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Monitoramento de interações proteína-ligantes em células humanas por NMR quantitativo em tempo real usando um bioreator de alta densidade celular
JoVE Revista
Quimica
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JoVE Revista Quimica
Monitoring Protein-Ligand Interactions in Human Cells by Real-Time Quantitative In-Cell NMR using a High Cell Density Bioreactor

Monitoramento de interações proteína-ligantes em células humanas por NMR quantitativo em tempo real usando um bioreator de alta densidade celular

DOI:
10.3791/62323-v

•

10:25 min

•

March 09, 2021

•

,
1Magnetic Resonance Center − CERM,University of Florence, 2Consorzio Interuniversitario Risonanze Magnetiche di Metalloproteine − CIRMMP, 3Neurofarba Department,University of Florence

Capítulos

  • 00:05Introduction
  • 00:47Bioreactor Setup
  • 01:34Preparation of the Cell Sample
  • 04:03Bioreactor Operation and NMR Experiments
  • 06:00MCR-ALS Analysis
  • 08:06Results: Monitoring Protein-Ligand Interactions by Real-Time Quantitative In-Cell NMR
  • 09:48Conclusion

Summary

Traducción Automática

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Este protocolo descreve a configuração de um bioreator NMR para manter as células humanas encapsuladas viáveis por até 72 h, seguida por aquisição e análise de dados NMR resolvidos no tempo. A metodologia é aplicada para monitorar interações proteína-ligantes intracelulares em tempo real.

Tags

In-cell NMRProtein-ligand InteractionsHuman CellsBioreactorReal-time MonitoringProtein StructureProtein FunctionConformational ChangesChemical ChangesIsotope LabelingHEK 293T CellsAgarose ThreadsCell EmbeddingFlow UnitNMR TubeTemperature ControlCell ViabilityCell Metabolism

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