Journal
/
/
בדיקה סלולרית מבוססת כתב לניטור יעילות חיבור
JoVE Revista
Bioquímica
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido.  Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
JoVE Revista Bioquímica
A Reporter Based Cellular Assay for Monitoring Splicing Efficiency
DOI:

08:53 min

September 15, 2021

, ,

Capítulos

  • 00:04Introduction
  • 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
  • 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
  • 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
  • 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
  • 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
  • 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
  • 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
  • 08:09Conclusion

Summary

Traducción Automática

פרוטוקול זה מתאר בדיקה עיתונאית minigene כדי לפקח על ההשפעה של מוטציות באתר 5-splice באתר על חיבור ומפתח מדכא U1 snRNA להצלת עיכוב חיבור המושרה מוטציה. הכתב והמדכא U1 snRNA מבנים באים לידי ביטוי בתאי HeLa, ו splicing מנותח על ידי הרחבת פריימר או RT-PCR.

Videos relacionados

Read Article