Summary

Billigt elektroencefalografisk registreringssystem kombineret med en millimeterstor spole til transkranielt at stimulere musehjernen in vivo

Published: May 26, 2023
doi:

Summary

Et billigt elektroencefalografisk registreringssystem kombineret med en millimeterstor spole foreslås at drive transkraniel magnetisk stimulering af musehjernen in vivo. Ved hjælp af konventionelle skrueelektroder med et specialfremstillet, fleksibelt multielektrode array-substrat kan multi-site optagelse udføres fra musehjernen som reaktion på transkraniel magnetisk stimulering.

Abstract

Et billigt elektroencefalografisk (EEG) registreringssystem foreslås her for at drive transkraniel magnetisk stimulering (TMS) af musehjernen in vivo ved hjælp af en millimeterstor spole. Ved hjælp af konventionelle skrueelektroder kombineret med et specialfremstillet, fleksibelt multielektrode array-substrat kan multi-site optagelse udføres fra musehjernen. Derudover forklarer vi, hvordan en millimeterstor spole produceres ved hjælp af billigt udstyr, der normalt findes i laboratorier. Praktiske procedurer til fremstilling af det fleksible multielektrode array-substrat og den kirurgiske implantationsteknik til skrueelektroder præsenteres også, som er nødvendige for at producere støjsvage EEG-signaler. Selvom metoden er nyttig til registrering fra hjernen hos ethvert lille dyr, fokuserer denne rapport på elektrodeimplementering i et bedøvet musekranium. Desuden kan denne metode let udvides til et vågent lille dyr, der er forbundet med fastgjorte kabler via en fælles adapter og fastgjort med en TMS-enhed til hovedet under optagelse. Den nuværende version af EEG-TMS-systemet, som maksimalt kan omfatte 32 EEG-kanaler (en enhed med 16 kanaler præsenteres som et eksempel med færre kanaler) og en TMS-kanalenhed, beskrives. Derudover rapporteres typiske resultater opnået ved anvendelse af EEG-TMS-systemet på bedøvede mus kort.

Introduction

Transkraniel magnetisk stimulering (TMS) er et lovende værktøj til menneskelig hjernevidenskab, klinisk anvendelse og dyremodelforskning på grund af dets ikke-/lave invasivitet. I den tidlige fase af TMS-applikationer var måling af den kortikale effekt som reaktion på enkelt- og parpuls-TMS hos mennesker og dyr begrænset til den motoriske cortex; Let målbar ydelse var begrænset til motorfremkaldte potentialer og inducerede myoelektriske potentialer, der involverede motorcortex 1,2. For at udvide hjerneområderne, der kan måles ved TMS-modulation, blev elektroencefalografisk (EEG) optagelse integreret med enkelt- og parpuls-TMS som en nyttig metode til direkte at undersøge excitabilitet, forbindelse og rumlig tidsmæssig dynamik i områder i hele hjernen 3,4,5. Således er samtidig anvendelse af TMS- og EEG-optagelse (TMS-EEG) til hjernen blevet brugt til at undersøge forskellige overfladiske kortikale hjerneområder hos mennesker og dyr for at undersøge intrakortikale neurale kredsløb (se Tremblay et al.6). Desuden kan TMS-EEG-systemer anvendes til at undersøge yderligere kortikale spatiotemporale egenskaber, herunder udbredelse af signaler til andre kortikale områder og generering af oscillerende aktivitet 7,8.

Imidlertid forbliver virkningsmekanismen for TMS i hjernen spekulativ på grund af TMS’s ikke-invasivitet, hvilket begrænser vores viden om, hvordan hjernen fungerer under TMS-applikationer. Derfor er invasive translationelle undersøgelser hos dyr, der spænder fra gnavere til mennesker, af afgørende betydning for at forstå mekanismen for virkningerne af TMS på neurale kredsløb og deres aktivitet. Navnlig for kombinerede TMS-EEG-forsøg på dyr er der ikke udviklet et samtidigt stimulerings- og målesystem intensivt for små dyr. Derfor er eksperimentalister forpligtet til at konstruere et sådant system ved forsøg og fejl i henhold til deres specifikke eksperimentelle krav. Derudover er musemodeller nyttige blandt andre de vivo-dyreartsmodeller, fordi mange transgene og stammeisolerede musestammer er tilgængelige som biologiske ressourcer. Således ville en bekvem metode til at opbygge et TMS-EEG-kombineret målesystem til mus være ønskeligt for mange neurovidenskabsforskere.

Denne undersøgelse foreslår en TMS-EEG-kombineret metode, der kan anvendes til samtidig stimulering og registrering af musehjernen, som er den vigtigste type transgene dyr, der anvendes i forskning, og som let kan konstrueres i typiske neurovidenskabelige laboratorier. For det første beskrives et billigt EEG-registreringssystem ved hjælp af konventionelle skrueelektroder og et fleksibelt substrat til reproducerbart at tildele en elektrodearray-position i hvert eksperiment. For det andet er et magnetisk stimuleringssystem konstrueret ved hjælp af en millimeterstor spole, som let kan skræddersys i typiske laboratorier. For det tredje registrerer det TMS-EEG-kombinerede system neural aktivitet som reaktion på lyd og magnetisk stimulering. Metoden præsenteret i denne undersøgelse kan afsløre de mekanismer, der genererer specifikke lidelser hos små dyr, og resultaterne opnået i dyremodellerne kan oversættes for at forstå de tilsvarende menneskelige lidelser.

Protocol

I denne undersøgelse blev alle dyreforsøg udført efter National Institutes of Health Guide for Care and Use of Laboratory Animals og med godkendelse fra Institutional Animal Care and Use Committee of Hokkaido University. C57BL/6J-mus, to han- og tre hunmus, 8 til 10 uger gamle, blev anvendt til denne undersøgelse. Dette er en terminal procedure. Dyrene blev hentet fra en kommerciel kilde (se materialetabel). 1. Fleksibelt todimensionelt array-design og konstruktion</…

Representative Results

Prøve EEG-data registreret i bedøvede C57BL/6J-mus med det fleksible substrat kombineret med skrueelektroderne er præsenteret nedenfor. Som et typisk eksempel vises de gennemsnitlige EEG-bølgeformer, der genereres som reaktion på lydstimulering (8 kHz toneudbrud, 80 dB lydtrykniveau [SPL]) for 60 forsøg med identiske stimuli (figur 4A). Et skema over kortlægning af optagelseskanaler er også præsenteret midt i figur 4A. Svaren…

Discussion

Denne undersøgelse omhandler et multi-site EEG-registreringssystem kombineret med et magnetisk stimuleringssystem designet til små dyr, herunder mus. Det konstruerede system er billigt og let konstrueret i fysiologiske laboratorier og kan udvide deres eksisterende måleopsætninger. Den kirurgiske procedure, der er nødvendig for at indhente data fra museregistreringssystemet, er dybt enkel, hvis sådanne laboratorier har tidligere erfaring med standard elektrofysiologiske eksperimenter.

En …

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Dette arbejde blev støttet af Murata Science Foundation, Suzuken Memorial Foundation, Nakatani Foundation for Advancement of Measuring Technologies in Biomedical Engineering og et tilskud til sonderende forskning (bevillingsnummer 21K19755, Japan) og til videnskabelig forskning (B) (bevillingsnummer 23H03416, Japan) til T.T.

Materials

3D printer Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., Ltd FFD-101 The printer used for 3D-printing the donut-shaped disks
ATROPINE SULFATE  0.5 mg NIPRO ES PHARMA CO., LTD. Atropine sulfate
Bipolar amplifier NF Corp. KIT61380 For amplifying waveforms for coil input
Butorphanol Meiji Seika Pharma
Co., Ltd., Tokyo, Japan
For anathesis of animals
Commercial manufacturer of flexible 2D array p-ban.com Corp. URL: https://www.p-ban.com/
Computer prograom to analyze output signals Natinal Instruments NI-DAQ and  NI-DAQmx Python To analyze output signals from the hall-effect sensor
Connector Harwin Inc. G125-FV12005L0P For connector to conect to the measuring system
Copper pad p-ban.com Corp. copper Copper pad on each substrate
Copper wire Kyowa Harmonet Ltd. P644432 The windings of the coil
DAQ board National Instruments Corp. USB-6343 For measuring the magnitic flux density of the coil
Dental cement SHOFU INC. Quick Resin Self-Curing Orthodontic Resin
ECoG electrode NeuroNexus Inc. HC32 For reference to design of the flexible 2D array
Epoxy resin Konishi Co. Ltd. #16123 For coil construction
Ethyl Carbamate FUJIFILM Wako Pure Chemical Corp. 050-05821 For urethan anesthesia
Flat ribbon cable Oki Electric Cable Co., Ltd. FLEX-B2(20)-7/0.1 20028 5m For cable to connect between surface-mount connector and measuring sysytem
flexible substrate p-ban.com Corp. polyimide Baseplate of flexible substrate
Function generator NF Corp. WF1947 For generating waveforms for coil input
Hall-effect sensor Honeywell International Inc. SS94A2D For measuring the magnitic flux density of the coil
IDC crimping tool Pro'sKit Industries Co. 6PK-214 To crimp the IDC and one end of the flat ribbon cable; Flat cable connector crimping tool
Instant glue Konishi Co. Ltd. #04612 For coil construction
Insulation-displacement connector (IDC ) Uxcell Japan B07GDDG3XG 2 × 10 pins and a 1.27 mm pitch 
LCR meter NF Corp. ZM2376 For measuring the AC properties of the coil
Manipulator NARISHIGE Group. SM-15L For manipulating the coil
Medetomidine Kobayashi Kako, Fukui, Japan For anathesis of animals
Midazolam Astellas Pharma, Tokyo, Japan For anathesis of animals
Miniature screw KOFUSEIBYO Co., Ltd. S0.6*1.5 For EEG-senseing and reference electrode
Mouse Japan SLC, Inc. C57BL/6J (C57BL/6JJmsSlc) Experimental animal
Permalloy-45 rod The Nilaco Corp. 780544 The core of the coil
Recording system Plexon Inc. OmniPlex For EEG data acquisition
Stainless wire Wakisangyo Co., Ltd. HW-136 For grasp by manipulator
Stereotaxic apparatus NARISHIGE Group. SR-5M-HT To fix a mouse head
Surface-mount connector Useconn Electronics Ltd. PH127-2x10MG For connector to mount on the flexible 2D array
Testing equipment (LCR meter) NF Corp. ZM2372 Contact check and impedance measurements
White PLA filament Zhejiang Flashforge 3D Technology Co., Ltd PLA-F13 The material used for 3D-printing the donut-shaped disks
Xylocaine Jelly 2% Sandoz Pharma Co., Ltd. lidocaine hydrochloride

Referencias

  1. Ilmoniemi, R. J., et al. Neuronal responses to magnetic stimulation reveal cortical reactivity and connectivity. Neuroreport. 8 (16), 3537-3540 (1997).
  2. Hallett, M. Transcranial magnetic stimulation: a primer. Neuron. 55 (2), 187-199 (2007).
  3. Thut, G., Pascual-Leone, A. Integrating TMS with EEG: How and what for. Brain Topography. 22 (4), 215-218 (2010).
  4. Ilmoniemi, R. J., Kicic, D. Methodology for combined TMS and EEG. Brain Topograpy. 22 (4), 233-248 (2010).
  5. Daskalakis, Z. J., Farzan, F., Radhu, N., Fitzgerald, P. B. Combined transcranial magnetic stimulation and electroencephalography: its past, present and future. Brain Research. 1463, 93-107 (2012).
  6. Tremblay, S., et al. Clinical utility and prospective of TMS-EEG. Clinical Neurophysiology. 130 (5), 802-844 (2019).
  7. Pellicciari, M. C., Veniero, D., Miniussi, C. Characterizing the cortical oscillatory response to TMS pulse. Frontiers in Cellular Neuroscience. 11, 38 (2017).
  8. Lin, Y. J., Shukla, L., Dugue, L., Valero-Cabre, A., Carrasco, M. Transcranial magnetic stimulation entrains alpha oscillatory activity in occipital cortex. Scientific Reports. 11 (1), 18562 (2021).
  9. Takahashi, S., et al. Laminar responses in the auditory cortex using a multielectrode array substrate for simultaneous stimulation and recording. IEEJ Transactions Electrical and Electronic Engineering. 14 (2), 303-311 (2019).
  10. Yoshikawa, T., Higuchi, H., Furukawa, R., Tateno, T. Temporal and spatial profiles of evoked activity induced by magnetic stimulation using millimeter-sized coils in the mouse auditory cortex in vivo. Brain Research. 1796, 148092 (2022).
  11. Tang, A. D., et al. Construction and evaluation of rodent-specific rTMS coils. Frontiers in Neural Circuits. 10, 47 (2016).
  12. Li, L. Controlling annealing and magnetic treatment parameters to achieve high permeabilities in 55 Ni-Fe toroid cores. IEEE Transactions on Magnetics. 37 (4), 2315-2317 (2001).

Play Video

Citar este artículo
Yoshikawa, T., Sato, H., Kawakatsu, K., Tateno, T. Low-Cost Electroencephalographic Recording System Combined with a Millimeter-Sized Coil to Transcranially Stimulate the Mouse Brain In Vivo. J. Vis. Exp. (195), e65302, doi:10.3791/65302 (2023).

View Video