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Comportamiento

Seguimiento del comportamiento de búsqueda local provocado por el azúcar en Drosophila

Published: November 17, 2023
doi:
10.3791/65955
, , , ,
1National Centre for Biological Sciences, 2The University of Trans-Disciplinary Health Sciences and Technology, 3Regional Centre for Biotechnology, 4Neural Circuit Group, Division of Biological Science, Graduate School of Science,Nagoya University, 5Perelman School of Medicine,University of Pennsylvania

Summary

Este protocolo describe un ensayo conductual para registrar el comportamiento de búsqueda provocado por el azúcar utilizando Drosophila melanogaster. El ensayo se puede utilizar para estudiar los comportamientos relacionados con la alimentación y la búsqueda de alimento, así como los mecanismos neuronales subyacentes.

Abstract

El comportamiento de búsqueda de alimento es esencial para la supervivencia de los organismos, ya que les permite localizar y adquirir recursos alimenticios esenciales. En Drosophila, el hambre desencadena un comportamiento de búsqueda distinto después del consumo de pequeñas cantidades de una solución azucarada. Este informe presenta una configuración experimental simple para estudiar el comportamiento de búsqueda provocado por azúcar con el objetivo de descubrir los mecanismos subyacentes. Cantidades minúsculas de solución concentrada de azúcar provocan un comportamiento de búsqueda sostenido en las moscas. Se ha establecido la participación de la integración de la ruta en este comportamiento, ya que las moscas utilizan su trayectoria para regresar a la ubicación del azúcar. Los hallazgos más recientes proporcionan evidencia de modulación temporal en el inicio y la intensidad del comportamiento de búsqueda después de la ingesta de azúcar. También hemos utilizado esta configuración para la activación artificial de neuronas receptoras de gusto específicas en la faringe, lo que provoca el comportamiento de búsqueda. El kit de herramientas neurogenéticas de Drosophila ofrece una amplia gama de herramientas y técnicas que se pueden combinar con el paradigma del comportamiento de búsqueda provocado por el azúcar para estudiar los mecanismos neuronales y genéticos que subyacen a la búsqueda de alimento. La comprensión de la base neural del comportamiento de búsqueda impulsado por el hambre en las moscas contribuye al campo de la neurobiología en su conjunto, ofreciendo información sobre los mecanismos reguladores que gobiernan los comportamientos de alimentación no solo en otros organismos sino también en los humanos.

Introduction

El comportamiento de búsqueda de alimentos y búsqueda de alimento es una estrategia de supervivencia fundamental exhibida por los organismos en todos los taxones. Se han identificado dos tipos de conductas de búsqueda de alimento en los insectos: la búsqueda de alimento inducida por el hambre y la búsqueda local después de lascomidas. Cuando tienen hambre, los insectos confían en las señales sensoriales para localizar las fuentes de alimento. Al encontrar y consumir un pequeño parche de comida, inician un comportamiento de búsqueda local caracterizado por caminos enrevesados y vueltas alrededor de la ubicación de la comida.

El comportamiento de búsqueda provocado por azúcar, una forma particular de búsqueda local, fue estudiado por primera vez hace más de 60 años por el biólogo estadounidense Vincent Dethier en Blowflies2. Cuando se les priva de hambre, a las moscas se les presenta una pequeña cantidad de azúcar para que no las sacie, comienzan una búsqueda local. El comportamiento típico de búsqueda se caracteriza por una caminata muy tortuosa con baja locomotora y alta velocidad de giro y hacer retornos al lugar de la gota de azúcar. Estudios posteriores habían investigado este comportamiento en moscas domésticas y moscas de la fruta 3,4. La iniciación, intensidad y duración de la búsqueda está regulada por el estado interno del animal (por ejemplo, privación y motivación), así como por factores externos como la disponibilidad y calidad de los recursos 1,5,6.

Los avances en las tecnologías de rastreo han proporcionado a los investigadores herramientas valiosas para capturar y analizar el comportamiento dentro de ámbitos controlados. Aquí, presentamos un paradigma de comportamiento para rastrear moscas que caminan libremente después de la ingestión de azúcar. Esta sencilla configuración permite el estudio del comportamiento de búsqueda provocado por el azúcar en Drosophila mediante la captura y el análisis del movimiento de la mosca en respuesta a la solución concentrada de azúcar proporcionada en una arena. Empleando tecnología avanzada de seguimiento y técnicas de análisis de datos, se han cuantificado con éxito los patrones locomotores, la exploración espacial y la dinámica de respuesta a los estímulos azucareros.

Utilizando este ensayo, se ha demostrado experimentalmente que la búsqueda provocada por el azúcar implica el uso de la integración de caminos y puede separarse espacio-temporalmente de la ingesta de azúcar 7,8. Además, se ha demostrado que el comportamiento puede ser desencadenado por la activación de las neuronas gustativas faríngeas9. Resultados recientes muestran que el estímulo del azúcar no es un mecanismo de liberación innato sino también modulador, y controla el inicio de la conducta temporalmente8. Utilizando este paradigma, también hemos estudiado este comportamiento en abejas melíferas (Apis mellifera)7,8.

El objetivo final de esta investigación es desentrañar los circuitos neuronales y los nuevos componentes genéticos implicados en la regulación del comportamiento de búsqueda a través de manipulaciones genéticas dirigidas y técnicas de neuroimagen. Los comportamientos de búsqueda de alimentos han demostrado ser paradigmas experimentales altamente efectivos para estudiar la navegación y la memoria espacial en insectos. Estos comportamientos brindan una oportunidad única para investigar la percepción sensorial, los procesos de toma de decisiones y la coordinación motora involucrados en la búsqueda de fuentes de alimento gratificantes en las moscas. Además, los hallazgos de estos estudios tienen implicaciones más amplias para comprender los comportamientos alimentarios en otros organismos, incluidos los humanos, ya que muchos mecanismos genéticos y neuronales fundamentales se conservan evolutivamente. La desregulación de las conductas alimentarias se asocia con diversos trastornos neurológicos y metabólicos10. Por lo tanto, los mecanismos neuronales y genéticos que subyacen al comportamiento de búsqueda en las moscas pueden ofrecer nuevas vías para comprender y potencialmente abordar estos complejos desafíos de salud humana.

Protocol

Para el presente estudio se utilizaron moscas macho adultas de la cepa silvestre Drosophila melanogaster Canton-S (CS). 1. Preparación experimental Cría de moscasRecolectar moscas macho adultas que emergan dentro de un período de 12 h y mantenerlas en un medio de mosca estándar (preparado en casa) durante 48 h a 25 °C con 75% de humedad relativa en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h.NOTA: La composición de medios de Drosophila utilizada fue (para 1 L de medio) harina de maíz (80 g), D-glucosa (20 g), azúcar (40 g), agar (8 g), levadura en polvo (15 g), ácido propiónico (4 mL), 4-hidroxibenzoato de metilo (1,25 g en 3 mL de etanol) y ácido ortofosfórico (600 μL) (ver Tabla de Materiales). El período inicial de alimentación asegura que las moscas tengan acceso a suficiente alimento y nutrientes antes de la fase de inanición. Mientras que tanto las moscas macho como las hembras provocan el comportamiento de búsqueda, el tiempo de inanición es más consistente entre las moscas macho. Además, las moscas hembras cambian su preferencia de alimentación después del apareamiento11. Procedimiento de inaniciónDespués del período de alimentación, prive a las moscas de comida pero con acceso al agua.NOTA: Para estandarizar el estado de hambre en todos los ensayos y cepas, se sugiere determinar la duración del 90% de supervivencia de la población en condiciones de falta de alimentos. Con base en este resultado, las moscas CS fueron hambrientas durante 28 h (Figura 1A) ya que los ritmos circadianos y otros factores pueden afectar el comportamiento de búsqueda12. También se midieron los cambios circadianos de las actividades de búsqueda de moscas en diferentes momentos del día (Figura 1B). Notamos una reducción de la actividad relativa de búsqueda nocturna en comparación con la fase ligera en las moscas. Calcule la tolerancia a la inanición de alimentos privando de alimento a las moscas de dos días de edad. Coloque de 15 a 20 moscas en un frasco con papel de seda empapado en el fondo. Esto sirve como sustrato y asegura que las moscas tengan acceso al agua durante todo el período de inanición. Cuente el número de moscas durante el período de inanición de alimentos a intervalos regulares de 1 h. El período en el que sobrevivió el 90% de las moscas hambrientas se utilizó como período de inanición (Figura 1A). Utilice múltiples réplicas (3-4 para cada cepa) para minimizar el impacto de las variaciones individuales y proporcionar una evaluación más fiable de la tolerancia a la inanición.NOTA: Se determinó la tolerancia a la inanición alimentaria de cada cepa con el fin de establecer un estado de hambre estandarizado entre diferentes cepas y experimentos. Al contar las moscas supervivientes en estos intervalos, se puede controlar la tasa de supervivencia a lo largo del tiempo y determinar cuánto tiempo podría tolerar la privación de alimentos cada cepa antes de sucumbir a la inanición. Procedimiento para registrar el comportamientoTransfiera moscas individuales hambrientas en tubos pequeños (Figura 2A). Haga esto en lotes de 5 a 6 moscas para minimizar el tiempo de aislamiento. Al probar moscas individuales, aislando cada mosca, cualquier cambio o acción observada se puede atribuir a la mosca específica que se observa, en lugar de estar influenciada por interacciones con otras moscas. Utilice placas de Petri de 90 mm como escenario para ensayos de comportamiento (se pueden usar placas de Petri más grandes. No hubo diferencia en el comportamiento en las placas de Petri de mayor diámetro). Ilumine la arena desde la parte inferior con un panel de LED blancos fríos montados en la superficie (Figura 2B, C). Para mantener un entorno visual uniforme y minimizar las distracciones externas, rodee la arena experimental con un tubo de cloruro de polivinilo blanco (51,5 mm de altura, 114 mm de diámetro interior).NOTA: Este tubo actúa como una barrera, evitando que cualquier estímulo visual del exterior de la arena influya en el comportamiento de la mosca. Al reducir las distracciones externas, uno puede concentrarse únicamente en la interacción de la mosca con la fuente de alimento, manteniendo la consistencia durante todo el experimento. Utilice una intensidad de luz de 320 lux en el centro de la arena. Coloque 0,2 μl de solución de azúcar en el centro de la arena. Se utilizó una solución de sacarosa de 500 mM en los experimentos informados, pero esto puede variar. Introducir la mosca en la arena utilizando un tubo de microcentrífuga de 2 ml (diámetro interior 8,7 mm, longitud reducida a 5 mm rellenando algodón en la parte inferior; Figura 2A) albergando una sola mosca invertida sobre la gota de azúcar. Una vez que la mosca comience a ingerir la gota, retira el contenedor para moscas, dándole acceso sin restricciones a la fuente de alimento. Filma la posición 2D de la arena con una cámara cenital.NOTA: Para el presente estudio se utilizó Flea3 (Point Grey, lente de 1214 mm, ver Tabla de Materiales) y se grabó a 40 fotogramas por segundo (fps). Sin embargo, se puede utilizar cualquier cámara que proporcione un buen contraste con el fondo. Se puede grabar a 30-60 fps, dependiendo de la naturaleza del experimento. Graba en formato .avi ya que es compatible con el software de seguimiento. Graba la prueba hasta el momento en que la mosca escapó de la arena. Las moscas caminaban libremente y no había tapa en la arena. Al permitir que la mosca decida cuándo dejar de buscar, volar o caminar hacia la periferia de la arena, observe el comportamiento natural de la mosca y la estrategia de búsqueda de alimento. Limpie las placas de Petri con etanol al 70% entre los ensayos y séquelas por completo o use una nueva placa de Petri.NOTA: Es importante realizar todos los experimentos entre 2 h y 6 h después de que las luces estén encendidas, cuando las moscas exhiben niveles de actividad consistentemente altos. Este período de tiempo asegura que las moscas estén en un estado activo, maximizando las posibilidades de observar su comportamiento natural de búsqueda de alimentos y reduciendo el impacto de otros factores que pueden afectar su comportamiento, como los ritmos circadianos. La configuración conductual se alojó dentro de una habitación con temperatura y humedad controladas. La arena se colocó sobre una mesa libre de vibraciones. Esta configuración experimental implicó aislar y analizar moscas individuales para determinar su respuesta al azúcar. Se proporcionó una gota de azúcar a las moscas hambrientas y su comportamiento se grabó en video (Figura 2B, C, Video 1). Los experimentos se llevaron a cabo durante un período de tiempo específico en el que las moscas exhibieron altos niveles de actividad constantes. Analice las trayectorias siguiendo el paso 2 para determinar el comportamiento de búsqueda. 2. Análisis de trayectorias para búsqueda local Analice los videos grabados con el software Ctrax11 (ver Tabla de Materiales).NOTA: El software rastrea y convierte la posición de la mosca en el video en coordenadas x, y, lo que permite un seguimiento y análisis precisos de sus movimientos. Consulte el Archivo Suplementario 1 para obtener detalles sobre cómo usar Ctrax. Divida las trayectorias en dos fases: la fase inicial de alimentación y la fase de búsqueda. Define el final de la alimentación y el inicio de la marcha como moscas que se mueven a una velocidad >4 mm s-1 en tres fotogramas consecutivos.NOTA: Una vez finalizada la alimentación, el resto de la trayectoria se utilizó como respuesta de búsqueda de las moscas. Este estudio utilizó VirtualDub (ver Tabla de Materiales) para eliminar la fase de alimentación de los videos antes del seguimiento. Cuantifique la búsqueda por los siguientes parámetros:Longitud del camino: Este parámetro representa la distancia recorrida por la mosca desde su punto de partida durante la búsqueda de alimento (en mm). Tiempo de permanencia: El tiempo que pasan las moscas caminando durante la búsqueda (en s). Indica la duración de la búsqueda y la persistencia de la mosca en la búsqueda de alimento. Meandro: Calcule esto como una relación dividiendo la línea recta (la distancia entre el primer y el último punto de la ruta) de la ruta a la longitud total de la ruta y restando de 1. Los valores altos de meandro indican más tortuosidad en la trayectoria. Número de devoluciones: Utilice el algoritmo desarrollado para identificar y contar el número de devoluciones utilizando dos círculos concéntricos.NOTA: Un círculo interior que indica el origen de la búsqueda, Rin (2,5 mm) y el círculo exterior que indica la distancia mínima Rout (4 mm) que la mosca tuvo que alejarse del origen. Un retorno se definió como un movimiento fuera del círculo exterior (Rout) y luego volviendo al círculo interior (Rin). Tasa de actividad: Expresada como porcentaje, calcule la tasa de actividad determinando el tiempo durante la búsqueda de alimentos cuando la velocidad de marcha de la mosca supera los 2 mm/s. Este parámetro refleja el nivel de actividad y participación de la mosca en la búsqueda de alimentos. Distingue a los recolectores activos de los individuos menos activos.NOTA: En el presente estudio se utilizaron MATLAB y Python para un análisis más detallado de las trayectorias. Se puede acceder a los scripts aquí: https://github.com/eagermeagre/sugar_elicited_search. El procedimiento de análisis implica el uso del software Ctrax para rastrear los movimientos de la mosca y determinar parámetros como la duración de la búsqueda de alimentos, la longitud total de la ruta, el tiempo de búsqueda, el meandro, el número de retornos y la tasa de actividad. Estos parámetros proporcionan información valiosa sobre el comportamiento de la mosca y la eficiencia de búsqueda de alimento durante los experimentos de búsqueda de alimentos registrados.

Representative Results

Las moscas necesitaban ser inanidadas durante el período estimado por la tolerancia a la inanición de alimentos y la respuesta al azúcar se probó individualmente (Figura 1A y Figura 2A). El comportamiento se registró dentro de una habitación con temperatura y humedad controladas. Se utilizaron 0,2 μL de solución de sacarosa 500 mM para los experimentos informados. La gota de azúcar se colocó en el centro de la arena y las moscas se introdujeron en el azúcar (Figura 2B). El comportamiento fue registrado hasta que las moscas escaparon de la arena. Los videos fueron analizados para extraer las coordenadas x,y y las trayectorias de las moscas. Se utilizaron varios parámetros para cuantificar la respuesta conductual: longitud del camino, tiempo de permanencia, meandro, número de retornos y tasa de actividad. La ingesta de azúcar en moscas hambrientas conduce a una búsqueda local con un camino serpenteante y bucles (Figura 3A, C). Como control negativo, se registraron moscas hambrientas a las que no se les presentó azúcar8. Estas moscas, cuando se introdujeron en una arena vacía, no iniciaron una búsqueda y escaparon de la arena (Figura 3B, D). A este grupo se le conoce como moscas no alimentadas. Los parámetros de búsqueda: longitud del camino, tiempo de permanencia, meandro y número de retornos fueron significativamente menores en las moscas no alimentadas en comparación con las moscas a las que se les dio una gota de azúcar (Figura 4A-D). Figura 1: Curvas de inanición de la cepa CS de tipo salvaje. (A) Curva de inanición que muestra la tasa de supervivencia de las moscas macho y hembra CS de tipo salvaje. (B) Cambios circadianos de las actividades de búsqueda de moscas en diferentes momentos del día. Las barras de error representan S.E.M. (n = 10). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Figura 2: Configuración experimental que incluye el cálculo de la tolerancia a la inanición, los procedimientos de registro del comportamiento y el análisis de la trayectoria. (A) Se determinó la tolerancia a la inanición de alimentos para establecer un estado de hambre estandarizado. Para el registro del comportamiento, las moscas individuales se aislaron en pequeños tubos antes del experimento. La arena de comportamiento, una placa de Petri de 90 mm, estaba iluminada uniformemente desde la parte inferior. Se colocó una gota de solución azucarada en el centro y se dio a las moscas acceso sin restricciones a la fuente de alimento. (B) El comportamiento se registró hasta que las moscas escaparon de la arena. El análisis de vídeo utilizó el software Ctrax para el seguimiento y MATLAB/Python para el análisis de trayectorias. (C) Fotografía de la configuración experimental. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Figura 3: Necesidad de la ingesta de azúcar para iniciar la búsqueda local. (A) Trayectorias individuales de moscas alimentadas con 500 mM, 0,2 μL de solución de azúcar. (B) Trayectorias individuales de moscas a las que no se les dio azúcar. (C) Superposición de trayectorias de búsqueda vuela del grupo de control (n = 11). (D) Superposición de las trayectorias de las moscas (n = 11) a las que no se les dio azúcar. Todas las trayectorias se normalizan hasta el punto de partida de la marcha. Esta figura es una adaptación de Shakeel y Brockmann8. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Figura 4: Reducción de los parámetros de comportamiento en moscas no alimentadas. (A-D) La longitud del camino, el tiempo de permanencia, el meandro y el número de retornos fueron menores para las moscas hambrientas a las que no se les dio una recompensa de azúcar en comparación con las moscas de control que recibieron estimulación con azúcar. **p < 0.001, ***p < 0.0001, ****p < 0.00001, prueba de suma de rangos de Wilcoxon. Esta figura es una adaptación de Shakeel y Brockmann8. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. Vídeo 1: Comportamiento de búsqueda de una mosca con trayectoria en tiempo real de la trayectoria. Haga clic aquí para descargar este video. Archivo complementario 1: Instrucciones paso a paso para rastrear el archivo de video usando CTRAX. Haga clic aquí para descargar este archivo.

Discussion

El estudio actual presenta un paradigma sencillo para investigar el comportamiento de búsqueda provocado por el azúcar en Drosophila, descrito por primera vez por Dethier2. Este comportamiento innato permite a las moscas participar en una búsqueda local de recursos alimenticios adicionales después del encuentro con una recompensa alimentaria. El aspecto más crucial del protocolo experimental consiste en motivar adecuadamente a las moscas. En primer lugar, las moscas deben estar en un estado de hambre, habiendo sido privadas de alimentos mientras aún tienen acceso al agua, para asegurar la ingestión de azúcar. Con el fin de tener el estado de hambre uniforme en todos los ensayos experimentales, se utilizó el período de inanición en el que sobrevive el 90% de la población. De manera crucial, la inducción de una respuesta de búsqueda después de la alimentación requiere la provisión de un estímulo alimenticio que sea de suficiente calidad, pero no lo suficiente como para saciar completamente a las moscas. Por lo tanto, estandarizar la concentración y la cantidad de azúcar, y la duración de la inanición puede llevar mucho tiempo, pero es imperativo para un comportamiento robusto y confiable.

En este estudio, se empleó una solución de sacarosa de 500 mM y 0,2 μL como estímulo para las moscas hambrientas. La ingesta de azúcar evoca un comportamiento de búsqueda local característico caracterizado por un mayor comportamiento de giro y frecuentes retornos al lugar de la gota de azúcar (Video 1). Por el contrario, las moscas hambrientas a las que no se les proporciona azúcar no muestran una respuesta de búsqueda. En particular, todos los parámetros relacionados con el comportamiento, incluida la longitud de la trayectoria, el tiempo de permanencia, el meandro y el número de retornos, fueron significativamente más bajos en las moscas no alimentadas. Hemos demostrado previamente que la ingestión de agua por sí sola no provoca una respuesta de búsqueda9.

Esta configuración ofrece un enfoque rentable y de bajo mantenimiento para estudiar este comportamiento innato. Si bien en este estudio se utiliza una arena retroiluminada, también se puede emplear iluminación superior siempre que haya suficiente contraste entre la mosca y el fondo. El software de seguimiento utilizado se basa en la detección del movimiento de la mosca contra un fondo estático13. La configuración de la cámara y la resolución se pueden ajustar en función de la escala específica de comportamiento que se esté investigando. Es importante destacar que esta metodología permite el estudio de varios componentes de la conducta de búsqueda de alimento, incluida la atención sensorial durante la búsqueda de alimento, el compromiso con la comida y la alimentación, el control locomotor de la búsqueda y los procesos de toma de decisiones asociados con la explotación y la exploración, entre otros. Además, este paradigma facilita la investigación de la búsqueda local, un comportamiento que se observa comúnmente en diversos taxones en diversos contextos ecológicos6. El estudio de este comportamiento en Drosophila, abre vías para la investigación científica dirigida a comprender las vías neuronales involucradas en la búsqueda de alimento. Hemos estudiado la búsqueda local en abejas melíferas y hemos demostrado que el comportamiento se asemeja al de las moscas 7,8.

Estudios recientes han demostrado que el comportamiento de búsqueda local puede ser desencadenado por la activación optogenética de varias neuronas sensoriales de azúcar en moscas 14,15,16. Sin embargo, sigue sin estar claro hasta qué punto las búsquedas locales observadas en estos estudios representan con precisión el comportamiento natural de las moscas en respuesta a la ingesta real de azúcar. El comportamiento alimentario está estrechamente regulado en las moscas, y estos hallazgos indican que la activación de los receptores de azúcar faríngeos inicia el comportamiento de búsqueda. La sensibilidad gustativa tarsiana es responsable de detectar el azúcar e inducir el reflejo de extensión de la probóscide, mientras que las neuronas gustativas faríngeas determinan si se debe proceder a la alimentación17,18. Una vez ingerida, la solución azucarada viaja a través del esófago hasta el proventrículo y entra en el buche, con su expansión controlada por un nervio recurrente19. Además, vale la pena señalar que algunos de los estudios antes mencionados involucraron el arnés o confinamiento de moscas, mientras que este método permite que los animales caminen libremente durante todo el experimento. Las moscas de nuestros experimentos estaban lo suficientemente motivadas como para quedarse y buscar dentro de la arena sin la imposición de una tapa.

Comprender la intrincada interacción entre las vías neuronales, los factores genéticos y las señales ambientales que gobiernan el comportamiento de búsqueda en las moscas puede arrojar luz sobre los principios fundamentales del procesamiento de la información, el aprendizaje y la formación de la memoria. Además, la desregulación del comportamiento de búsqueda de alimento se ha implicado en varios trastornos humanos, incluidos los trastornos alimentarios y la obesidad. La amplia gama de herramientas neurogenéticas disponibles en Drosophila proporciona un recurso valioso para investigar el comportamiento de búsqueda provocado por el azúcar y desentrañar los mecanismos neuronales y genéticos que subyacen a la búsqueda de alimento. En combinación con la manipulación optogenética y la imagen funcional, este paradigma presenta un enfoque poderoso y prometedor 20,21,22. Sin embargo, modificar la configuración para la manipulación en tiempo real de la actividad neuronal con optogenética puede ser un desafío. Para monitorear la actividad neuronal en el cerebro mientras una mosca realiza el comportamiento de búsqueda, se necesitará una configuración diferente, como la mosca atada en una pelota de rodadura. Muchos aspectos del comportamiento de búsqueda de alimento, como la regulación de la alimentación y los procesos de toma de decisiones, están muy conservados en todas las especies. Por lo tanto, los conocimientos obtenidos al estudiar los mecanismos neuronales de la búsqueda de alimento en las moscas pueden proporcionar información valiosa sobre procesos similares en otros organismos, incluidos los humanos.

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Agradecemos a Ravikumar Boyapati por ayudar con la instalación de la arena. Este trabajo está financiado por la subvención de la Alianza Intermedia de la India DBT (número de subvención IA/I/15/2/502074) a P.K. M.S. fue financiado por una beca del Consejo Indio de Investigación Médica (ICMR). A.B. fue financiado por los fondos institucionales NCBS-TIFR (Nº 12P4167) y el Departamento de Energía Atómica del Gobierno de la India (Nº 12-R& D-TFR-5.04-0800 y 12-R& D-TFR-5.04-0900).

Materials

2 mL Eppendorf tube Sigma Aldrich BR780546 Used to introduce the fly to the sugar drop
Agar SRL 9002-18-0
Azure lens https://www.rmaelectronics.com/azure-photonics-azure-1214mm/
Camera Logicool, Japan
Corn flour locally available
Ctrax software https://ctrax.sourceforge.net/
D-glucose SRL 50-99-7
Flea3 Sony https://www.flir.com/products/flea3-usb3/?vertical=machine+vision&segment=iis
glass tube Borosil Used to house the flies individually 
Kimwipe Kimberly-Clark 34155 Used to provide access to water for flies during food starvation
LED light panel custom-made in the workshop
Light Meter TENMARS   TM-203
Methyl 4-hydroxybenzoate Fisher Scientific 99-76-3
Orthophosphotic acid SRL 7664-38-2 
Petri dish (90 mm) Tarsons 460090
Propionic acid SRL 79-09-4
Sucrose Qualigens Q28105
Sugar locally available
VirtualDub  https://www.virtualdub.org/
White polyvinyl chloride pipe (67 mm inner diameter × 100 mm height) custom-made in the workshop
Yeast powder SRL REF-34266
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Referencias

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Shakeel, M., Kaushik, S., Tanimura, T., Brockmann, A., Kain, P. Tracking Sugar-Elicited Local Searching Behavior in Drosophila. J. Vis. Exp. (201), e65955, doi:10.3791/65955 (2023).
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