschiedene biochemische und immunologische Tests eingesetzt werden kann.
Protocol
Discussion
Isolation der Bauchhöhle Zellen ist eine wichtige Technik für die Untersuchung von verschiedenen Immunzellen, vor allem Makrophagen und spezifische B-Zell-Subpopulationen. Obwohl dies ein einfacher Vorgang, es gibt einige wichtige Schritte beteiligt. Vorhandensein von kontaminierenden Blut in den gesammelten Proben sollte vermieden werden, um eine reine Bauchhöhle Zellpopulation zu erhalten. Euthanasie durch Genickbruch sollte sorgfältig durchgeführt werden, um Kontamination mit Blut in der Bauchhöhle zu vermeiden. Alternativ CO 2 eingesetzt werden kann. Darüber hinaus sollte im Laufe des Verfahrens die richtige Pflege genommen, um zu vermeiden Punktion der Blase oder anderer Organe in der Bauchhöhle werden. Wiederherstellen meisten der injizierten Flüssigkeit ist auch wichtig, um die Zelle zu erhalten.
Dieses Verfahren ist weit verbreitet, um Makrophagen Biologie seit moderate Zahl der Einwohner studieren, können nicht stimulierten Makrophagen leicht aus der Bauchhöhle gewonnen werden, im Gegensatz zu den mühsamen Aufgabe der Differenzierung myeloischer Vorläuferzellen zu reifen Makrophagen in vitro mit Makrophagen-Kolonie-stimulierender Faktor (8 , 9). Die Makrophagen-Ausbeute aus der Bauchhöhle kann durch die Verwendung der Thioglycolat Erhebung Methode verbessert werden, obwohl Thioglycolat Nutzung physiologischen Eigenschaften der Makrophagen (7) verändern könnten.
B-Zellen sind ein wichtiger Teil unseres Immunsystems spielen eine entscheidende Rolle bei angeborenen und erworbenen Immunität. Unter den verschiedenen B-Zell-Subpopulationen umfassen B1-Zellen eine einzigartige Subpopulation von B-Zellen in der angeborenen Immunität, Autoimmunität und Immunregulation beteiligt. B1-Zellen sind in erster Linie in der Bauchhöhle und sind selbst Nachfüllen. Sie sind einer der wichtigsten Produzenten von natürlichen IgM, die die erste Verteidigungslinie gegen eine Reihe von Viren und Bakterien (10-12) zur Verfügung stellt. B1-Zellen sind auch eine wichtige Quelle von IL-10 (6), die eine wichtige Zytokin in der Immunregulation beteiligt ist. Obwohl mehrere Studien mit dem B1-Zellen ausgeübt worden sein, noch gibt es Spielraum für die weitere Auswertung ihrer gegensätzlichen Funktionen, die speziell ihre regulatorische Rolle. Bauchhöhle Zellisolation Methode bietet die einzigartige Möglichkeit, die Funktionen des B1-Zellen zu studieren.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde teilweise durch NIH AI069358 und die BloodCenter Research Foundation unterstützt.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Thioglycollate Medium, Brewer Modified | BD BBL | 211716 |
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