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सेल-फ्री सिस्टम का उपयोग करके प्रोटीन प्रोटोटाइप के लिए न्यूनतम, रैखिक टेम्पलेट्स के प्रवर्धन के लिए रैपिड, एंजाइमेटिक तरीके
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Capítulos
- 00:05Introduction
- 00:42Amplifying the Gene Fragment via PCR
- 02:21Digestion and Circularization
- 03:28Isothermal Rolling Circle Amplification (RCA)
- 04:28Cell-free Reaction and Subtilisin Assay
- 05:41Results: Protein Expression from the Rolling Circle Amplification (RCA) Templates Using Cell-Free Systems
- 06:49Conclusion
अध्ययन क्लोनिंग या जीवित कोशिकाओं का उपयोग कर के बिना सिंथेटिक जीन के टुकड़े से प्रोटीन स्क्रीनिंग अभियानों के लिए डीएनए की बड़ी (μg-मिलीग्राम) मात्रा बनाने के लिए एक प्रोटोकॉल का वर्णन करता है । न्यूनतम टेम्पलेट को एंजाइमेटिक रूप से पचाने और गोलाकार किया जाता है और फिर आइसोथर्मल रोलिंग सर्कल प्रवर्धन का उपयोग करके परिलक्षित किया जाता है। सेल-मुक्त अभिव्यक्ति प्रतिक्रियाओं को अशुद्ध उत्पाद के साथ किया जा सकता है।
