/
/
Быстрые ферментативные методы амплификации минимальных линейных шаблонов для прототипирования белка с использованием бесклеточных систем
Se requiere una suscripción a JoVE para ver este contenido. Inicie sesión o comience su prueba gratuita.
Capítulos
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
В исследовании описывается протокол создания больших (мкг-мг) количеств ДНК для кампаний скрининга белка из синтетических фрагментов генов без клонирования или использования живых клеток. Минимальный шаблон ферментативно переваривается и циркулируется, а затем усиливается с помощью изотермического усиления скользящего круга. Реакции бесклеточной экспрессии могут быть выполнены с неочищенным продуктом.
