Homarus Americanus Stomatogastric dissezione del Sistema Nervoso
Summary
Descriviamo la dissezione di precisione del sistema nervoso stomatogastric dallo stomaco del aragosta americana (<i> Homarus americanus</i>).
Abstract
Con l'obiettivo di comprendere come i sistemi nervoso produrre attività e rispondere con l'ambiente, i neuroscienziati rivolgersi a sistemi di modelli che presentano le attività di interesse e sono accessibili e suscettibili di metodi sperimentali. Il sistema nervoso stomatogastric (STNS) della aragosta americana (<i> Homarus americanus</i>, È stato anche conoscere l'aragosta atlantica o Maine) è stata stabilita come sistema modello per studiare il ritmo generare reti e neuromodulazione delle reti. Il STNS è composta da 3 gangli anteriori (2 gangli commissurali e un ganglio esofageo), che contiene i neuroni che modulatori progetto centrale per il ganglio stomatogastric (STG). La STG contiene circa 30 neuroni che formano due reti disegno centrale generazione, le reti pilorica e gastriche che sono alla base comportamenti alimentari nei crostacei<sup> 1,2</sup>. Mentre è possibile studiare questo sistema<i> In vivo</i<sup> 3</sup>, Il STNS continua a produrre la sua attività ritmica quando isolato<i> In vitro</i>. Isolamento fisico della STNS in un piatto permette un facile accesso al somata nei gangli di registrazioni elettrofisiologiche intracellulari e ai nervi del STNS per le registrazioni extracellulari. Isolare il STNS è un processo in due parti. La prima parte, sezionare lo stomaco dall'animale, è descritto in un articolo che accompagna il video<sup> 4</sup>. In questo articolo video, tecniche di dissezione fini sono utilizzati per isolare il STNS dallo stomaco. Questa procedura si traduce in una preparazione del sistema nervoso che è disponibile per le registrazioni elettrofisiologiche.
Protocol
Discussion
L'anatomia dello stomaco aragosta e STNS è stata ben descritta in precedenza 5,6, e le variazioni di questa procedura dissezione sono state utilizzate in numerosi studi. Si consiglia di acquisire familiarità con l'anatomia dello stomaco 5-7 e STNS 5,8 prima di dissezioni all'inizio. Tale familiarità diminuisce il rischio di danni accidentali ai nervi e tessuti.
Per mantenere la salute della preparazione, è fondamentale per mantenere la preparazione a temperatura fresca. Questo è facilmente ottenibile scambiando le saline ogni 30 minuti con 4 ˚ C salina conservato in frigorifero. Quando immerso in soluzione fisiologica fredda, la preparazione isolato STNS è vitale per molte ore. Registrazioni nei relativi gammarus Homarus hanno dimostrato stabile attività ritmica dalla STG tutto 5 giorni in vitro 9; robustezza simile è stato visto in H. americanus (pers. obs.).
Ingresso di modulazione alla STG dai gangli commissurali è tenuto a conservare gli schemi motori in corso. Pertanto, per mantenere una normale attività ritmica questi gangli e il figlio di ioni e nervi stn deve essere mantenuta intatta. La dissezione descriviamo conserva nervi motori diversi (contenente gli assoni dei motoneuroni): il s AGN (contenente Mulino gastrica (GM) assoni), il mvn s (contenente gastrica laterale (LG) e Inferiore cardiaca (IC) assoni), il pyn s (contenente pilorica neurone (PY) assoni), la s PDN (contenente dilatatore pilorica (PD) assoni), e la s LVN (contenente pilorica laterale (LP), gastrica mediale (MG), gli assoni GPL così come quelli di GM, PD e PY). Da dissezione aggiuntivi (o diverso) i nervi, gli altri gli assoni dei neuroni motori possono essere registrate. Ogni singola tipologia di assoni dei motoneuroni possono essere registrate individualmente da dissezione e la registrazione dal nervose che innervano il muscolo a cui quel tipo di progetti neurone.
Questa preparazione può essere utilizzato per una varietà di studi si sono concentrati sulla funzione del sistema nervoso. L'attività dei neuroni può essere registrata usando intracellulare, registrazioni elettrodo affilato da somata o assoni, o registrando impulsi elettrici extracellulare dai nervi. Molti canali ionici nei neuroni STG sono state parzialmente clonato e mRNA può essere misurata dal manualmente tirato somata 10,11.
Acknowledgements
Vogliamo ringraziare il nostro consulente, il dottor Eve Marder. Questa ricerca è stata finanziata dal National Institute of concede Salute NS17813 a Eve Marder e NS059255 di AE T.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Fine Tungsten Wire (0.001 in. diameter) | Tool | California Fine Wire | Cut into 1-2mm pieces to use as fine pins. | |
| Forceps #5 | Tool | FST | 91150-20 | |
| Minuten Pins | Tool | FST | 26002-10 | |
| Moria Spring Scissors (7mm blades) | Tool | FST | 15370-52 | These are the top of the line. There are more economical spring scissors available from the same company. |
| Petri Dish (100x15mm) | Tool | Fischer | 08-757-12 | Fill 2-4mm with Sylgard 182. |
| Sylgard 182 | Other | Dow Corning | 182 | |
| Pin Holder | Tool | FST | 26018-17 | Optional. Desheathing can be done with scissors and fine forceps alone. |
| Super fine forceps #5SF | Tool | FST | 11252-00 | |
| Tungsten Needles | Tool | FST | 10130-05 | Optional. Desheathing can be done with scissors or with pins cut from fine tungsten wire. |
| Dissection microscope |
References
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