Prostat Kanseri Biyobankacılık Için Örnekleme Prosedürleri Kılavuzu manyetik rezonans görüntüleme ve biyopsi verilerinin kullanımı
Summary
Bu yöntem, radikal prostatektomi sonrası biyobankacılık dokusunda örnekleme prosedürlerini yönlendirmek amacıyla prostat kanseri hastaları için klinik tanı salk›r›m verilerinin kullan›m›n› kapsamaktadır. Bu, daha geniş bir akış aşağı uygulama yelpazesi için taze dokunun verimliliği ve kullanılabilirliği etrafında daha önce yayınlanmış yöntemlerle ilgili sorunların üstesinden gelir.
Abstract
Radikal prostatektomi sonrası biyobankacılık prostat dokusu için önceki yöntemler genellikle rastgele örnekleme içeriyordu. Verimliliği artırmak ve daha geniş bir aşağı akım uygulaması aralığına olanak sağlamak için, prostat dokusunu örneklemede daha hedefli bir yöntem geliştirilmiştir. Burada örnekleme için organın belirli alanlarını hedeflemek için hem manyetik rezonans görüntüleme (MRG) hem de biyopsi verilerini kullanıyoruz. Bu yöntem, prostatın önceden belirlenmiş bir bölgesinden 5 mm’lik enine dilimi kaldıran daha önce yayınlanmış bir prostat dilimleme cihazının kullanımını ve ardından bu dilimin önceden belirlenmiş bölgelerinden 6 mm yumruk biyopsisinin çıkarılmasını içerir. Bu numuneler dondurulmuş veya biyobankacılık amacıyla sabit saklanabilir veya rastgele örnekleme yaklaşımından % 10 güven ile karşılaştırıldığında, tümör içeriği% 70 güven ile hemen taze kullanılabilir. Bu genomik, proteomik veya histolojik çalışma gibi tüm standart downstream tekniklerinin kullanımını sağlar, ama aynı zamanda canlı doku görüntüleme veya ex vivo kültür gibi taze doku gerektiren iş.
Introduction
Yüksek kaliteli insan prostat kanseri dokusuna erişim alanında etkili araştırma sürüş için önemli bir gerekliliktir. Radikal prostatektomi sonrası prostat dokusunu örneklemek için çeşitli yöntemler vardır. Tipik olarak bunlar, prostat dokusunun taze, dondurulmuş veya sabit bir diliminden rastgele numune almak için yumruğa biyopsiler kullanılmasını ve her örnekte hematoksilin ve eozin (H&E) tarafından değerlendirildiği gibi tümörün bulunup bulunmadığını retrospektif olarak doğrulamayı içerir. üropatolog1,2,3,4,5. Yakın tarihli bir inceleme bu mevcut yöntemlerin genel bir bakış derledi6. Bu yöntemler, uluslararası kanser genom konsorsiyumu (ICGC) ve Kanser Genom Atlası (TCGA) gibi büyük ölçekli genomik analizler gibi dokuların daha sonraki bir tarihte tümör içeriği için depolanabileceği ve değerlendirilebileceği bazı downstream uygulamaları için yararlıdır. 4,7. Ancak, manyetik rezonans görüntüleme (MRG) ve/veya biyopsi verilerini örnekleme için prostatın belirli bölgelerini hedeflemek için kullanırsak bu yöntemler geliştirilebilir. Bu iki şekilde metodolojigeliştirmek olacaktır; birincisi, toplanan doku örneklerinin sayısını azaltarak, verimliliği artırarak ve patoloji bölümleri ve depolama maliyeti üzerindeki baskıyı azaltarak, ikinci olarak da taze dokunun hemen onaya gerek kalmadan kullanılmasına izin vererek tümör içeriği, canlı doku görüntüleme, organoid nesil veya ex vivo kültür gibi sanat downstream teknolojileri yeni devlet için. Bu araştırma ihtiyacı PEOPLE (REsearch için PatiEnt prOstate samPLes) yönteminin geliştirilmesine yol açmıştır ve ilk 84 vakanın sonuçları PEOPLE kullanılarak biyobanked son zamanlarda8yayınlandı . Bu yöntemin bir varyasyonu da üç boyutlu (3D) baskılı dilimleme aparatı ve hastaya özgü kalıp ile yayınlanmıştır, ön ve fiksasyon sonrası doku ex vivo MRI kolaylaştırmak için9,10.
Protocol
Representative Results
Discussion
Bu protokol deki kritik adımlar arasında tümör bölgesinin örnekleme için tanımlanması, prostat ölçümü ve doku örneklemesi yer almaktadır. İlk olarak, örneklemenin doğru alanını belirlemek için MRG ölçümü önemlidir. Bu yöntemi eşlik eden videoda gösteriyoruz; ancak, ilk etapta bir radyolog ile ölçümlerin onaylanmasını da öneririz. İndeks lezyonu içeren MR Görüntüleri alanına doğru araştırmacı noktası net klinik notlar idealdir. İkinci olarak, prostat ölçümü dikkatle yapılmalıdır, cetvel prostat ın ön paralel, tabandan tepeye tam uzunluğu ölçmek için bir açıda tutulur sağlanması. Üçüncü olarak, tümör bölgeleri orijinal MRI görüntüsüne göre doku dilimini görsel olarak inceleyerek, doku palpe edilerek (bazı durumlarda tümör bölgesi daha yoğun hissedebilir) ve görsel olarak dokunun rengini değerlendirerek örneklemeden önce teyit edilmelidir (bazı durumlarda tümör çevreleyen benign dokudaha soluk görünecektir).
Bu protokol ucl/UCLH’de klinik olmayan doktora sonrası araştırmacılar, patoloji uzmanı, patoloji danışmanları ve araştırma teknisyenleri tarafından tam olarak gerçekleştirilmiştir. Deneyimlerimize göre protokolün tüm adımları teknik arka plan ne olursa olsun on vaka altında öğrenilebilir. Ancak, bir radyologdan MRG ölçümü ve ilk etapta dilimleme ile ilgili bir patologdan eğitim almanızı öneririz. Protokol, daha önce10olarak yayımlandığı gibi, 3B baskılı dilimleme tutamacı kullanılarak değiştirilebilir.
Tekniğin olası sınırlamaları tanıda engellenme riskini içerir. Prostat dilimleme yanlış yapılırsa derecelendirme veya pozitif marj oranları engelleyebilir önemli bir adımdır. Burada iki potansiyel sorun var. İlk olarak, indeks lezyonunun tamamı çıkarılır ve hemen taze doku deneyi için kullanılırsa, bu lezyon için rutin klinik tanı yapılmaz ve hastaya daha düşük dereceli kanser tanısı konulabilir. Bunu önlemek için araştırmacı, örneklemeden önce vakayı rutin olarak gözden geçirecek olan danışman patologla örnekleme planını tartışmalı ve alınacak numunelerin sayısı ve yeri üzerinde anlaşmalıdır. Bu nedenle küçük tümörler lokal olarak dışlanabilir. İkinci olarak, prostat kapsülü fiksasyon dan önce mantar tahtasına doğru bir şekilde sabitlenmezse, bu iç dokunun fiksasyon sırasında dışa doğru şişkinlik etmesine izin vererek cerrahi marjları değiştirebilir. Bu yanlış bir pozitif marjyol açabilir, kalan tümör kapsül de tamamen doku çözgü nedeniyle ikamet gibi görünüyor nerede.
Bu tekniğin mevcut yöntemlere göre önemi esas olarak tümör hedeflemesi ile ilgilidir. Bugüne kadar radikal prostatektomi örneklerinin örneklenme yöntemleri yayınlanmıştır; ancak, bunların hepsi tamamen veya kısmen rastgele örnekleme yaklaşımı1,2,3,4,5,6,7güveniyor. Biyopsi kullanımı ve özellikle MRG veri burada verimlilik artırıldı, tümör dokusu elde artan güven ile azaltılmış örnekleme için izin8.
Bu yöntemin gelecekteki uygulamaları, önceki örnekleme yöntemlerine göre daha geniş bir akış aşağı tekniği yelpazesinin benimsenmesine olanak sağlar. Örneğin, tümör olma olasılığı yüksek olan taze dokunun kullanılabilirliği, tümörün varlığını sağlamak için birçok örnek gerektirmediğinden, daha pahalı ve/veya emek yoğun taze doku tekniklerinden yararlanılabildiği anlamına gelir. Bu, ex vivo kültür, ex vivo MRG, gelişmiş görüntüleme ve transkripsiyon dahil ve bunlarla sınırlı değildir.
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar Prostat Kanseri İngiltere Mükemmellik ve Seyahat Ödülü Bursu (TLD-PF16-004) ve HP INNOVATE (PG14-018-TR2) altında SH fon için Prostat Kanseri İngiltere kabul etmek istiyorum. Bu çalışma, Ulusal Sağlık Araştırma Enstitüsü University College London Hospitals Biyomedikal Araştırma Merkezi’ndeki araştırmacılar tarafından desteklenmiştir.
Materials
| 6 mm biopsy punch | Fisher Scientific | 13404607 | Disposable biopsy punches for removing 6 mm tissue samples |
| Black Ink | Leica Biosystems | 3801753 | Tissue marking & margin dye |
| Blue Ink | Leica Biosystems | 3801751 | Tissue marking & margin dye |
| Chainmail hand glove | Arco | 1456803 | Chainmail gloves to protect hand during slicing |
| Cork board | Fisher Scientific | 12396447 | Cork board for pinning prostate to following sampling procedure |
| Needles | SLS (Scientific Laboratory supplies) | SYR6112 | Sterile needles to use to pin tissue to cork board following sampling |
| Prostate slicing aparatus | Insitute of Cancer Research, London | NA – must be obtained under MTA | A kit containing the slicer handle, blades, spacer, base, walls and pins |
Referencias
- Sooriakumaran, P., Henderson, A., Denham, P., Langley, S. E. A novel method of obtaining prostate tissue for gene expression profiling. International Journal of Surgical Pathology. 17 (3), 238-243 (2009).
- Jhavar, S. G., et al. Processing of radical prostatectomy specimens for correlation of data from histopathological, molecular biological, and radiological studies: a new whole organ technique. Journal of Clinical Pathology. 58 (5), 504-508 (2005).
- Wheeler, T. M., Lebovitz, R. M. Fresh tissue harvest for research from prostatectomy specimens. The Prostate. 25 (5), 274-279 (1994).
- Esgueva, R., et al. Next-generation prostate cancer biobanking: toward a processing protocol amenable for the International Cancer Genome Consortium. Diagnostic Molecular Pathology. 21 (2), 61-68 (2012).
- Dev, H., et al. Biobanking after robotic-assisted radical prostatectomy: a quality assessment of providing prostate tissue for RNA studies. Journal of Translational Medicine. 9, 121 (2011).
- Tolkach, Y., et al. Blind Biobanking of the Prostatectomy Specimen: Critical Evaluation of the Existing Techniques and Development of the New 4-Level Tissue Extraction Model With High Sampling Efficacy. The Prostate. 77 (4), 396-405 (2017).
- Warren, A. Y., et al. Method for sampling tissue for research which preserves pathological data in radical prostatectomy. The Prostate. 73 (2), 194-202 (2013).
- Heavey, S., et al. PatiEnt prOstate samPLes for rEsearch, a tissue collection pathway utilizing magnetic resonance imaging data to target tumor and benign tissue in fresh radical prostatectomy specimens. The Prostate. 79 (7), 768-777 (2019).
- Bailey, C., et al. VERDICT MRI validation in fresh and fixed prostate specimens using patient-specific moulds for histological and MR alignment. NMR in Biomedicine. 32 (5), 4073 (2019).
- Bourne, R. M., et al. Apparatus for Histological Validation of In Vivo and Ex Vivo Magnetic Resonance Imaging of the Human Prostate. Frontiers in Oncology. 7, 47 (2017).
