Biyosürfaktan üreten mikropların taranması ve tanımlanmasında yer alan yöntemleri gösteriyoruz. Biyosürfaktan maddelerin kromatografik karakterizasyonu ve kimyasal olarak tanımlanması, biyosürfaktan kalıntı yağ geri kazanımının arttırılmasında endüstriyel uygulanabilirliğinin belirlenmesi için yöntemler de sunulmaktadır.
Biyosürfaktanlar, farklı polaritelerin iki fazı arasındaki yüzey gerilimini azaltabilen yüzey aktif bileşiklerdir. Biyoyüzey aktif maddeler, daha az toksisite, yüksek biyolojik parçalanabilirlik, çevresel uyumluluk ve aşırı çevre koşullarına tolerans nedeniyle kimyasal yüzey aktif maddelere umut verici alternatifler olarak ortaya çıkmaktadır. Burada, biyosürfaktan üretebilen mikropların taranması için kullanılan yöntemleri gösteriyoruz. Biyosürfaktan üreten mikroplar, damla çökmesi, yağ yayılması ve emülsiyon indeksi testleri kullanılarak tanımlanmıştır. Biyosürfaktan üretimi, mikrobiyal üyelerin büyümesi nedeniyle ortamın yüzey gerilimindeki azalmanın belirlenmesiyle doğrulanmıştır. Ayrıca biyosürfaktanların karakterizasyonu ve tanımlanmasında yer alan yöntemleri de açıklıyoruz. Ekstrakte edilen biyosürfaktan ince tabaka kromatografisi ve ardından plakların diferansiyel boyanması biyosürfaktan doğasını belirlemek için yapıldı. LCMS, 1H NMR ve FT-IR, biyosürfaktan kimyasal olarak tanımlamak için kullanıldı. Ayrıca, simüle edilmiş bir kum paketi sütununda artık yağ geri kazanımını arttırmak için üretilen biyosürfaktan kombinasyonunun uygulanmasını değerlendirme yöntemlerini de gösteriyoruz.
Biyosürfaktanlar, mikroorganizmalar tarafından üretilen ve yüzeyi ve iki faz arasındaki ara yüzey gerilimini azaltma kapasitesine sahip amfipatik yüzey aktif moleküllerdir1. Tipik bir biyosürfaktan genellikle bir şeker köstebeği veya bir peptit zinciri veya hidrofilik amino asitten oluşan hidrofilik bir kısım ve doymuş veya doymamış bir yağ asidi zincirinden oluşan hidrofobik bir kısım içerir2. Amfipatik doğaları nedeniyle, biyosürfaktanlar iki faz arasındaki arayüzde toplanır ve sınırdaki ara yüzey gerilimini azaltır, bu da bir fazın diğerine dağılmasını kolaylaştırır 1,3. Şimdiye kadar bildirilen çeşitli biyosürfaktan türleri arasında, karbonhidratların ester bağları (örneğin, rhamnolipidler, trehalolipidler ve soforolipidler) yoluyla uzun zincirli alifatik veya hidroksi-alifatik asitlere bağlandığı glikolipidler, lipitlerin polipeptit zincirlerine bağlandığı lipopeptitler (örneğin, yüzey aktif madde ve likenisin) ve genellikle polisakkarit-protein komplekslerinden oluşan polimerik biyosürfaktan maddeler (örneğin, emülsan, liposan, alasan ve lipomannan)4. Mikroorganizmalar tarafından üretilen diğer biyosürfaktan türleri arasında yağ asitleri, fosfolipitler, nötr lipitler ve partikül biyosürfaktanlarbulunur 5. En çok çalışılan biyosürfaktan sınıfı glikolipidlerdir ve bunların arasında çalışmaların çoğu rhamnolipidler üzerinde bildirilmiştir6. Rhamnolipidler, bir veya iki uzun zincirli yağ asidi molekülüne (genellikle hidroksi-dekanoik asit) bağlı bir veya iki ramnoz molekülü (hidrofilik kısmı oluşturan) içerir. Rhamnolipidler ilk olarak Pseudomonas aeruginosa7’den bildirilen primer glikolipidlerdir.
Biyosürfaktanlar, sundukları çeşitli benzersiz ve ayırt edici özellikler nedeniyle kimyasal muadillerine kıyasla artan bir odak noktası kazanmaktadır8. Bunlar arasında daha yüksek özgüllük, daha düşük toksisite, daha fazla çeşitlilik, hazırlama kolaylığı, daha yüksek biyolojik parçalanabilirlik, daha iyi köpüklenme, çevresel uyumluluk ve aşırı koşullar altında aktivite9 bulunur. Biyosürfaktan maddelerinin yapısal çeşitliliği (Şekil S1), onlara kimyasal muadillerine göre bir avantaj sağlayan bir başka avantajdır10. Kritik misel konsantrasyonları (CMC) genellikle kimyasal yüzey aktif maddelerden birkaç kat daha düşük olduğu için genellikle daha düşük konsantrasyonlarda daha etkili ve verimlidirler11. Yüksek oranda ısıl stabil oldukları (100 ° C’ye kadar) ve daha yüksek pH (9’a kadar) ve yüksek tuz konsantrasyonlarını (50 g / L’ye kadar) tolere edebildikleri bildirilmiştir12, böylece aşırı koşullara maruz kalmayı gerektiren endüstriyel proseslerde çeşitli avantajlar sunarlar13. Biyolojik olarak parçalanabilirlik ve daha düşük toksisite, onları biyoremediasyon gibi çevresel uygulamalar için uygun hale getirir. Sundukları avantajlar nedeniyle, gıda, tarım, deterjan, kozmetik ve petrol endüstrisi gibi çeşitli endüstrilerde artan ilgi görmektedirler11. Biyosürfaktanlar, petrol kirleticilerinin ve toksik kirleticilerin uzaklaştırılması için petrol ıslahında da çok dikkat çekmiştir14.
Burada Rhodococcus sp. IITD102, Lysinibacillus sp. IITD104 ve Paenibacillus sp. IITD108 tarafından üretilen biyosürfaktan maddelerinin üretimini, karakterizasyonunu ve uygulamasını sunuyoruz. Gelişmiş yağ geri kazanımı için biyosürfaktan bir kombinasyonunun taranması, karakterizasyonu ve uygulanmasında yer alan adımlar Şekil 1’de özetlenmiştir.
Şekil 1: Biyosürfaktanların bir kombinasyonunu kullanarak gelişmiş yağ geri kazanımı için bir yöntem. Kademeli iş akışı gösterilir. Çalışma dört adımda gerçekleştirildi. İlk önce mikrobiyal suşlar kültürlendi ve damla çökme testi, yağ yayılma testi, emülsiyon indeksi testi ve yüzey gerilimi ölçümünü içeren çeşitli tahlillerle biyosürfaktan üretimi için tarandı. Daha sonra, biyosürfaktanlar hücresiz et suyundan ekstrakte edildi ve doğaları ince tabaka kromatografisi kullanılarak tanımlandı ve LCMS, NMR ve FT-IR kullanılarak daha da tanımlandı. Bir sonraki adımda, ekstrakte edilen biyosürfaktan maddeler birlikte karıştırıldı ve elde edilen karışımın gelişmiş yağ geri kazanımı için potansiyeli, kum paketi kolon tekniği kullanılarak belirlendi. Bu şeklin daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Biyosürfaktan üretmek için bu mikrobiyal suşların taranması, damla çökmesi, yağ yayılımı, emülsiyon indeksi testi ve mikropların büyümesi nedeniyle hücresiz ortamın yüzey geriliminde azalmanın belirlenmesi ile yapıldı. Biyosürfaktanlar LCMS, 1H NMR ve FT-IR ile ekstrakte edildi, karakterize edildi ve kimyasal olarak tanımlandı. Son olarak, bu mikroplar tarafından üretilen biyosürfaktan bir karışımı hazırlandı ve simüle edilmiş bir kum paketi sütununda kalan yağı geri kazanmak için kullanıldı.
Bu çalışma sadece biyosürfaktan kombinasyonunun taranması, tanımlanması, yapısal karakterizasyonu ve artık yağ geri kazanımının arttırılması üzerine uygulanmasında yer alan yöntemleri göstermektedir. Mikrobiyal suşlar tarafından üretilen biyosürfaktan maddelerinin ayrıntılı bir fonksiyonel karakterizasyonunu sağlamaz15,16. Herhangi bir biyosürfaktan ayrıntılı fonksiyonel karakterizasyonu için kritik misel tayini, termogravimetrik analiz, yüzey ıslanabilirliği ve biyolojik parçalanabilirlik gibi çeşitli deneyler gerçekleştirilir. Ancak bu makale bir yöntem makalesi olduğundan, odak noktası, artık yağ geri kazanımını arttırmak için biyosürfaktan kombinasyonunun taranması, tanımlanması, yapısal karakterizasyonu ve uygulanmasıdır; bu deneyler bu çalışmaya dahil edilmemiştir.
Biyoyüzey aktif maddeler, kimyasal yüzey aktif maddelere cazip alternatifler haline gelen biyolojik olarak aktif bileşenlerin en çok yönlü gruplarından biridir. Daha iyi ıslanabilirlikleri, düşük CMC’leri, çeşitlendirilmiş yapıları ve çevre dostu olmaları nedeniyle deterjan, boya, kozmetik, gıda, ilaç, tarım, petrol ve su arıtma gibi çok sayıda endüstride geniş bir uygulama alanına sahiptirler18. Bu, biyosürfaktan üretimi yapabilen daha fazla mikrobiyal suşun keşfedi…
The authors have nothing to disclose.
Yazarlar, finansal destek için Hindistan Hükümeti Biyoteknoloji Bakanlığı’na teşekkür eder.
1 ml pipette | Eppendorf, Germany | G54412G | |
1H NMR | Bruker Avance AV-III type spectrometer,USA | ||
20 ul pipette | Thermo scientific, USA | H69820 | |
Autoclave | JAISBO, India | Ser no 5923 | Jain Scientific |
Blue flame burner | Rocker scientific, Taiwan | dragon 200 | |
Butanol | GLR inovations, India | GLR09.022930 | |
C18 column | Agilent Technologies, USA | 770995-902 | |
Centrifuge | Eppendorf, Germany | 5810R | |
Chloroform | Merck, India | 1.94506.2521 | |
Chloroform-d | SRL, India | 57034 | |
Falcon tubes | Tarsons, India | 546041 | Radiation sterilized polypropylene |
FT-IR | Thermo Fisher Scientific, USA | Nicolet iS50 | |
Fume hood | Khera, India | 47408 | Customied |
glacial acetic acid | Merck, India | 1.93002 | |
Glass beads | Merck, India | 104014 | |
Glass slides | Polar industrial Corporation, USA | Blue Star | 75 mm * 25 mm |
Glass wool | Merk, India | 104086 | |
Hydrochloric acid | Merck, India | 1003170510 | |
Incubator | Thermo Scientific, USA | MaxQ600 | Shaking incubator |
Incubator | Khera, India | Sunbim | |
Iodine resublimed | Merck, India | 231-442-4 | resublimed Granules |
K12 –Kruss tensiometer | Kruss Scientific, Germany | K100 | |
Laminar air flow cabnet | Thermo Scientific, China | 1300 Series A2 | |
LCMS | Agilent Technologies, USA | 1260 Infinity II | |
Luria Broth | HIMEDIA, India | M575-500G | Powder |
Methanol | Merck, India | 107018 | |
Ninhydrin | Titan Biotech Limited, India | 1608 | |
p- anisaldehyde | Sigma, USA | 204-602-6 | |
Petri plate | Tarsons, India | 460090-90 MM | Radiation sterilized polypropylene |
Saponin | Merck, India | 232-462-6 | |
Sodium chloride | Merck, India | 231-598-3 | |
Test tubes | Borosil, India | 9800U06 | Glass tubes |
TLC plates | Merck, India | 1055540007 | |
Vortex | GeNei, India | 2006114318 | |
Water Bath | Julabo, India | SW21C |