一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱法检测动物源性药物中三甲胺的技术
Summary
本文描述了一种适用于测定动物源性药物中三甲胺（TMA）的顶空气相色谱-串联四极杆质谱（HS-GC-MS/MS）方法。该方案包括样品预处理、顶空处理、分析条件、方法验证以及动物源性药物中TMA的测定。
Abstract
动物源性药物具有鲜明的特点和显著的疗效，但大多有明显的鱼腥味，导致临床患者的依从性较差。三甲胺（TMA）是动物源性药物中关键的鱼腥味成分之一。由于加入碱液后快速的酸碱反应导致顶空小瓶压力增加，导致TMA从顶空小瓶中逸出，阻碍了动物源性药物鱼腥味的研究进展，因此使用现有的检测方法很难准确识别TMA。在这项研究中，我们提出了一种受控检测方法，该方法引入了石蜡层作为酸和碱液之间的隔离层。通过恒温炉加热使石蜡层缓慢液化，可以有效控制TMA的产量。该方法表现出令人满意的线性、精密的实验和回收率，重现性好，灵敏度高。为动物源性药物除臭提供技术支持。
Introduction
利用动物器官和/或其副产品衍生的产品（此处称为动物源性药物）来治疗人类疾病正受到越来越多的关注。在治疗癌症、心血管疾病、肝硬化、乳腺炎等疾病中发挥重要作用，具有疗效强、用量小、临床疗效显著、特异性强等优点。但动物源性药物一般有明显的鱼腥味，影响患者依从性很大，对儿童尤其不利1,2。腥味主要来源于药物中所含的蛋白质、氨基酸、脂肪等物质，经脂肪酸氧化、氨基酸降解等方式分解，产生多种具有鱼腥味的物质2、3、4。其中，三甲胺（TMA）是一种具有鱼腥味的挥发性气体，广泛存在于腐烂或腐烂的动物源性食品中5。
到目前为止，气相色谱（GC）、液相色谱（LC）、离子色谱、分光光度法、液相色谱-质谱联用法（LC-MS）和传感器法已被普遍用于检测环境、食物和尿液中的TMA6,7,8,9。鉴于气相色谱柱和进样系统的低污染，以及高灵敏度、重现性和低检测限（0.1-1 mg/kg），顶空气相色谱-质谱（HS-GC-MS）法是食品和生物分析的首选方法8。目前，只有中国建立了食品中TMA的国家标准，HS-GC-MS是GB5009.179-2016标准10中的第一种方法。因此，选择上述HS-GC-MS方法检测动物源性药物中的TMA。在早期阶段，我们的研究小组发现食品中TMA的HS-GC-MS检测标准可以检测几种动物源性药物中的鱼腥味。结合研究结果11,12，可以证明TMA是动物源性药物中鱼腥味的常见关键物质。但发现实验结果重现性差，存在TMA逃逸、稳定性差等问题，无法通过该方法验证。这可能是由于碱液被注入顶空小瓶中，快速的酸碱反应导致小瓶中的压力增加，因此TMA从注射孔中逸出，从而阻止了TMA的稳定和准确检测。因此，本研究提出了一种改进的顶空气相色谱-串联四极杆质谱（HS-GC-MS/MS）检测方法来解决这一问题。
该方案通过在固体石蜡（一种良好的固液相变材料）的帮助下分离预处理中的酸碱反应物来改进样品预处理。随着石蜡随着恒温炉温度的升高而缓慢液化，TMA也在密封的顶空小瓶中缓慢释放，避免了剧烈而快速的酸碱反应引起的压力增加，保证了TMA检测的稳定准确。此外，GC-MS/MS中的顶空进样结合多种反应监测（MRM）模式有效地抑制了基质化学干扰，保证了结果的可靠性。方法验证结果表明，改进检测方法的线性、精密度和回收率均能满足要求，重现性好，灵敏度高。
Protocol
Representative Results
Discussion
动物源性药物来自动物的全身、器官或组织、生理或病理产物、排泄物或分泌物以及加工产品。TMA是动物源性药物中鱼腥味的重要来源;它是一种典型的恶臭物质，嗅觉阈值非常低（0.000032 × 10-6 V/V）和强烈的鱼腥味13。目前，常用的HS-GC-MS方法无法稳定、准确地检测动物源性药物中的TMA。
该方案在几个方面进行了改进：（1）TMA更具极性和碱性。该方?…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作得到了国家自然科学基金（82173991）和四川省科学技术计划（2022YFS0442）的资助。
Materials
| Centrifuge | Beckman Coulter Trading (China) Co. | SSC-2-0213 | |
| Chinese herbal medicine grinder | Zhejiang Yongkang Xi'an Hardware and Pharmaceutical Factory | HX-200K | |
| Convection oven | Sanyo Electric Co., Ltd | MOV-112F | |
| Decapper for 20 mm Aluminum caps | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | V1750004 | |
| Electronic balance | Shimadzu Corporation Japan | AUW220D | |
| Gas chromatography mass spectrometry | Shimadzu Corporation Japan | TQ-8050 NX | |
| Headspace Vial | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | 25760200 | |
| Homogenizer | Shanghai biaomo Factory | FJ200-SH | |
| Preassembled Cap | ANPEL Laboratory Technologies (Shanghai) Inc | L4150050 | |
| Sample sieve | Zhenxing Sieve Factory | / | |
| SH-Volatile Amine | Chengdu Meimelte Technology Co., Ltd | 227-3626-01 | |
| Sodium hydroxide | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022101401 | |
| Solid paraffin wax | Shanghai Hualing Kangfu apparatus factory | 20221112 | |
| Trichloroacetic acid | Chengdu Chron Chemicals Co., Ltd | 2022102001 | |
| Trimethylamine hydrochloride | Chengdu Aifa Biotechnology Co., Ltd | AF22022108 | |
| Ultra-pure water system | Sichuan Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd | UPR-11-5T |
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