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Métodos de transferência da energia da ressonância da único-molécula Förster para a investigação tempo real da definição da junção de Holliday por GEN1
JoVE Revista
Genética
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Single-Molecule Förster Resonance Energy Transfer Methods for Real-Time Investigation of the Holliday Junction Resolution by GEN1

Métodos de transferência da energia da ressonância da único-molécula Förster para a investigação tempo real da definição da junção de Holliday por GEN1

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11:27 min

•

September 18, 2019

DOI:

10.3791/60045-v

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10.3791/60045-v

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11:27 min
September 18, 2019

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1Laboratory of DNA Replication and Recombination, Biological and Environmental Sciences and Engineering Division (BESE),King Abdullah University of Science and Technology (KAUST)

Summary

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É apresentado aqui um protocolo para executar a transferência de energia da ressonância da único-molécula Förster para estudar a definição HJ. A excitação alternada de duas cores é usada para determinar as constantes de dissociação. O lapso de tempo da único-cor smFRET é aplicado então em ensaios do clivagem do tempo real para obter a distribuição do tempo de permanência antes da definição de HJ.

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Single-moleculeFörster Resonance Energy Transfer (FRET)Holliday JunctionGEN1Real-time InvestigationEnzymatic SystemsSingle-molecule MethodsBiomolecular InteractionsOptical And Force MeasurementsSingle-channel Flow CellQuartz SlideDouble Adhesive SheetPolytetrafluoroethylene TweezersPolyethylene TubingEpoxy GlueAvidinPBS

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Sobhy, M. A., Bralić, A., Raducanu, V., Tehseen, M., Ouyang, Y., Takahashi, M., Rashid, F., Zaher, M. S., Hamdan, S. M. Single-Molecule Förster Resonance Energy Transfer Methods for Real-Time Investigation of the Holliday Junction Resolution by GEN1. J. Vis. Exp. (151), e60045, doi:10.3791/60045 (2019).

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