Este artículo presenta una guía para tomar muestras de seis órganos significativos y diversos en Xenopus adultos a los que se puede acceder rápida y fácilmente: el ventrículo cardíaco, el lóbulo hepático, el páncreas, los cuerpos grasos, los riñones emparejados y la piel.
Xenopus ha sido un poderoso organismo modelo para comprender el desarrollo y las enfermedades de los vertebrados durante más de cien años. Si bien las técnicas experimentales de análisis y disección del embrión han sido bien documentadas, las descripciones de las estructuras y órganos de Xenopus adultos, junto con las técnicas para trabajar con adultos, no se han actualizado para tener en cuenta los requisitos de enfoques modernos como la proteómica cuantitativa y la transcriptómica de una sola célula. Las perspectivas centradas en el tipo de célula y en los genes requieren observaciones contrastantes en las etapas embrionarias con las de los tejidos adultos. Los órganos de la larva experimentan cambios significativos en su estructura general, morfología y ubicación anatómica a lo largo de la transición de larva a adulto, sobre todo durante la remodelación masiva de la metamorfosis. Establecer estándares sólidos para la identificación y disección de órganos es crucial para garantizar que los conjuntos de datos resultantes de los estudios realizados en diferentes laboratorios puedan ser coherentes. El presente protocolo identifica seis de los órganos en el Xenopus adulto, demostrando métodos para la disección y la toma de muestras del ventrículo cardíaco, el hígado, el cuerpo graso, el páncreas, el riñón emparejado y la piel del Xenopus adulto. Dependiendo de los métodos de preservación, los órganos disecados se pueden utilizar para proteómica cuantitativa, transcriptómica de células individuales/núcleos, hibridación in situ , inmunohistoquímica, histología, etcétera. Este protocolo tiene como objetivo estandarizar el muestreo de tejidos y facilitar las investigaciones multilaboratorio de los sistemas de órganos adultos.
Aunque la “disección digital” de Xenopus adultoestá disponible 1, el muestreo replicable de órganos y tejidos de Xenopus adulto sigue siendo un desafío sin las instrucciones detalladas disponibles para otros modelos adultos (por ejemplo, ratones 2,3,4). Este artículo tiene como objetivo proporcionar una guía clara para el muestreo preciso y replicable de órganos de Xenopus adulto similar a lo que está disponible actualmente para sus larvas5. Se hace hincapié en la facilidad de finalización para mantener la máxima frescura y hacer que el protocolo sea accesible para todos los usuarios.
Aunque existe una guía de disección completa para Rana sp.6, así como numerosas guías de disección en el aula para otros anuros7, actualmente no se dispone de una guía de disección y muestreo de Xenopus. Para aquellos que no están familiarizados con las prácticas de muestreo o la anatomía de los anfibios, las pequeñas diferencias entre Xenopus y otros anuros hacen que estos recursos no sean óptimos para el muestreo de tejidos replicables.
Muchos tejidos valiosos no están incluidos e incluso se descartan en la presente guía; Esto es para garantizar la frescura de los tejidos. Seis muestras son lo suficientemente limitadas como para garantizar que estos tejidos se puedan recolectar en menos de una hora después de que el corazón comience a latir, independientemente de la experiencia o el nivel de habilidad del usuario. Se están preparando guías más avanzadas y detalladas para recolectar muchos otros tejidos como documentos complementarios separados.
Para los usuarios menos experimentados, siempre se recomienda que este protocolo se pruebe primero en los animales que se sacrifican por razones distintas a la experimentación antes de tomar muestras de cualquier animal que sea difícil de reemplazar (es decir, transgénicos, animales de edad avanzada, etcétera). Lo ideal es que todos los animales muestreados estén sanos y, si son hembras, no hayan ovulado en las últimas dos semanas.
Como este protocolo tiene como objetivo maximizar la frescura, algunas muestras pueden incluir tejidos no deseados. Por ejemplo, el conducto hepatopancreático y parte del mesenterio se muestrean con el páncreas, y parte del tejido peritoneal, las glándulas suprarrenales y los uréteres siempre se muestrearán con los riñones emparejados. Si la frescura no es una preocupación, se puede lograr un muestreo más preciso utilizando técnicas modificadas.
La apariencia y ubicación de los ór…
The authors have nothing to disclose.
Este trabajo fue financiado por el R24OD031956 de subvenciones OD de los NIH. Agradecemos a Samantha Jalbert, Jill Ralston y Cora Anderson por su asistencia y apoyo, así como a nuestro editor y revisores anónimos por sus útiles comentarios
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