Summary

Una técnica modificada para inducir el síndrome de ovario poliquístico en ratones

Published: July 05, 2024
doi:

Summary

Este protocolo introduce una técnica para inducir modelos de síndrome de ovario poliquístico (SOP) en ratones mediante la liberación controlada de letrozol utilizando minibombas. Bajo la anestesia adecuada, la minibomba se implantó por vía subcutánea y se indujo con éxito el SOP en los ratones después de un cierto período de liberación de la minibomba.

Abstract

El síndrome de ovario poliquístico (SOP) es una de las principales causas de infertilidad en las mujeres. Los modelos animales se utilizan ampliamente para estudiar los mecanismos etiológicos del síndrome de ovario poliquístico y para el desarrollo de fármacos relacionados. Los modelos de ratón inducidos por letrozol replican los fenotipos metabólicos y reproductivos de los pacientes con SOP. El método tradicional de tratamiento con letrozol en ratones con SOP requiere una dosis diaria durante un cierto período, lo que puede ser laborioso y causar un estrés significativo a los ratones. Este estudio describe un método sencillo y eficaz para inducir el síndrome de ovario poliquístico en ratones mediante la implantación de una minibomba liberadora de letrozol controlada. Se fabricó una minibomba capaz de liberar de forma estable y continua una cantidad cuantitativa de letrozol y se implantó por vía subcutánea en ratones bajo anestesia. Este estudio demostró que el modelo de ratón imitó con éxito las características del SOP después de la implantación de la minibomba de letrozol. Los materiales y equipos utilizados en este estudio están fácilmente disponibles para la mayoría de los laboratorios, sin necesidad de una personalización especial. En conjunto, este artículo proporciona un método único y fácil de realizar para inducir el SOP en ratones.

Introduction

El síndrome de ovario poliquístico (SOP) es una de las afecciones más comunes entre las mujeres en edad reproductiva1. Afecta hasta el 18% de las mujeres a nivel mundial y es la principal causa de infertilidad femenina en todo el mundo 2,3. El síndrome de ovario poliquístico se caracteriza por una serie de anomalías reproductivas interrelacionadas, como la secreción alterada de gonadotropinas, la anovulación crónica, el aumento de la producción de andrógenos y la morfología ovárica poliquística4. Además de los trastornos ginecológicos, el síndrome de ovario poliquístico también aumenta el riesgo de enfermedades cardiovasculares 5,6. A pesar de décadas de investigación, la etiología del SOP sigue sin estar clara 7,8.

Para obtener una mejor comprensión de la patogénesis del síndrome de ovario poliquístico y desarrollar nuevas terapias, la creación de modelos animales que imiten de cerca la fisiología humana es de gran importancia9. Los modelos de SOP en roedores reportados actualmente incluyen aquellos inducidos por tratamientos con testosterona, letrozol y valerato de estradiol, entre otros. La testosterona induce hiperandrogenemia y se utiliza más comúnmente como inductor del SOP en ratas10. La DHEA se ha utilizado para inducir el síndrome de ovario poliquístico en roedores, aumentando los niveles de testosterona, las proporciones de LH / FSH (hormona luteinizante / hormona estimulante del folículo) y causando ciclos estrales irregulares11. El valerato de estradiol (EV) es un estrógeno de acción prolongada, y los estudios que utilizan este método muestran que los niveles de hormonas esteroides sexuales y gonadotropinas varían dependiendo de la dosis de EV administrada 12,13,14. El letrozol es un inhibidor no esteroideo de la aromatasa15. El tratamiento con letrozol induce el estro no cíclico, aumenta el peso ovárico, el peso corporal, agranda los adipocitos, maximiza el desarrollo de los folículos y eleva los niveles de testosterona en ratas16,17. Los ratones tratados con letrozol presentan un mayor número de folículos sinusales y quistes hemorrágicos, así como concentraciones elevadas de LH, FSH, estradiol y progesterona 18,19.

En la actualidad, los principales métodos para el modelado del SOP inducido por letrozol incluyen la administración oral y la inyección subcutánea, las cuales requieren dosis diarias repetidas 20,21,22. Estos métodos requieren mucho tiempo y mano de obra, y es probable que la administración repetitiva cause un estrés significativo a los animales23. A pesar de que algunos estudios utilizan pellets de letrozol24,25, estos productos necesitan ser personalizados y son caros. En este informe se describe una técnica para inducir el síndrome de ovario poliquístico en ratones mediante minibombas. Este método es simple, ahorra tiempo y utiliza herramientas y equipos quirúrgicos que están disponibles en la mayoría de los laboratorios.

Protocol

Todos los protocolos experimentales con animales de este estudio fueron aprobados por el Comité de Ética Animal de la Universidad de Fudan. Aquí se utilizaron ratones hembra C57BL/6J, de 4 semanas de edad. Los detalles de los animales, reactivos y equipos utilizados en este estudio se enumeran en la Tabla de Materiales. 1. Preparación de la minibomba Tome el polvo de letrozol (50 mg) almacenado en el frasco de em…

Representative Results

El protocolo experimental y algunos pasos críticos se muestran en la Figura 1 y la Figura 2. Los niveles séricos de testosterona se muestran en la Figura 3A. Los ratones tratados con letrozol con minibomba (en lo sucesivo denominados ratones LTZ) mostraron niveles de testosterona sérica significativamente elevados en comparación con los ratones de control hembra. Mientras tanto, el análisis his…

Discussion

Este informe muestra un protocolo simple para inducir el síndrome de ovario poliquístico en ratones utilizando materiales de fácil acceso. El modelo de SOP en ratones es esencial para explorar los mecanismos del SOP y el cribado de fármacos26. De los métodos disponibles para inducir modelos de SOP en ratones, la inducción de letrozol es uno de los más utilizados. El uso de letrozol puede desarrollar y mantener una condición hiperandrogénica al inhibir la …

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

El estudio contó con el apoyo del Programa Nacional de Investigación y Desarrollo Clave de China (subvenciones 2021YFC2700701), la Fundación Nacional de Ciencias Naturales de China (subvenciones 82088102, 82071731, 82171613, 8227034, 81601238), el Fondo de Innovación de la Academia China de Ciencias Médicas para Ciencias Médicas (subvención 2019-I2M-5-064), la Comisión de Ciencia y Tecnología del Ayuntamiento de Shanghái (subvenciones 21Y11907600), la Comisión Municipal de Salud y Planificación Familiar de Shanghái (subvención 20215Y0216), Programa de Innovación Colaborativa de la Comisión Municipal de Salud de Shanghái (subvención 2020CXJQ01), Plan de Investigación Clínica del Centro de Desarrollo Hospitalario de Shanghái (subvención SHDC2020CR1008A), Centro de Investigación Clínica de Shanghái para Enfermedades Ginecológicas (subvención 22MC1940200), Centro de Investigación de Enfermedades del Sistema Urogenital de Shanghái (subvención 2022ZZ01012), Base de Investigación Científica de Fronteras de Shanghái de Reproducción y Desarrollo, Comisión de Ciencia y Tecnología de la Municipalidad de Quzhou (subvención 2022K54), Proyecto de Fondo Abierto del Laboratorio Clave de Genética Reproductiva, Ministerio de Educación, Universidad de Zhejiang (subvención KY2022035), y Proyecto de Fondo Abierto de la Academia de Ciencias Médicas de Guangdong (subvención YKY-KF202202).

Materials

Syringe Bofeng Biotech BD300841 1ML (sterile)
Centrifugation tube Biological Hope 1850-K 15ML (sterile)
Pipette Eppendorf 3123000268-A 100μL-1000μL (sterile)
Pipette TopPette 7010101008 10μL-100μL (sterile)
Letrozole powder Sigma L6545-50MG Primary acting drugs (sterile)
PEG(Poly(ethylene glycol)) Solarbio P8250 Used for dissolution (sterile)
Sterile Physiological Saline Solution Biosharp BL158A Mini-pump storage
Osmotic Pumps ALZET 1004 Letrozole storage and sustained release (sterile)
Dimethyl sulfoxide Biosharp BS087 Used for dissolution (sterile)
Small Animal Anesthesia Machine RWD  R500IP Used for anesthesia
Isoflurane  RWD 20071302 Used for anesthesia
Hemostats Biosharp BS-HF-S-125 Surgical instrument
Scissors Biosharp BS-SOR-S-100P Surgical instrument
Needle holder ShangHaiJZ J32010 Surgical instrument
Forceps RWD  F12028 Surgical instrument
Needle and the 4-0 absorbable suture JINGHUAN CR413 Surgical instrument
Povidone-iodine swabs SingleLady GB26368-2010 Skin disinfection
Depilatory cream ZIKER BIOTECHNOLOGY ZK-L2701  Depilation agent for laboratory animals
Nitrile Gloves Biosharp BC040-L Used for aseptic operation
Sterile gauze ZHENDE BA69087 Used for wiping liquids
C57BL/6J Mice Shanghai Model Organisms Center N/A Age: 4 weeks
Pet Eye Lubricant BAITE SHF021153 Used for mouse eye lubricant
Meloxicam Injection MEIDAJIA R21064-21 Used for mouse analgesia (sterile)

Referencias

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Citar este artículo
Zhou, B., Guo, F., Long, Y., She, J., Gao, L., Huang, H. A Modified Technique for Inducing Polycystic Ovary Syndrome in Mice. J. Vis. Exp. (209), e66637, doi:10.3791/66637 (2024).

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