高分子ナノ粒子の疎水性および親水性化合物のカプセル化のため NanoPrecipitation をフラッシュします。

1. CIJ ミキサーを使用して高分子の NPs の疎水性化合物のカプセル化 準備し、装置をきれい。 調達および CIJ ミキサーを検証します。注: は、補足情報については建設セクション 1 を参照してください。CAD ファイルも補足情報として利用できます。 各使用する前に必ず CIJ ミキサーにすべての備品、居心地の良いとアウトレット チューブが曲げたりをつねった。 発煙のフードで、5 mL ルアーロック注射器を含む各インレット アダプターに溶媒の 2-3 mL を添付します。最近使用したミキサーで任意の化合物をきれいにする溶剤 (例えばアセトン) を選択します。注: 典型的な選択は、アセトンまたはテトラヒドロ フラン (THF)。のみ使用ポリプロピレン注射器など溶出溶媒の互換性の問題を避けるために。ゴム o リング シール プランジャーとシリンジを使用しないでください。 廃棄物コンテナーに CIJ アセンブリを設定します。注: CIJ の体よりも小さな開口部をもつフラスコ作品同様、このミキサーをサポートし、注射器の操作は簡単。 着実に数秒以上混合チャンバーを介してコンテンツを空にするシリンジのプランジャーを押し下げます。注射器を削除します。注: 注射器することができます保持、FNP 実行の間クリーニングを複数回再利用します。 N2ストリームを使用して CIJ ミキサー内部を乾燥させます。男性ルアーロック アダプター N2ラインの端には効果的です。注意: 洗浄溶媒がない場合揮発性 (例えばDMSO)、1.1.6 をステップに進む前にアセトンまたは THF と手順 1.1.3-1.1.5 を繰り返します。実行する整合性の残留溶媒を除去することが重要です。 ターゲット組成の溶媒および antisolvent ストリームを準備します。 FNP の実行の必要な数を完了するための十分な量で 10 mg/mL で不安定 thf 中での (すなわちビタミン E) 疎水性化合物を溶解します。準備実行ごとに必要なよりも少し。注: その他の溶剤は、制約の説明で、次の手順で使用できます。THF を採用し、ブチル化ヒドロキシトルエン、水溶解度の低いために、安定剤フリー溶剤がお勧め。(含む過酸化物テスト) 過酸化物の蓄積を避けるために、過酸化物の低レベルが (例えば色素の漂白) 特定の NP アプリケーションと干渉するかもしれないことに注意してください注意を使用します。 溶解するまで渦のミキサーにビタミン E ソリューションをミックスします。注: いくつかの化合物の 1-2 分の風呂超音波は溶存のソリューションを生成するときに助けるかもしれない。NP のすべてのコンポーネントが溶け込んでいる分子が重要です。 ブロック共重合体の安定剤を溶解 (すなわちポリスチレン-b- poly(ethylene glycol)、PS1.6 k-b-ペグ5 k) ポリマー溶液を形成するステップ 1.2.1 のように約同じ量で 10 mg/mL の thf 中で。注: その他の溶剤使用できます、ディスカッション セクションで詳細な制限があります。 高分子溶液を溶解するまで渦のミキサーでミックスします。必要に応じて、固体溶解で支援するために 1-2 分の超音波浴にソリューションを配置します。注: 高分子ミセル形式ですることはできません。動的光散乱法 (DLS) は、新しいストリーム構成がこの条件を満たすかどうかを決定するための便利なツールをすることができます。 1.5 mL 遠心チューブにビタミン E ソリューションの最初のピペッティング 0.25 mL をビタミン E の安定剤 (50% ビタミン E 荷重) 5 mg/mL を含む溶媒の入力ストリームを作成します。その後、同じ管に高分子溶液 0.25 mL のピペットします。注: 実行あたり 0.5 mL を超えるボリュームが異なるシリンジ サイズ可能です。10 mL 投入量、上記シリンジ ポンプを使用するは実用的です。 必要に応じて 5-10 s. の渦のミキサーでよく混ぜて、CIJ 実行の間の再現性を向上したキャップに付いた液体を回復する 5-10 s 1000 x g でチューブを遠心分離します。 2 回目 1.5 mL 遠心チューブに antisolvent ストリームとして 0.525 mL の脱イオン水をピペットします。注: それは溶媒のストリーム決して antisolvent 存在せず混合室に入ることを保障する余分な antisolvent をした方が良い。溶剤/antisolvent 混合物の塩の溶解度が制限されていない場合によっては、バッファーに格納された水系を使用できます。 癒しのお風呂として 20 mL シンチレーション瓶その他の容器に 4 mL の脱イオン水をピペットします。バイアルに小さな電磁攪拌棒を配置します。注: 焼風呂ボリューム15,17で 10% に最後の溶剤含有量を下げることによってオストワルドが減少します。このボリュームは、プロセスの制約に対応する調整可能性があり、入力ストリームのボリュームを直接スケーリングすることができます。 FNP CIJ ミキサーを使用して NPs を生成します。 ヒューム フードのオープン焼風呂バイアル洗浄 CIJ ミキサー撹拌プレート上の下の位置。実用的な構成は、以下バイアルと CIJ ミキサーとバイアルに監督アウトレット チューブをサポートするのに 50 mL 試験管ラック ブロックを使用します。向きは、図 1 aを参照してください。 焼入バスを介して攪拌開始 75% 前後で電磁攪拌棒は最大速度です。 鈍い先端針装備 1 mL ポリプロピレン注射器を使用して、antisolvent チューブからボリューム全体を描画します。注: は、互換性の問題を避けるためにゴム製 o リングのシールを含む注射器を使用しないでください。大量流入は、適切なサイズのルアーロック注射器を使用します。注射器のコンセントは、注射器の軸を中心としたする必要があります。 またはそれ不安定になります恐慌。 慎重に注射器からすべての空気の泡を外し、鈍い先端針、鋭利な容器に廃棄します。 プランジャーの首相のストリームは、注射器の開口部にだけ来る。CIJ の入口継手のいずれかに注射器を接続します。 溶媒の解決のための手順 1.3.3-1.3.5 を繰り返します。 急速に、スムーズに、かつ均一に個人の好みに応じてプランジャーのてっぺんに手、手、手のひらまたは親指 1 つのボールを配置することによって同時に注射器を押します。焼風呂バイアルで排水を収集します。注: 0.5 mL 入力 0.5 未満で落ち込んで必要があります s。 CIJ ミキサーが注射器が接続されたまま置いておきます。攪拌棒を外し、コア-シェル粒子構造 (図 1) と NP 分散を含むバイアルのキャップします。 廃液容器にミキサーを押し、注射器を削除します。ホールド アップ ボリューム (約 0.25 mL) し、流出します。注射器を処分し、次の FNP の試用前に清掃手順 1.1 繰り返します。注: サンプルの均一性に悪影響を及ぼすように、NPs を含むバイアルには、空にホールド アップ ボリュームを許さない。 分析および分散 NP の後処理を実行します。 DLS を使用して NP サイズを特徴づける、プラスチック キュベットに NP 分散の 100 μ L をピペット、癒し風呂溶媒 (水など) の 900 μ L を追加します。注: より小さいボリュームは低ボリューム キュヴェットのため使用可能性があります。10 倍希釈で一般的に十分です。 よくピペッティングを上下することによって穏やかな揺れをミックスします。サンプルを分析計測器固有の指示に従います。メモ: 代替技術ようなゼータ電位分析や電子顕微鏡として実施が必要です。NP 分散は、アプリケーションによって決定される処理し、ディスカッション セクションで確認できます。 2. CIJ ミキサーを使用して逆の NPs の親水性化合物のカプセル化 溶剤、antisolvent を準備し、発煙のフード ソリューションを消します。 手順 1.1、THF で第 2 洗浄を完了する洗浄溶剤、1.1.6 の手順でメモに付着した DMSO を使用してのクリーニングおよび準備手順を完了します。 親水性化合物の溶解 (すなわち、ブドウ糖同等 (DE) 4-7、平均分子量とマルトデキストリン (MD) 3,275 g/mol、「3 k MD」を =) FNP の必要な数を完了する十分な量で 10 mg/mL の DMSO で実行されます。注: その他の溶剤使用できます、ディスカッション セクションで説明されている制限があります。 マルトデキストリン ソリューションを溶解するまで渦のミキサーでミックスします。必要に応じて、固体溶解で支援するために 1-2 分の超音波浴にソリューションを配置します。 ブロック共重合体の安定剤を作成する (すなわちポリスチレン-b- ポリ (アクリル酸)、PS5 k-b- PAA4.8 k) ステップ ポリマー溶液を形成する 2.1.2 のように約同じボリュームで 11.1 mg/mL の thf 中でソリューションを株式.注: その他の溶剤、安定剤濃度使用ことができます。DMSO は、代わりに THF 溶媒として容易に使用できます。 高分子溶液を溶解するまで渦のミキサーでミックスします。必要に応じて、固体溶解で支援するために 1-2 分の超音波浴にソリューションを配置します。注: 高分子入力はミセル形式ですることはできません。DLS は、新しいストリーム構成がこの条件を満たすかどうかを決定する使用できます。 1.5 mL 遠心管中の順序で、次を組み合わせることにより溶剤ストリーム入力 (0.5 mL) を準備: 0.250 3 k MD ソリューション、0.225 mL 0.025 mL の脱イオン水と高分子溶液の mL。メモ: このストリームの水分 NP サイズと多分散性の強い影響があります。一般的に 2.5 10 vol % の範囲20で動作することをお勧めします。範囲の上限の値より大きな分子量の化合物のカプセル化を助けるかもしれない。 5-10 s の渦のミキサーでよく混ぜます。 必要に応じて、CIJ 実行の間の再現性を向上したキャップに付いた液体を回復する 5-10 s 1000 x g でチューブを遠心分離機します。 25.0 mg/mL にメタノール中 (CaCl2) 塩化カルシウム二水和物の架橋剤溶液を準備します。注: 架橋剤は 1:1 電荷比の PAA ブロック内の酸のグループに追加されます。異なる架橋剤を使用する場合、または異なる PAA ブロック サイズまたはポリマー濃度は使用される20,21に濃度を調整してください。 ピペット 0.5 mL クロロホルムと架橋剤溶液 (0.55 mL 合計) 0.05 mL 遠心チューブに antisolvent ストリームを準備します。注: 他の許容 antisolvents ブロック共重合体の選択によって定まるし、通常ジクロロ メタンまたはアセトンが含まれます。架橋剤は、架橋形成20ように NP 分散の追加の加齢に伴う、癒し風呂に代わりに追加可能性があります。 5-10 s の渦のミキサーでよく混ぜます。 必要に応じて、CIJ 実行の間の再現性を向上したキャップに付いた液体を回復する 5-10 s 1000 x g でチューブを遠心分離機します。 癒しのお風呂を形成する 20 mL シンチレーション バイアルに (すなわちクロロホルム) antisolvent 4 mL を追加します。バイアルに小さな電磁攪拌棒を配置します。注意: このボリュームは、プロセスの制約に対応する調整可能性があります。 手順 1.3 で説明した NP 形成のためのプロトコルを完了します。 分析および分散 NP の後処理を実行します。 DLS を使用して NP サイズを特徴づける、ガラス キュベットに NP 分散の 100 μ L をピペット、癒し風呂用溶剤の 900 μ L を追加します。 上下ピペッティングでよく、キュヴェットの軽い動揺をミックスします。サンプルを分析するソフトウェアの指示に従います。注: NPs の架橋が質的に DL DL 希釈20として DMSO やジメチルホルムアミド (DMF) のような良い溶剤を使用して評価できます。安定した架橋である粒子は溶媒中での粒子サイズの変更を最小限の自己相関関数を展示いたします。悪い架橋粒子はうねりし、弱い自己相関関数と散乱強度21を展示します。 必要に応じて、アンモニア イオンの錯形成を駆動し、架橋粒子のコアを強化するなど、ベースを追加します。 また、重量測定法により水酸化アンモニウム (通常、30 wt % アンモニア) を利用したメタノール中のアンモニアの 3.48 mg/mL の溶液を準備します。攪拌しながら滴下 (すなわちポリマーの酸のグループに対して 0.6 相当) 50 μ L を追加します。注: いずれかの濃度を変化させることにより希望する場合と同等を調整ことができます。 またはボリュームが25を追加しました。 必要に応じて、年齢、発生する架橋穏やかな攪拌しながら 30 分以上。 前述の文学19,20,21微粒子またはコーティングの NPs を生成する NP 分散するプロセス。 3. 卵白アルブミン、μMIVM を使用して反転、NPs でのカプセル化 溶媒と antisolvent ソリューションを準備します。 脱イオン水 (「OVA」) の卵白アルブミンの 50 mg/mL の溶液を準備します。 ボリュームによって 10% の水を含む DMSO で OVA の 5 mg/mL の溶液を生成する DMSO の ml の 0.675 OVA 溶液の希釈 75 μ l 溶液 1.5 mL 遠心管中の 0.75 mL を準備します。よく混ぜ、遠心分離機の前述のように簡潔に。注: ステップ 2.1.6 水の効果についてを参照してください。前のセクションのように上下合わせて材料のニーズにソリューション ボリュームを拡張できます。 ブロック共重合体の安定剤を溶解することによりソリューション B の準備 (すなわちポリスチレン-b- ポリ (アクリル酸)、PS5 k-b- PAA4.8 k) 6 mg/mL の DMSO で。よく混ぜ、必要な場合を解消する超音波。1.5 mL 遠心チューブに 0.75 mL のピペットします。 THF (ソリューション C) 1.5 mL 遠心チューブに 0.75 mL のピペットします。 シンチレーション バイアルにクロロホルム (ソリューション D) 1.85 mL のピペットします。 塩化カルシウム二水和物の架橋剤液をメタノール 60.0 mg/mL を準備します。渦のミキサーを使って混ぜます。 アンモニア液をメタノール手順 2.3.4 4.17 mg/mL を準備します。 焼風呂として 15 mL 遠心チューブにクロロホルムの 5.25 mL を追加します。 ミキサー アセンブリを準備し、立ちます。 O リング スパナ レンチ、上のディスク ジオメトリ ディスクを混合、下部レシーバーを収集します。コンポーネントおよびミキサー スタンド用語の概略図は、図 2を参照してください。注:補足情報(セクション 1) と文学22MIVM 構築に関する詳細を見つけることが。CAD ファイルも補足情報として利用できます。 それがよく合うし、の摩耗や損傷の兆候がないことを確保する溝に o リングを配置します。注: 通常の操作は、摩耗または溶媒膨潤 O リングに します。拡大や変形、o リングが表示されている場合は、空気乾燥一晩使用する前にそれを許可します。図形が一晩に復旧しない場合は、o リングの処分します。大量に在庫を維持これは消耗部分です。 慎重に混合ディスク上のディスクのペグ穴を合わせ、一緒にプッシュします。2 つの部分が同じ高さに坐るをチェックして o リングがずれないことを確認します。 2 つの部分を反転し、下部レシーバーとそれらを手動で作成します。出口管継ぎ手が解かれました、それは、ディスクの完全な締め付けと干渉しないようにことを確認します。注: 場合は組み立ての際にスレッドのキャッチは慎重に分解し、適用、食品または医薬品-用アンチ ・ シーズ ・ カジリを防止するスレッドに。 手動締め付け後スパナ レンチ上のディスクのペグをぴったりとアセンブリを締めます。混合ジオメトリの底面に対してしっかりと収まるようにアウトレット チューブ継手を締めます。上のディスクの注射器付属品、居心地の良いを確認します。 ミキサー スタンドの上に組み立てられたミキサーを置き、アウトレット チューブが支持板の下まで伸びた。モバイル板のサポートは中断作業スペースの邪魔になりません。 必要に応じて、機械停止位置の配置設定を確認するまずアタッチ空ガラス注射器ミキサー入り江。注: 同じ線形速度で注射器が同時に落ち込んでいるので別のバレルの直径の注射器を使用しての体積流量を変化させています。最初と最後の縦の高さはすべて注射器で同じにする必要があり、プランジャー シャフト22にタップのセットのネジを使用して調整することができます。機械の停止は、ガラス注射器に過度の損傷が発生しないことを確認します。 必要に応じて、低いですのでモバイル板は機械停止の残りに来る。プレートもすぐに (図 2に見られる) と、空の注射器を連絡する前に残りの部分になるので、これらが並んでいることを確認します。 必要に応じて、必要な場合は機械停止と再配置を緩めます。ガラス注射器を取り外してモバイル板が邪魔をリセットします。注意: プラスチック製の注射器と操作、機械停止の必要はありません。 排水を収集するアウトレット チューブ下オープン焼バスを配置します。 鈍い先端針を用いて 1 mL ガスタイトな注射器に溶液を描画します。すべての空気の泡を削除し、破棄の針。注射器ルアー フィッティングの最後にソリューションを首相します。ソリューション B および C についてこのプロセスを繰り返します 鈍い先端針を使用して 2.5 mL ガスタイトなシリンジにソリューション開発を描画します。すべての空気の泡を削除し、破棄の針。注射器ルアー フィッティングの最後にソリューションを首相します。注: 初期シリンジのプランジャーの高さが同じになるので、これらのボリュームを選択されています。ボリュームを変更する場合彼らはまだこの高さの要件を満たす必要があります。 アルファベット順に時計回りでミキサーに 4 つの注射器を組み立てます。最終的な外観と注射器向き模式図 1 bを参照してください。注: は他とは大きく違う注射器高さがないことを確認、必要に応じてトラブルシューティングします。 ミキサーの操作とクリーニングを実行します。 モバイル板の両側に軸受箱をグリップします。これは機械の停止に対してピンチ危険ので、住宅の下の顔に指を置かないでください。それは注射器にやっと触れることが均等に休憩できるように、モバイル板をゆっくりと下ろします。 着実にかつスムーズに操作を完了することを目指して、プレートを押す約 0.5 – 1 秒これらのストリームのボリューム22。 今 NP 分散を含む焼風呂チューブのキャップを取り外して。 まだ接続されている注射器にミキサーを取るし、廃棄物コンテナーの上に置きます。注射器、コンテナーに排出するホールド アップ ボリュームを許可を削除します。逆さまミキサー アセンブリを押し、スパナ レンチを使用してミキサーを分解します。 スプレー ボトルを使用すると、溶媒 (アセトンなど) の数ミリリットルでアウトレット チューブをすすいで乾燥空気又は窒素と。 (例えば、脱イオン水または DMSO) 良溶媒と混合ジオメトリを洗浄し、すすぎアセトン スプレー ボトルから数ミリリットルを使用します。乾燥した空気や窒素ストリーム。 脱イオン水のストリームの o リングを洗浄および乾燥しみ。 アセトン溶媒ボトルまで視覚的にクリーンを使用しての数ミリリットルで徹底的に上のディスクをすすいでください。乾燥空気または窒素ストリーム表面と注射器付属品。 溶媒ボトルから (例えば、脱イオン水またはアセトン) 良溶媒のいくつかミリリットルで各シリンジをすすいでください。アセトンの数ミリリットルの最終すすぎを適用し、次に使用する前に乾燥空気します。 事後処理と分析を実行します。 約 75% で攪拌しながら滴下塩化カルシウム二水和物の架橋剤溶液 50 μ L を追加最大速度。 75% 最大速度で 50 μ L のアンモニア溶液を攪拌しながら滴を追加します。少なくとも 30 分のための年齢。 2.3.1 と 2.3.2 の手順で説明するように、NP サイズを特徴付けます。 前述の文学19,20,21微粒子またはコーティングの NPs を生成する NP 分散するプロセス。 4. 定式化スケール アップのための変更 手順 1、2、または 3 の構図、必要な公式サイズの十分な量では、溶媒と antisolvent ソリューションを準備します。 必要に応じて、必要な場合、洗浄および NP を形成する前に適切なプロトコルを使用して場所にミキサーを滅菌します。注: CIP 100、水 (中性) に、CIP 200、水 (中性) を適当な溶剤のシーケンシャル リンスは、過去に採用されています。また、滅菌フィルターは、濾過により最終的な粒子サイズが滅菌を排除のインスタンスでミキサーの入り江に添付できます。 適切な量の注射器を気密にソリューションを読み込む側装着ルアーロック アダプターにポリテトラフルオロ エチレン (PTFE) チューブを添付してください。手動で首相の管の端にソリューション。 シリンジをシリンジ ポンプに、CIJ または必要に応じて、MIVM のいずれかのミキサーの入り江に注射器を取り付けます。注: また、流量コント ローラー使用できますラボやパイロット スケールでシリンジ ポンプよりも大きいボリューム機能を提供します。正常な動作では、定常流・十分な圧力の降下があり、流れがコンセントで測光すると加圧反応槽が大規模な生産のための最も適切な選択であることを意味するを必要があります。 アウトレット チューブの下に、必要な場合、十分な量の冷却バスを含むコレクション容器を配置します。 手動で達成に一致させるための体積流量を設定 (例えば、ストリームごとの 30-60 mL/分について)。注: CIJ を使用している場合ポンプ流量が同じある必要があります。場合は、MIVM を使用して、異なる入口は流量が異なるを持つことができます。 同時にポンプを開始します。(これは「スタートアップ ボリューム」) 小さな瓶で廃棄物として排水の約 5-10 mL を収集し、癒しのお風呂での収集を開始します。 特徴付けるし、上記対応する定式化のセクションで説明するよう処理します。