Spontan aktivitet for utvikling av nevrale nettverk kan måles ved hjelp av AM-ester former for kalsium-sensitive indikator fargestoffer. Endringer i intracellulær kalsium, noe som indikerer neuronal aktivering, oppdages som forbigående endringer i indikator fluorescens med ett-eller to-foton imaging. Denne protokollen kan tilpasses en rekke developmentally-avhengige nevrale nettverk<em> In vitro</em>.