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Journal
/
Genética
/
CRISPR Guide RNA Cloning for Mammalian Systems
JoVE Revista
Genética
This content is Free Access.
JoVE Revista
Genética
CRISPR Guide RNA Cloning for Mammalian Systems
CRISPR Guide RNA Cloning for Mammalian Systems
DOI:
10.3791/57998-v
•
06:48 min
•
October 02, 2018
•
Sathiji Nageshwaran*
1,2
,
Alejandro Chavez*
1,2,3
,
Nan Cher Yeo
2
,
Xiaoge Guo
2
,
Alissa Lance-Byrne
,
Angela Tung
,
James J. Collins
4,5,6,7
,
George M. Church
2
1
Wyss Institute for Biologically Inspired Engineering
,
Harvard University
,
2
Department of Genetics
,
Harvard Medical School
,
3
Department of Pathology
,
Massachusetts General Hospital
,
4
Institute for Medical Engineering & Science
,
Massachusetts Institute of Technology
,
5
Synthetic Biology Center
,
Massachusetts Institute of Technology
,
6
Department of Biological Engineering
,
Massachusetts Institute of Technology
,
7
Broad Institute
Capítulos
00:04
Título
00:25
Preparation of the Primers and Expression Vectors
02:05
Ligating the Annealed gRNA Oligonucleotides
02:59
Transformation of
E. coli
04:03
PCR Analysis
05:35
Results: CRISPR Guided RNA Cloning
06:23
Conclusion
Summary
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Here, a simple, efficient, and cost-effective method of sgRNA cloning is outlined.
Tags
CRISPR
Guide RNA
Cloning
Mammalian System
Plasmid
Single-guide RNA
Oligonucleotide
Ligation
E. Coli
Competent Cells
Transformation
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