एक मुरीन डेक्सट्रान सोडियम सल्फेट-प्रेरित कोलाइटिस मॉडल में आंतों की सूजन के लिए व्यवस्थित स्कोरिंग विश्लेषण
Summary
एक मुफ्त कंप्यूटर-असिस्टेड सिस्टम का उपयोग करके आंतों की सूजन का व्यवस्थित स्कोरिंग अल्सर और भड़काऊ परिवर्तनों की उपस्थिति की विशेषता वाले कोलाइटिस मॉडल में हिस्टोपैथोलॉजिकल परिवर्तनों की मात्रात्मक रूप से तुलना करने के लिए एक शक्तिशाली उपकरण है। हिस्टोलॉजिकल कोलाइटिस स्कोर मूल्यांकन नैदानिक टिप्पणियों को मजबूत करता है और डेटा व्याख्या की सुविधा प्रदान करता है।
Abstract
मुरीन कोलाइटिस मॉडल ऐसे उपकरण हैं जो भड़काऊ आंतों के विकारों के रोगविज्ञान को समझने पर केंद्रित अध्ययनों में बड़े पैमाने पर कार्यरत हैं। हालांकि, रोग गंभीरता के उद्देश्य और प्रजनन योग्य मात्राकरण के लिए मजबूत मानकों को परिभाषित किया जाना बाकी है । अधिकांश कोलाइटिस विश्लेषण विधियां आंत के छोटे खंडों के सीमित हिस्टोलॉजिकल स्कोरिंग पर निर्भर करती हैं, जिससे आंशिक या पक्षपातपूर्ण विश्लेषण होते हैं। यहां, हम मुरीन कोलाइटिस के डेक्सट्रान सोडियम सल्फेट (डीएसएस) प्रेरित मॉडल में आंतों की चोट और अल्सर को निर्धारित करने के लिए पूरे पेट के उच्च-रिज़ॉल्यूशन छवि अधिग्रहण और देशांतर विश्लेषण को जोड़ते हैं। यह प्रोटोकॉल व्यापक उपयोगकर्ता प्रशिक्षण के बिना उद्देश्य और प्रजनन योग्य परिणामों की पीढ़ी के लिए अनुमति देता है। यहां, हम DSS प्रेरित कोलाइटिस से डेटा के उदाहरणों का उपयोग करके नमूना तैयारी और छवि विश्लेषण पर व्यापक विवरण प्रदान करते हैं। इस विधि को आसानी से मुरीन कोलाइटिस के अन्य मॉडलों के लिए अनुकूलित किया जा सकता है जिनमें म्यूकोसल चोट से जुड़ी महत्वपूर्ण सूजन है। हम प्रदर्शित करते हैं कि कोलन की पूरी लंबाई के सापेक्ष सूजन/घायल और क्षीण/अल्सर म्यूकोसा का अंश DSS-प्रेरित रोग प्रगति के बीच वजन घटाने जैसे नैदानिक निष्कर्षों को बारीकी से समानताएं देता है । यह हिस्टोलॉजिकल प्रोटोकॉल डीएसएस कोलाइटिस प्रयोगों में निष्पक्ष तरीके से रोग गतिविधि के विश्लेषणों को मानकीकृत करने के लिए एक विश्वसनीय समय और लागत प्रभावी सहायता प्रदान करता है।
Introduction
गैस्ट्रोइंटेस्टाइनल एपिथेलियल बैरियर ल्यूमिनल एंटीजन और रोगजनकों को अंतर्निहित ऊतक डिब्बों से अलग करने में महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है1. भड़काऊ आंत्र रोग (आईबीडी), इस्केमिया या सर्जिकल चोट जैसी रोगजनक स्थितियों में देखे जाने वाले एपिथेलियल चोट और म्यूकोसल घाव नैदानिक लक्षणों से जुड़े होते हैं जिनमें दस्त, वजन कम होना, मल में रक्त और पेट दर्द शामिल हैं। चोट के जवाब में, एपिथेलियल कोशिकाएं म्यूकोसल बैरियर दोषों को फिर से एपिथेलाइज करने और मरम्मत करने के लिए प्रवास और प्रसारित होती हैं। आंतों के म्यूकोसल होयोस्टेसिस और कार्य2,3,4को फिर से स्थापित करने के लिए सूजन और म्यूकोसल अखंडता की क्षतिपूर्ति का संकल्प महत्वपूर्ण है।
आंतों के एपिथेलियल बैरियर को नुकसान से जुड़े अंतर्निहित आणविक तंत्रों का अध्ययन करने के लिए विभिन्न पशु मॉडलों को नियोजित किया गया है। रासायनिक रूप से प्रेरित कोलाइटिस के अच्छी तरह से स्थापित और आसानी से लागू मॉडलों का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है, विशेष रूप से आईबीडी जैसे भड़काऊ चोट से संबंधित अध्ययनों में। एक आम, प्रजनन योग्य, और विश्वसनीय मुरीन कोलाइटिस मॉडल डेक्सट्रान सोडियम सल्फेट (डीएसएस) मध्यस्थता कोलोनिक चोट और सूजन को रोजगार देता है। रोग की गंभीरता माउस तनाव, डीएसएस की खुराक, डीएसएस प्रशासन की लंबाई औरडीएसएस5,6,7के आणविक वजन के आधार पर भिन्न होती है।
डीएसएस कोलाइटिस के दौरान आंतों के म्यूकोसल क्षति का मूल्यांकन आमतौर पर रोग गतिविधि सूचकांक (दाई) का उपयोग करके किया जाता है, जो वजन घटाने, मल रक्त सामग्री और मल स्थिरता द्वारा निर्धारित एक समग्र स्कोर है। मल रक्त सामग्री सूक्ष्म हो सकती है (स्टूल गुआइक एसिड टेस्ट का उपयोग करके पता लगाया जा सकता है) या स्थूल; मल स्थिरता को हार्ड, सॉफ्ट या लिक्विड (यानी दस्त)5, 8के रूप में वर्गीकृत कियाजाताहै । इन नैदानिक मापदंडों का स्कोरिंग व्यक्तिपरक हो सकता है और उपयोगकर्ता के अनुभव और पूर्वाग्रह के आधार पर भिन्न हो सकता है, हालांकि कुल मिलाकर, डेटा विश्वसनीय जानकारी प्रदान करता है और इस प्रकार आईबीडी शोधकर्ताओं द्वारा व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है। इसके विपरीत, म्यूकोसल क्षति के हिस्टोलॉजिकल मूल्यांकन के लिए आम तौर पर स्वीकार्य विधि नहीं है। सबसे अधिक, कोलन के चयनित क्षेत्रों का निरीक्षण एक प्रशिक्षित पैथोलॉजिस्ट द्वारा किया जाता है और कई मापदंडों के आधार पर बनाए जाते हैं जिनमें आमतौर पर क्रिप्ट इंजरी और ल्यूकोसिटे घुसपैठ9,10,11शामिल होते हैं। हालांकि, क्योंकि जांच किए गए मापदंडों की संख्या और विश्लेषण किए गए ऊतकों की मात्रा व्यक्तिगत रिपोर्टों के बीच काफी भिन्न होती है, कई प्रकाशित अध्ययनों की तुलनीयता सीमित है। पर्यवेक्षक पूर्वाग्रह को कम करने और अंतर अध्ययन सामंजस्य को बढ़ाने के लिए, एक आदर्श हिस्टोलॉजिकल स्कोरिंग प्रोटोकॉल को शामिल करना चाहिए: 1) में पेट की पूरी लंबाई शामिल होनी चाहिए, क्योंकि आंतों की म्यूकोसल सूजन सबसे अधिक बार चरती है और घावों को छोड़ना आम है, 2) व्यक्तिपरकता को कम करने के लिए विशिष्ट कुंजी और आसानी से व्याख्या योग्य मापदंडों के लिए विश्लेषण को सीमित करें, 3) बड़ी संख्या में नमूनों की तेजी से, सुसंगत प्रसंस्करण की सुविधा प्रदान करते हैं, और 4) डेटा अधिग्रहण, विश्लेषण और प्रस्तुति के लिए व्यापक रूप से उपलब्ध और किफायती उपकरणों का उपयोग करते हैं।
यहां हम डीएसएस-प्रेरित कोलाइटिस के कारण आंतों की म्यूकोसल सूजन और क्षति का विश्लेषण करने के लिए एक मुफ्त कंप्यूटर-असिस्टेड स्कोरिंग सिस्टम के उपयोग के साथ-साथ “स्विस रोल” विन्यास में छोटी आंत के पूरे पेट या लंबे खंडों को संसाधित करने के लिए एक तकनीक का वर्णन करते हैं।
Protocol
Representative Results
Discussion
हमारा हिस्टोलॉजिकल कोलाइटिस स्कोर सिस्टम आंत में ऊतक सूजन और क्षति की मात्रा निर्धारित करने के लिए एक विश्वसनीय उपकरण का गठन करता है। यह दृष्टिकोण छोटे क्षेत्रों या अपूर्ण वर्गों के चयन के पूर्वाग्र…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक NIH धन DK055679, DK089763, DK079392, DK061739, DK072564 और मिशिगन पैथोलॉजी स्लाइड स्कैनिंग सेवाओं के विश्वविद्यालय से समर्थन स्वीकार करना चाहते हैं ।
Materials
| Aperio AT2 – High Volume, Digital Whole Slide Scanning | Leica Biosystems | Aperio AT2 | |
| Absorbent Underpads with waterproof moisture barrier | VWR International | 56616-032 | |
| American Line 66-0089 Single Edge Blade, 100 per pkg | GT Midwest | TL5837 | |
| BD Luer-Lok Disposable Syringes without Needles | Fisher scientific | 14-823-2A | |
| Bonn Strabismus Scissors – ToughCut | Fine Science tools | 11103-09 | |
| Bonn Strabismus Scissors – ToughCut | Fine Science tools | 14084-09 | |
| Dumont #5 Forceps | Fine Science tools | 11251-20 | |
| Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma | HT501640-19L | |
| HistoPrep 70% Ea | Fisherbran | 70% denatured ethyl alcohol | |
| ImageScope | Aperio | Version 12.3.3.5039 | http://www.leicabiosystems.com/pathology-imaging/aperio-epathology/integrate/imagescope/ |
| LeakBuster Specimen Containers: Sterile | Starplex Scientific | B120210 | |
| Phosphate-Buffere Saline, without calcium & magnesium | Corning | 21-040-CV | |
| Plastic Feeding tubes, 20 GA x 30 mm | Instech | FTP2030 | |
| PrecisionGlide Needle, Size: 20 G x 1 1/2 in | BD (Becton, Dickinson and Company) | 305176 | |
| PrecisionGlide Needle, Size: 27 G x 1/2 in | BD (Becton, Dickinson and Company) | 305109 | |
| Syringe, 10 ml | BD (Becton, Dickinson and Company) | 302995 | |
| Unisette Tissue Cassettes | Simport | M505-2 |
Referencias
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