Desenvolvimento de uma tira imunocromatográfica de fluxo lateral para detecção rápida e quantitativa de compostos de pequenas moléculas

As tiras imunocromatográficas de fluxo lateral baseadas em membrana (ICSs) são ferramentas úteis para detecção rápida e de baixo custo. A membrana de nitrocelulose como o portador e o ouro coloidal como marcadores de reagentes de diagnóstico rápido de cromatografia imune são o método POCT (teste de ponto de cuidado) mais usado, e o escopo de teste do projeto é mais amplo. A partir de sua aplicação original no monitoramento durante a gravidez, seu uso foi estendido para monitorar o estado de coagulação sanguínea^1,2, lesão do miocárdio³, medicina veterinária⁴, resíduos de pesticidas^5,doenças infecciosas⁶ e concentrações de medicamentos. Mais tipos de amostras podem ser avaliadas, incluindo urina, saliva, sangue inteiro, soro e outros fluidos corporais^7,8,9.

Nos últimos anos, inúmeros novos ensaios foram desenvolvidos para detectar biomarcadores no diagnóstico de transtornos, incluindo HPLC, UPLC, LC-MS e ELISA, sensíveis e precisos, críveis e específicos. No entanto, esses métodos requerem instrumentação sofisticada, pré-processamento complexo e tratamentos demorados⁹. Assim, desenvolver uma estratégia de diagnóstico de ponto de cuidado mais rápida e conveniente para a detecção auto e em tempo real de compostos ativos medicinais é urgente^10,11.

A popularidade dos ICSs, especialmente para testes comuns, é impulsionada pela facilidade de uso, pois não necessitam de profissionais ou configurações instrumentais elaboradas¹². Em outras palavras, pessoas que não possuem treinamento especial podem operar tiras ou autotestes¹³. Os resultados do teste podem ser obtidos em 5 minutos, o que significa que pode ser usado para inspeções no local¹⁴. Além disso, de acordo com nossos cálculos, o custo das tiras poderia ser inferior a 1 RMB^15,o que significa que os testes são baratos para promover¹⁶. Portanto, o ICS é um dispositivo descartável relativamente preciso, simples e barato. ICSs baseados em ouro coloidal^17,18 também são aplicados na detecção rápida covid-19.

O princípio do ICS pode ser dividido em sanduíche ICS e ICS competitivo. Figura 1A é um diagrama esquemático do sanduíche ICS, que é usado principalmente para detectar substâncias macromoleculares como proteínas, incluindo marcadores tumorais, fatores inflamatórios e gonadotropina coriônica humana (HCG, antígeno da gravidez precoce). Neste método, anticorpos emparelhados direcionados a diferentes epítopos do antígeno são usados, e o anticorpo de captura é seco na membrana NC como uma linha de teste. O anticorpo rotulado é seco na almofada conjugada, e o anticorpo secundário é usado como linha de controle.

Figura 1B é um diagrama esquemático do ICS competitivo, que é usado principalmente para detectar pequenas substâncias moléculas (MWCO < 2000 Da). O antígeno de revestimento é fixado na membrana NC como uma linha de teste, e o anticorpo rotulado é seco na almofada conjugada. Durante a detecção, a amostra e o fluxo de anticorpos rotulados através da linha de detecção sob ação capilar, e o antígeno revestido liga competitivamente o antígeno livre na amostra e desenvolve uma cor vermelha na linha de detecção.

Recentemente, descrevemos o procedimento de geração de anticorpos monoclonais contra produtos naturais¹⁹. Neste trabalho, desenvolvemos um novo imunoensaio de fluxo lateral baseado no preparado anti-SSD mA²⁰ para detecção rápida e no local. Os resultados indicam que o ensaio de imunocromatografia é uma ferramenta indispensável e conveniente para detectar compostos derivados de produtos naturais.

Figura 1 Diagrama esquemático do ensaio de imunocromatografia (A) Tiras de teste imunocromatomatográficas sanduíche. (B) Tiras de teste anti-cromatográficas imunes competitivas indiretas. Este número foi modificado a partir de Zhang et al., 2018²¹. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.