El artículo presenta métodos para el cultivo larvario del gasterópodo Crepidula fornicata en un sistema a escala de laboratorio de pequeño volumen y en un sistema de mesocosmos de agua de mar ambiental que se puede implementar en el campo.
El molusco gasterópodo caliptídico, Crepidula fornicata, ha sido ampliamente utilizado para estudios de biología, fisiología y ecología del desarrollo de las larvas. Las larvas veliger incubadas de esta especie se recolectaron mediante sifón en un tamiz después de la liberación natural por parte de los adultos, se distribuyeron en el cultivo a una densidad de 200/L y se alimentaron con Isochrysis galbana (cepa T-ISO) a 1 x 105 células/mL. Se documentó el crecimiento de la cáscara y la adquisición de competencia para la metamorfosis en larvas hermanas criadas en cultivos ventilados de 800 mL diseñados para el equilibrio con el aire ambiente o con mezclas de gases atmosféricos definidas. Contrastando con estas condiciones de cultivo de laboratorio; También se recogieron datos de crecimiento y competencia de larvas criadas en un mesocosmos de agua de mar ambiental de 15 L situado en una población de campo de adultos reproductivos. Las tasas de crecimiento y el momento de la competencia metamórfica en los cultivos de laboratorio fueron similares a los reportados en estudios publicados anteriormente. Las larvas criadas en el mesocosmos de campo crecieron mucho más rápido y se metamorfosearon antes de lo reportado en cualquier estudio de laboratorio. En conjunto, estos métodos son adecuados para explorar el desarrollo larvario en condiciones controladas predeterminadas en el laboratorio, así como en condiciones naturales en el campo.
La lapa zapatilla, Crepidula fornicata (Gastropoda: Calyptraeidae), está bien representada en la literatura de investigación actual e histórica debido a su utilidad como modelo de desarrollo y debido a sus impactos generalizados como especie invasora. Sirvió como un ejemplo fundamental del desarrollo espiraliano en la era clásica de la embriología experimental1 y ha experimentado un renacimiento del interés con la aplicación de imágenes modernas y herramientas genómicas para diseccionar los mecanismos del desarrollo temprano de los lofototocozoos 2,3. En el otro extremo de su historia de vida, otras investigaciones se han centrado en los impactos de las poblaciones adultas de este ingeniero de ecosistemas en ambientes marinos costeros templados muy alejados de su distribución original en el este de América del Norte 4,5. Entre el embrión y el adulto, las larvas veliger de esta especie han sido objeto de numerosos estudios sobre el desarrollo y la ecología de las larvas, especialmente sobre los factores que influyen en el crecimiento y la adquisición de competencia para la metamorfosis, las señales internas y externas que median el asentamiento de las larvas y los efectos de la experiencia larvaria en el rendimiento de los juveniles 6,7,8,9,10,11 . Estudios recientes han revelado la resistencia de larvas y juveniles de C. fornicata a la acidificación de los océanos, una vía más para el uso productivo de este animal en la investigación 12,13,14,15,16.
Una ventaja de C. fornicata para los estudios de la biología de las larvas marinas es que es relativamente fácil de cultivar en el laboratorio en agua de mar natural o artificial con una dieta unialgal del flagelado Isochrysis galbana. Los métodos de cultivo han sido detallados por el autor en una publicación impresa anterior centrada en los métodos17. Las razones de la presente contribución son dos. En primer lugar, las maniobras físicas rutinarias involucradas en el establecimiento y cuidado de las culturas son conceptualmente muy simples, pero difíciles de realizar correctamente sin una demostración práctica o en video. En segundo lugar, se describen dos variaciones de los métodos de cultivo descritos anteriormente que son especialmente adecuados para los estudios de laboratorio y de campo de las respuestas a los factores de estrés ambiental como la acidificación de los océanos, la eutrofización y el agotamiento del oxígeno. El primero de ellos es un sistema de cultivo de bajo volumen (800 mL) adecuado para la manipulación del pH y el oxígeno disuelto en el agua de mar a través de pequeños volúmenes de gases burbujeados, y el segundo es un sistema de mesocosmos de mayor volumen (15 L) que se puede colocar en el campo y que permite el libre intercambio de agua de mar ambiental.
Aunque las larvas de C. fornicata son relativamente fáciles de cultivar en comparación con otras larvas marinas planctotróficas, la atención a los fundamentos de las buenas prácticas de cultivo sigue siendo esencial17,19. Las larvas sanas deben comenzar a alimentarse inmediatamente después de la eclosión. Esto se verifica fácilmente al día siguiente de la eclosión observando sus intestinos llenos, repletos de células de algas, utilizando un mi…
The authors have nothing to disclose.
El desarrollo inicial del sistema de cultivo ventilado de bajo volumen fue apoyado en parte por la Fundación Nacional de Ciencias (CRI-OA-1416690 a Dickinson College). La Dra. Lauren Mullineaux amablemente proporcionó instalaciones de laboratorio en la Institución Oceanográfica Woods Hole, donde se recopilaron los datos presentados para este sistema (Figura 4).
Bucket, Polyethylene, 7 gallon | US Plastic | 16916 | for mesocosm |
Crepidula fornicata | Marine Biological Laboratory, Marine Resources Center | 760 | adult broodstock |
Hotmelt glue, Infinity Supertac 500 | Hotmelt.com | INFINITY IM-SUPERTAC-500-12-1LB | good for bonding polyethylene |
Jar, glass, 32 oz, with polypropylene lid | Uline | S-19316P-W | for 800 mL ventilated cultures |
Nitex mesh, 236 µm | Dynamic Aqua Supply Ltd. | NTX236-136 | for mesocosm |
Nut, hex, nylon, 10-32 thread | Home Depot | 1004554441 | for fastening tubing barbs |
Rivets, nylon, blind, 15/64" diameter, 5/32"-5/16" grip range, pack of 8 | NAPA auto parts | BK 6652844 | 4 packs needed per mesocosm |
Tubing barb 1/8" x 10-32 thread | US Plastic | 65593 | 2 needed per culture jar |
Tubing, polyethylene, 2.08 mm OD | Fisher Scientific | 14-170-11G | for ventilating gas stream inside culture jar |
Tubing, Tygon, 1/8"x3/16"x1/32" | US Plastic | 57810 | fits barbs for ventilating cultures |