माउस तंत्रिका ऊतक से सिंगल सेल निलंबन का सृजन
Summary
विशिष्ट प्रकार के ऊतकों से अलग कोशिकाओं ऊतक aggitation के लिए विशिष्ट मानकों व्यवहार्य, कृषि कोशिकाओं की एक उच्च मात्रा प्राप्त करने के लिए की आवश्यकता है. Miltenyi gentleMACS Dissociator एक सरल, व्यावहारिक प्रोटोकॉल के साथ इस कार्य का अनुकूलन. इस प्रकाशन में nerual ऊतक पर इस उपकरण का उपयोग समझाया गया है.
Abstract
तंत्रिका तंत्र के भीतर neuronal और glial सेल प्रकार के सैकड़ों का वर्णन किया गया है. मस्तिष्क या स्पाइनल कॉर्ड में प्रत्येक विशिष्ट कक्ष प्रकार कोशिका की सतह अणु, या आणविक निर्धारकों, जिसके माध्यम से वह और पहचाना जा सकता है विशेषता के एक प्रदर्शनों की सूची है. वर्तमान में, मजबूत सेल पहचान और जुदाई प्रौद्योगिकियों एकल सेल की तैयारियाँ जबकि एक साथ सेल और विशेषता सतह प्रोटीन की मौत विनाश सीमित उत्पन्न करने के लिए आवश्यकता होती है. gentleMACS Dissociator, जब trypsin या papain आधारित हदबंदी किट के साथ संयोजन में उपयोग किया है, और प्रभावी ढंग से और धीरे मस्तिष्क के ऊतकों को अलग कर देना जबकि प्रतिजन epitopes के संरक्षण और सेल हानि को सीमित कर सकते हैं. एकल कक्ष निलंबन के मानकीकृत तैयारी सी ट्यूब और अनुकूलित, प्रीसेट gentleMACS प्रोग्राम्स का उपयोग करने के लिए हासिल की है. एक बार उत्पन्न, एकल कक्ष निलंबन विरोधी Prominin 1 microbeads, जो तंत्रिका progenitors की पहचान, या आगे शुद्ध Myelin निकालना मोती का उपयोग तरह मोनोक्लोनल conjugates के साथ इलाज किया जा सकता है.
Protocol
Discussion
gentleMACS Dissociator एक बंद व्यवस्था में तंत्रिका ऊतकों से मानकीकृत एकल कक्ष निलंबन की तैयारी की सुविधा है. तंत्रिका ऊतक हदबंदी किट प्रतिजन immunostainings और immunomagnetic सेल 1-5 जुदाई की तरह आगे अनुप्रयोगों के लिए की जरूरत epitopes के संरक्षण के लिए अनुकूलित कर रहे हैं. इस प्रोटोकॉल में हम माउस gentleMACS Dissociator और तंत्रिका ऊतक हदबंदी किट (पी) का उपयोग कर मस्तिष्क के कोमल एंजाइमी हदबंदी दिखाने के लिए, 97% की व्यवहार्य कोशिकाओं में उपज. 6 5×10 और 1×10 मेजबान ऊतक की उम्र के आधार पर 7 कोशिकाओं, तंत्रिका ऊतक के बीच पैदावार के 100 मिलीग्राम है. लक्षित Prominin 1 + कोशिकाओं विरोधी Prominin-1 microbeads का उपयोग कर अलग थे और बाद में संस्कृति में ले लिया. प्रोटोकॉल Myelin निकालना मोती के अतिरिक्त उपयोग के साथ और भी अधिक प्रभावी हो सकता है जब चूहों> P7 से व्युत्पन्न तंत्रिका ऊतक के साथ काम करने के लिए दिखाया गया है.
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Materials
References
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