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Recopilación rutinaria de conjuntos de datos crio-EM de alta resolución utilizando un microscopio electrónico de transmisión de 200 KV
JoVE Revista
Bioquímica
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JoVE Revista Bioquímica
Routine Collection of High-Resolution cryo-EM Datasets Using 200 KV Transmission Electron Microscope
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Recopilación rutinaria de conjuntos de datos crio-EM de alta resolución utilizando un microscopio electrónico de transmisión de 200 KV

DOI:
10.3791/63519-v

•

09:49 min

•

March 16, 2022

•

, , , , , , , , ,
1Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific, 2Max Planck Institute of Biochemistry, Molecular Structural Biology, 3Materials and Structural Analysis Division,Thermo Fisher Scientific

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 01:27Grid Loading, Mapping, and Selection of Best Cryo-EM Grids for Data Collection
  • 02:36Setting up a Data Collection Session in the Single Particle Analysis Software
  • 05:44Final Microscope Alignments Before Starting Data Collection
  • 07:15Results: Gallery of Grids, Cryo-EM Reconstruction of Apo-Ferritin, and Effect of Energy Filtering on Cryo-EM Images
  • 08:56Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Los mapas crio-EM de alta resolución de macromoléculas también se pueden lograr mediante el uso de microscopios TEM de 200 kV. Este protocolo muestra las mejores prácticas para establecer alineaciones ópticas precisas, esquemas de adquisición de datos y selección de áreas de imágenes que son esenciales para la recopilación exitosa de conjuntos de datos de alta resolución utilizando un TEM de 200 kV.

Tags

Cryo-EM200 KV TEMHigh-resolutionProtein StructureProtein ComplexesMolecular MechanismsStructure-based Drug DesignApoferritinProteasomeAuto GridsLiquid NitrogenAutomated Data CollectionAtlasEPU

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