Summary

Reconstrucción vascular con la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón

Published: December 01, 2023
doi:

Summary

Este protocolo proporciona información técnica para la reconstrucción de vasos mediante la técnica del manguito en el trasplante hepático ortotópico de ratón.

Abstract

El trasplante ortotópico de hígado en ratón es una metodología eficaz para investigar los mecanismos subyacentes de la isquemia hepática y la lesión por reperfusión. Sin embargo, los desafíos técnicos plantean una barrera para utilizar este valioso modelo experimental y transmitir estas habilidades a la próxima generación. El aspecto más desafiante de este procedimiento es la reconstrucción vascular, que incluye la vena porta (VP), la vena cava inferior infrahepática (IHIVC) y la vena cava inferior suprahepática. El uso de manguitos de plástico, en lugar de suturas, permite una reconstrucción más suave de la PV y la IHIVC. Los vasos se reconstruyen conectando un manguito hecho con un catéter intravenoso a la punta del vaso del injerto e interponiendo el manguito en el vaso receptor. Los dos aspectos más cruciales son visualizar correctamente el lumen interno del vaso y evitar el uso de fuerza excesiva. Nuestro objetivo es proporcionar una visión técnica de las reconstrucciones vasculares mediante la técnica del manguito en la cirugía del receptor. Se espera que estos consejos técnicos para la técnica del manguito ayuden a los microcirujanos a facilitar la reconstrucción vascular y avanzar en sus investigaciones.

Introduction

El trasplante ortotópico de hígado en ratón (MOLT) es un método experimental eficaz descrito por primera vez en 19911. Este modelo experimental, que utiliza ratones modificados genéticamente y varios reactivos de investigación, ha desempeñado un papel fundamental en la investigación de la isquemia fría y caliente y las lesiones por reperfusión. Sin embargo, la alta complejidad técnica del modelo ha dificultado el desarrollo de medicamentos básicos para el trasplante hepático2. La MOLT implica tres pasos principales: (1) recuperación del hígado del ratón donante, (2) cirugía de la mesa posterior y (3) implantación del hígado en el receptor. Entre estos procedimientos receptores, la anastomosis vascular presenta el mayor desafío. Mientras que la anastomosis suprahepática de la vena cava inferior generalmente se completa con sutura a mano2, la vena cava inferior infrahepática (IHIVC) y la vena porta (VP) se pueden reconstruir de manera más eficiente utilizando manguitos de plástico en lugar de suturas cosidas a mano.

El período anhepático significa el intervalo entre la extracción del hígado nativo del receptor y la implantación del injerto. Para garantizar resultados consistentes, es imperativo limitar el tiempo anhepático a menos de 20 minutos. En consecuencia, los estudios que emplean este modelo se han limitado a instituciones específicas 3,4,5,6,7,8,9. Entre las diversas etapas de la MOLT, lograr una reconstrucción fluida de la PV y la IHIVC es crucial para minimizar el tiempo de anhepática y garantizar el éxito del trasplante.

La reconstrucción de la VP y de la VCI se realiza generalmente con manguitos vasculares, ya que la técnica del manguito simplifica la anastomosis vascular en comparación con las suturas cosidas a mano 2,5,8. La técnica involucrada en la preparación del manguito vascular y la fijación segura del manguito tiene un impacto significativo en la complejidad de la reconstrucción vascular del receptor. Nuestro objetivo es proporcionar una guía visual detallada para numerosos consejos técnicos relacionados con el método del manguito, reduciendo así la curva de aprendizaje. Estos clips de video proporcionarán una comprensión clara de cómo conectar el manguito a los vasos y reconstruir la VP y la IHIVC durante la cirugía del receptor.

Protocol

El protocolo experimental fue aprobado por el Comité de Experimentación Animal de la Universidad de Kioto. En el estudio se utilizaron ratones C57BL/6, con más de 10 semanas de edad y un peso de entre 25 g y 30 g, obtenidos de una fuente comercial (véase la Tabla de Materiales). Todos los animales fueron anestesiados con isoflurano al 2,5% (siguiendo protocolos aprobados institucionalmente), mantenidos en condiciones específicas libres de patógenos, y todos los procedimientos experimentales se llev…

Representative Results

La reconstrucción con VP es exitosa cuando, al desenganchar la vena porta, no hay tortuosidad y el hígado se perfunde uniformemente. El tiempo anhepático debe ser inferior a 20 min, ya que los tiempos anhepáticos superiores a 25 min aumentan el riesgo de mortalidad del ratón. La reconstrucción con IHIVC se considera exitosa si no hay regurgitación sanguínea del injerto. El almacenamiento del injerto a temperaturas frías durante 1 h utilizando una solución de preservación de órganos…

Discussion

El aprendizaje de la reconstrucción vascular es el aspecto más desafiante para lograr un MOLT exitoso. La calidad del manguito influye significativamente en la dificultad de la reconstrucción, dado el pequeño tamaño de los ratones5. Este artículo proporciona un protocolo detallado para la preparación, fijación y reconstrucción del manguito.

Si bien no hay diferencias importantes con respecto a los informes anteriores con respecto a la pr…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Este trabajo fue respaldado por la investigación básica JST 2022 (The Japanese Society for Transplantation).

Materials

16 G intravenous catheter TERUMO SR-FF2032 IHIVC cuff
20 G intravenous catheter TERUMO SR-FF1651 PV cuff
8-0 braid silk Natsume Seisakusho CR9-80B2 8-0 silk
Belzer UW Cold Storage Solution  Astellas Organ preservation fluid
Bulldog clamp B BRAUN FB329R Bulldog clamp
C57BL/6 mice   Oriental Bio Service
Isoflurane inhalation solution Viatris Anesthesic
Micro Blunted Tips 0.1 mm x 0.06 mm  F.S.T 11253-20 Straight microforceps
Micro Serrefine Clamp Applicator with Lock F.S.T 18056-14 Vessel clip applicator
Micro Serrefines  F.S.T 18055-4 Vessel clip
No.11 Spare Blades FEATHER Safety Razor 11 Blades
Ophthalmic scissor, round handle B BRAUN FD103R Microscissor
Plastic rectangular-shaped container   Daiso 10 cm long, 15 cm wide and 6 cm high
SuperGrip Tips F.S.T 00649-11  Curved microforceps
SZX7 Olympus SZX7 Microscope

Referencias

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Citar este artículo
Tanaka, K., Uchida, Y., Kageyama, S., Nakamura, K., Hirao, H., Kadono, K., Kawamoto, H., Saga, K., Kidoguchi, Y., Watanabe, T., Hatano, E. Vascular Reconstruction with the Cuff Technique in Mouse Orthotopic Liver Transplantation. J. Vis. Exp. (202), e66215, doi:10.3791/66215 (2023).

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