यह पांडुलिपि माउस में अवरक्त पेट महाधमनी में रखे कैथेटर के माध्यम से एक गुर्दे को लक्षित प्रसव के लिए एक विधि का वर्णन करती है।
गुर्दे के अनुसंधान क्षेत्र में दवा लक्ष्यों के कुशल मूल्यांकन के लिए वृद्धि हुई और विशिष्ट गुर्दे के जोखिम को सक्षम करने के लिए निर्देशित इंजेक्शन की आवश्यकता है । इंजेक्शन की प्रकृति के आधार पर कुछ अंगों में दवाओं का संचय प्रतिकूल और अवांछित प्रभावों को जन्म दे सकता है। अन्य ऊतकों में स्पिलओवर और/या संचय को कम करने के लिए, इसमें वर्णित विधि इन्फ्रा गुर्दे महाधमनी में कैथेटर डालकर गुर्दे की धमनी रक्तधारा में निर्माण को निर्देशित करती है, जहां यह गुर्दे की धमनी में शाखाएं होती है, जिसके परिणामस्वरूप गुर्दे में पहले अंग तक पहुंच गया और पूरे गुर्दे में निर्माण का वितरण होता है ।
यह पांडुलिपि विधि का विस्तृत विवरण प्रदान करती है, साथ ही इसकी चुनौतियों और कठिनाइयों को भी प्रदान करती है। यह प्रयोगकर्ता को इस प्रकार की माइक्रोसर्जरी के साथ कुशल बनने के लिए मार्गदर्शन करता है जिसके लिए बाँझ परिस्थितियों में सटीकता की आवश्यकता होती है। इस्केमिया को कम करने के लिए गति महत्वपूर्ण है और प्रक्रिया का अभ्यास प्रतिकूल प्रभावों के बिना सफल इंजेक्शन की संभावना में वृद्धि करेगा। इंजेक्शन और रिफ्यूजन के साथ-साथ इंजेक्शन की मात्रा के बीच के समय को मॉडुलन करके, अन्य अंगों को स्पिलओवर का जोखिम कम हो जाता है।
ध्यान दें कि यह तकनीक एकल डोजिंग रणनीतियों के लिए उपयुक्त है।
दवा उद्योग के भीतर पूर्व नैदानिक अनुसंधान क्षेत्र में, मॉडल और विधि-विकास दैनिक कार्य का हिस्सा है। वहां विशिष्ट अंगों के लिए दवाओं को प्रत्यक्ष करने की क्षमता के लिए एक बढ़ती रुचि है, या यहां तक कि एक अंग के अलग डिब्बों, प्रमुख spillover/फंसाने के बिना, खून के माध्यम से, अंय ऊतकों में । इससे विभिन्न रोग क्षेत्रों 1,2,3, 4के मॉडलों में दवा लक्ष्यों के कुशल मूल्यांकन के लिए वृद्धि और विशिष्ट एक्सपोजर हो सके ।
पदार्थों को वितरित करने का एक आम तरीका प्रणालीगत मार्गों (उदाहरण के लिए, पूंछ नस के माध्यम से) द्वारा है क्योंकि यह इस पांडुलिपि में वर्णित विधि की तुलना में कम आक्रामक है। हालांकि, प्रणालीगत प्रशासन फेफड़े,यकृत और तिल्ली 2,3,5जैसे अंगों को फ़िल्टर करते समय, इच्छित लक्ष्य अंग की तुलना में अन्य ऊतकों में बढ़ते मेटाबोलिज्म या यौगिक के संचय का खतरा बढ़ा देता है। किस्मत में ऊतक तक नहीं पहुंचने के अलावा, यह संभवतः इंजेक्शन की प्रकृति के आधार पर प्रतिकूल और/या अवांछित प्रभाव को जन्म दे सकता है । अंगों को छानने की केशिकाएं केवल बहुत छोटे अणु ही गुजरते हैं और इसलिए यदि बड़े अणुओं के साथ काम करना 6है तो लक्षित वितरण विशेष रूप से महत्वपूर्ण है ।
अन्य ऊतकों में, इंजेक्शन निर्माण के स्पिलओवर और/या संचय को कम करने के लिए, इसमें वर्णित विधि गुर्दे की धमनी रक्तधारा में एक कैथेटर के माध्यम से निर्माण को निर्देशित करती है, जहां नीचे पेट महाधमनी में डाला जाता है, जहां यह गुर्दे की धमनी में शाखाएं होती है, जिसके परिणामस्वरूप गुर्दे में पहली बार अंग तक पहुंच जाता है । इस निर्देशित प्रशासन के साथ एक और लाभ यह है कि कम खुराक / मात्रा का उपयोग प्रणालीगत प्रशासन 3के माध्यम से प्राप्त एक्सपोजर के समान स्तर तक पहुंचने के लिए किया जा सकता है ।
प्रशासन के अन्य मार्गों का पता लगाया गया है, उदाहरण के लिए, गुर्दे की धमनी में सीधे कैथेटर के माध्यम से इंजेक्शन। हमारे हाथों में, यह गुर्दे के लिए परिसंचरण को बहाल करने में विफलता का एक उच्च जोखिम पेश करने के लिए पाया गया था । गुर्दे की धमनी का बहुत छोटा व्यास (व्यास में लगभग 0.35-0.55 मिमी) चीरा अपेक्षाकृत बड़ा बनाता है और प्रवेश छेद को बंद करते समय बाधा और/या एम्बोलिज्म का खतरा पैदा करता है । हमारे अनुभव के अनुसार इस्कीमिक से संबंधित गुर्दे को नुकसान अक्सर जब इस विधि का उपयोग कर हुआ, और इसलिए हम सफलतापूर्वक बड़े महाधमनी के चीरा के माध्यम से पदार्थों इंजेक्शन द्वारा गुर्दे को लक्षित करने के लिए गुर्दे को लक्षित करने के इस नए तरीके से विकसित की है ।
चूहों में इसी तरह की तकनीक विकसित की जा रही है जो स्टेनोसिस/थ्रोम्बोसिस की चुनौतियों और जोखिम को भी प्रकट करती है जो सीधे गुर्दे की धमनी 5में इंजेक्शन के साथ काम कर रही है । यह हमारे निष्कर्षों का समर्थन करता है क्योंकि चूहों में जहाजों भी छोटे हैं ।
इस पांडुलिपि और वीडियो का वर्णन, विस्तार से, कैसे इंजेक्शन अवरक्त महाधमनी में डाला कैथेटर के माध्यम से चूहों में गुर्दे की धमनी में निर्देशित किया जा सकता है, साथ ही साथ कैसे प्रक्रिया में आम कठिनाइयों को दूर करने के लिए, सबसे सुरक्षित संभव तरीके से काम करने के लिए और इस तरह प्रजनन क्षमता में वृद्धि में मार्गदर्शन ।
यह विधि गुर्दे को नुकसान पहुंचाए बिना गुर्दे तक फॉर्मूलेशन पहुंचाने में सफल रही है। इसका उपयोग किसी भी प्रकार के योगों (जैसे छोटे अणुओं, स्टेम/जनक कोशिकाओं, या माइक्रोवेसिकल्स) के वितरण के लिए किया जा सकता है। विधि स्वस्थ जानवरों में या गुर्दे की बीमारी मॉडल में लागू किया जा सकता है।
चित्रा 2 और चित्रा 3में, हिसटोलॉजी प्रस्तुत की गई है। चित्रा 2 परफ्यूजन के बाद हिसिटोलॉजी 180 मिनट दिखाता है जबकि चित्रा 3 जलसेक के 7 दिन बाद इतिहास दिखाता है। इसका कारण यह है कि गुर्दे की धमनी के साथ प्रयोग केवल 180 मिनट लंबा था। यह सुनिश्चित करने के लिए कि हमें इस नई विधि के साथ कोई पुरानी क्षति नहीं हुई थी, हमने जानबूझकर उनका मूल्यांकन करने के लिए 7 दिनों का इंतजार किया। एन-नंबर छोटा है लेकिन यह सिर्फ एक उदाहरण है ।
ध्यान दें कि गुर्दे को लक्षित करने के लिए महाधमनी प्रशासन की यह नव विकसित विधि अपेक्षाकृत कम थ्रूपुट के साथ एक आक्रामक विधि है और केवल एकल डोजिंग रणनीतियों के लिए उपयुक्त है। इस विधि से बार-बार डोजिंग संभव नहीं है।
लिगेचर प्लेसमेंट के मामूली समायोजन के साथ इस विधि का उपयोग संभवतः दोनों गुर्दे को एक साथ5,7में डालने के लिए किया जा सकता है । महाधमनी ब्रांचिंग के माध्यम से स्पिलओवर के बढ़ते जोखिम के साथ हमने ओक्लिडिंग लिगेचर को यथासंभव गुर्दे के करीब रखने का फैसला किया, जिससे इंजेक्शन केवल बाईं किडनी में ही हो गया। इसका उपयोग अन्य मॉडलों या तकनीकों जैसे अनिफ्रेक्टॉमी या शायद एक साथ गुर्दे के इस्केमिया रिपरफ्यूजन चोट (आईआरआई) के अलावा भी किया जा सकता है। हमारी राय में, इंजेक्शन कर केवल 24 घंटे के बादIRI 3 सर्जरी भी कठोर है और जानवर की वसूली काफी प्रभावित करेगा ।
चूहों के नए उपभेदों का उपयोग करते समय, किसी को हमेशा उस तनाव से कुछ जानवरों पर एक प्रायोगिक प्रयोग करना चाहिए ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि विधि को किसी तरह से समायोजित करने की आवश्यकता नहीं है। उदाहरण के लिए, कुछ उपभेदों में महाधमनी से पोत-ब्रांचिंग को थोड़ा अलग स्थान दिया जा सकता है। लिगेचर्स की स्थिति कुछ हद तक बदल सकती है ताकि यह सुनिश्चित किया जा सके कि निर्माण सही स्थान पर समाप्त होता है।
निर्जलीकरण
पेट की गुहा खोलने से डिहाइड्रेशन का बड़ा खतरा हो जाता है। इसलिए सर्जरी के बाद ऑपरेटिव के लिए अच्छा आधार सुनिश्चित करने के लिए सर्जरी के दौरान और बाद में तरल पदार्थ (लगभग 37 डिग्री सेल्सियस) जोड़ना अनिवार्य है। हम आमतौर पर 1 एमएल/चूहों एस.c पोस्ट सर्जरी देते हैं ।
इस्केमिया
लंबे समय तक सर्जरी का समय या यदि पूर्ण रिसर्चर तक पहुंचने में विफल रहने से इस्केमिया में परिणाम होगा। वास्तविक इस्केमिया समय को रिकॉर्ड करना और यह सुनिश्चित करना महत्वपूर्ण है कि गुर्दे (और पीछे के पैरों) के लिए परिसंचरण बहाल किया जाए। लगातार प्रशिक्षण और कौशल की ताज़ा, हमेशा की तरह, महत्वपूर्ण हैं । प्रक्रिया को तेजी से करने से किडनी के इस्केमिया के संपर्क में आने का समय कम हो जाता है। इस्केमिया समय (महाधमनी का बंधन) को लगभग 5 मिनट (10 मिनट अधिकतम) तक रखते हुए किडनी को नुकसान नहीं पहुंचाने के लिए दिखाया गया है।
अप्रत्यक्ष प्रभाव
अन्य अंगों के लिए spillover के जोखिम को ध्यान में रखते हुए जब इंजेक्शन निर्माण गुर्दे नस के माध्यम से संचलन में फिर से प्रवेश कर रहा है, इंजेक्शन की मात्रा एक ंयूनतम करने के लिए रखा जाना चाहिए । हम 50 माइक्रोन की अधिकतम मात्रा की सलाहते हैं। खुराक भी पाया गया है, दूसरों के द्वारा, दक्षता3के लिए एक महत्वपूर्ण कारक हो।
प्रतिकूल प्रभाव (थ्रोम्बोसिस और पक्षाघात)
शुरू में जब मॉडल की स्थापना हम पीछे पैरों में पक्षाघात के साथ गैर लगातार समस्याओं का अनुभव । एंटीकोगुलैंट (पूंछ नस में हेपरिन के 10 आईयू) की प्रासंगिक खुराक के बाद, इस प्रतिकूल प्रभाव में काफी कमी आई थी। क्षेत्र में विशेषज्ञों से परामर्श करने के बाद, हम भी atraumatic सर्जरी के साथ काम करने में और भी अधिक सावधान रहना शुरू कर दिया, किसी भी ऊतकों में कोई चुटकी अर्थ और संभव के रूप में छोटे क्षेत्रों के रूप में छू । एक साथ किए गए इन कार्यों ने पक्षाघात की आवृत्ति को लगभग ५०% से घटाकर लगभग किसी को नहीं किया ।
प्रारंभ में विधि विकास के दौरान, हमने चीरा छेद को बंद करने के लिए गुर्दे की धमनी पर एंटीकोगुलैंट ऊतक लागू किया। महाधमनी में इंजेक्शन लगाते समय यह संभव नहीं था क्योंकि महाधमनी में दबाव इतना अधिक है। एंटीकोगुलेंट अगर वेसल ल्यूमेन में प्रवेश करता है तो थ्रोम्बोसिस का खतरा भी बढ़ जाता है।
यह सुनिश्चित करें कि एडवेंटिया के बाद से जब बहुत थ्रोम्बोजेनिक है तो महाधमनी के लुमेन में एडवेंटिया उजागर न हो। इसके अलावा किसी भी उलटा घाव किनारों से बचें या जांघ को टांका लगाकर महाधमनी को संकुचित करें।
अब हमारे पास फॉर्मूलों को सीधे गुर्दे तक पहुंचाने के लिए एक स्थापित तरीका है।
The authors have nothing to disclose.
एक विशेष डिजाइन कैथेटर के उत्पादन में सहयोग के लिए तकनीक और इंस्टेक प्रयोगशालाओं को बेहतर बनाने में मेरी मदद करने के लिए आरआरएसएससी में रेने रेमी के लिए धन्यवाद। ध्वनि के साथ वीडियो को पूरा करने के लिए टिप्स और ट्रिक्स के साथ-साथ ज़ेरॉक्स के साथ उत्पादक चर्चाओं के लिए एस्ट्राजेनेका आर एंड डी में सभी सहयोगियों के लिए एक बड़ा धन्यवाद भी।
Blunt hook 5mm 8/pack | Cooper surgical | 3316-8G | |
ETHILON Nylon Suture 11/0 | Ethicon | W2881 | For vessel |
Microsurgery forceps curved | Karo Pharma | FRC-15 RM-8 | |
Microsurgery forceps straight | Karo Pharma | FRS-15 RM-8 | |
Mouse renal artery cannula, 3mm 32ga stainless steel, 10cm 2Fr PU, fits 25ga | Instech | C07SS-MRA1813 | |
Vicryl, 6-0, BV-1 needle | Angthos | W9575 | For abdominal cavity |