Экспериментальный аутоиммунный увеит: внутриглазная воспалительная модель мыши

Этот протокол продемонстрирует, как индуцировать экспериментальный аутоиммунный увеит (EAU) у мыши C57BL/6J путем однократной подкожной инъекции антигена сетчатки в эмульгированном адъюванте. Методы мониторинга и оценки прогрессирования заболевания будут детализированы с помощью фандоскопической визуализации и гистологического исследования с изложенными в них параметрами измерения. Кроме того, будет обсуждаться флуоресцеиновая ангиография, методика исследования структуры кровеносных сосудов сетчатки и проницаемости.

Эта модель EAU резюмирует центральные особенности неинфекционного заднего увеита у людей в отношении клиникопатологических характеристик и основных клеточных и молекулярных механизмов, которые управляют заболеванием. EAU опосредована подмножествами Th1 и/или Th17 самореактивных CD4⁺T-лимфоцитов, как показано в экспериментах по переносу усыновления и у мышей, обедненных IFNγ¹. Большая часть нашего понимания потенциальной роли этих клеток при увеите исходит из изучения EAU², где клетки Th1 и Th17 обнаруживаются в тканях сетчатки³. Часто EAU используется в качестве доклинической модели для оценки полезности новых методов лечения в ослаблении заболевания. Терапевтические подходы, которые успешно модулировали болезнь EAU, показали некоторую эффективность в клинике и достигли статуса одобренного FDA. Примерами этого являются группы иммунорегуляторных препаратов, таких как Т-клеточная таргетная терапия: циклоспорин, FK-506 и рапамицин ^4,5,6. В последнее время в этой модели также были изучены вмешательства, нацеленные на новые пути, для изучения как механизма, так и влияния на исход заболевания. К ним относятся нацеливание транскрипционной регуляции через считыватель хроматина Bromodomain Extra-Terminal (BET) белки и ингибиторы P-TEFb³. Более того, более традиционные подходы, такие как ингибитор VLA-4, недавно продемонстрировали подавление в EAU посредством модуляции эффекторных CD4 ⁺ Т-клеток⁷. Кроме того, было обнаружено, что нацеливание на клетки Th17 с помощью TMP778, обратного агониста RORγt, значительно подавляет EAU⁸. Кроме того, эта модель дает возможность изучить хроническое аутоиммунное воспаление в сетчатке и сопутствующие основные механизмы, такие как прайминг лимфоцитов.

Основными показаниями для доклинических исследований EAU являются клиническая оценка путем выполнения визуализации фундоскопии сетчатки и реже путем оценки целостности сетчатки с помощью оптической когерентной томографии (OCT). Гистопатологическая оценка сетчатки и иммунофенотипирование клеток сетчатки методом проточной цитометрии затем проводятся при прекращении. Фундоскопия – это простая в использовании живая система визуализации, которая позволяет быстро и воспроизводимо проводить клиническую оценку всей сетчатки. Для иммуногистохимических оценок методики основаны на подготовке срезов сетчатки, которые позволяют изучать архитектуру тканей на степень воспаления и структурного повреждения⁹. Критерии оценки и традиционные системы оценки для всех используемых методов будут изложены в рамках этого протокола. Степень повреждения, регистрируемого с помощью фандоскопической визуализации, часто тесно коррелирует с гистологическими изменениями. Этот двойной подход к мониторингу и оценке тяжести заболевания обеспечивает большую чувствительность и более надежные результаты измерения.

EAU является хорошо зарекомендовавшей себя, широко используемой моделью для доклинического тестирования и исследования иммуноопосредованных заболеваний глаз. Эта модель надежна и воспроизводима с >95% заболеваемости и генерирует всеобъемлющие данные, которые могут быть использованы для проверки или отказа от новых методов лечения внутриглазного воспалительного заболевания, которое представляет собой основную причину слепоты трудоспособного возраста во всем мире¹⁰.