我们描述了一种方法来评估现有的免疫对登革热病毒感染的影响, 使用人血清, 原代人类细胞, 和感染定量定量定量定量定量定量定量定量定量定量定量定量定量的定量。
最近出现的黄病毒寨卡和神经并发症, 如桂林-巴雷综合征和婴儿小脑, 带来了严重的公共安全问题。在危险因素中, 抗体依赖性增强 (ade) 构成了最严重的威胁, 因为最近寨卡病毒 (zikv) 的重新出现主要发生在人群接触过的地区, 处于对其他密切相关的人群的免疫前状态病毒, 尤其是登革热病毒 (denv)。在这里, 我们描述了一个程序, 量化人类血清抗体对初级人类细胞或细胞系的 zikv 感染的影响。
在蚊子传播的病毒性疾病中, 寨卡感染是临床上最重要的疾病之一。感染是由黄病毒 zikv 引起的, 在大多数情况下, 黄病毒使用埃及伊蚊作为其主要载体1,2。然而, 有研究报告白纹伊蚊是一些 zikv疫情3的主要媒介。虽然感染在许多情况下是无症状的, 但最常见的症状是发烧、头痛和肌肉疼痛2。没有治疗或疫苗可用于 zikv 感染, 现有的治疗方法大多是支持性的。最近在南美洲爆发的 zikv 导致了严重的病例, 并使被称为 “小脑2″ 的胎儿的神经发育障碍增加了大约20倍。由于南美洲是 denv 和西尼罗河病毒等几种弓形虫病毒的特有地区, 因此调查先前对其他黄病毒的免疫力是否在 zikv 感染和疾病的严重程度中起着重要作用至关重要。
随着年龄的增长, 病毒已经进化出不同的策略, 以增加其感染的机会, 以接管宿主细胞机械, 并抑制抗病毒反应。其中最引人入胜的是利用宿主免疫前抗体的病毒, 以提高其复制与现象 ade 4.在 denv 的所有四个血清型中, ade 都得到了很好的研究和证明, 以增加病毒滴度和疾病结果5, 6,7.在先前的体外研究中, 我们已经证明了 zikv 复制的显著增强, 由于已有的 denv 免疫在原代人类免疫细胞8。我们还演示了一种相关的体外方法来量化 denv 先前存在的抗体增强初级细胞 zikv 复制的能力。
我们开发的协议使用在 tcid-50 或斑块还原中和试验 (prnt) 检测中和测试的人类血清样本, 以及在生物相关的细胞或从 zikv 可以感染的组织中提取的细胞中使用 zikv。
denv 抗体的交叉反应导致其他 denv 血清型的 ade 阻碍了有效疫苗的开发11。zikv 属于同一家族, flaviviridae, 与其他黄病毒, 特别是 denv12有相当多的同源性。zikv 和 denv 中和抗体的主要目标是包络蛋白, 它在这两种病毒13、14、15之间共享一个非常高的结构和四元序列同源。已经证明, 前免疫要么 denv …
The authors have nothing to disclose.
这项工作得到了 1R21AI129881-01 (对 t. m. c.)、国家新兴传染病实验室和波士顿大学医学院启动资金的慷慨支持。
Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
RPMI-medium | Gibco | 11875093 |