/
/
Een op reporter gebaseerde cellulaire test voor het bewaken van splicing-efficiëntie
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Capítulos
- 00:04Introduction
- 00:31Cotransfection of HeLa Cells with the Reporter and U1 Small Nuclear RNA (snRNA) Plasmids
- 02:0032P-Labeling of Oligonucleotides
- 02:52Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Primer Extension
- 03:53Analysis of the Spliced Reporter Transcripts by Fluorescent RT-PCR
- 05:08Analysis of Variant U1 snRNA Expression by RT-qPCR
- 05:38Setup and Running of Urea-PAGE Gels
- 06:27Results: Reporter Based Splicing Efficiency of U1 snRNA Constructs
- 08:09Conclusion
Dit protocol beschrijft een minigene reporter assay om de impact van 5'-splice site mutaties op splicing te monitoren en ontwikkelt suppressor U1 snRNA voor de redding van mutatie-geïnduceerde splicing remming. De reporter en suppressor U1 snRNA constructen worden uitgedrukt in HeLa cellen, en splicing wordt geanalyseerd door primer extensie of RT-PCR.
