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Célula com base em ensaios de SINEUP não-codificante RNAs que especificamente podem melhorar a tradução de mRNA
JoVE Revista
Genética
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JoVE Revista Genética
Cell Based Assays of SINEUP Non-coding RNAs That Can Specifically Enhance mRNA Translation

Célula com base em ensaios de SINEUP não-codificante RNAs que especificamente podem melhorar a tradução de mRNA

DOI:
10.3791/58627-v

•

10:21 min

•

February 01, 2019

•

, ,
1Laboratory for Transcriptome Technology,RIKEN Center for Integrative Medical Sciences, 2TransSINE Technologies Co. Ltd.

Capítulos

  • 00:04Título
  • 00:48Design of Binding Domains (BDs) of SINEUP Constructs for Target mRNAs
  • 01:48Cell Culture and SINEUPs Transfection
  • 03:46Protein Extraction
  • 05:32Protein Separation by SDS-PAGE and Detection of Target Proteins by Western-blot Analysis
  • 07:21Imaging Analysis of SINEUPs by Semi-automated Detection Method
  • 08:26Results: Analysis of Translation Upregulation by SINEUP-GFP
  • 09:11Conclusion

Summary

Traducción Automática

Traducción Automática

SINEUPs são sintéticas antisentido não-codificantes RNAs, que contêm um domínio de ligação (BD) e um domínio efetor (ED) e up-regulam a tradução do mRNA de destino. Aqui, descrevemos os métodos de deteção para SINEUPs em linhas de células cultivadas, análise de sua atividade de tradução-promoção por Western-blot e um alto throughput semi-automático, sistema de imagem.

Tags

Cell-based AssaysSINEUP Non-coding RNAsMRNA TranslationProtein ExpressionHaploinsufficiencyFantom Project DatabaseTranscription Start Site (TSS)Parkinson’s Disease Protein Seven (PARK7)Binding Domain SequencesGFP ReporterTransfectionCell Culture

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