기본 인간 세포에서 Zika 바이러스의 항 체 의존 향상의 정량화
Summary
우리는, 사용 하 여 인간의 혈 청 기본 인간 세포 감염 부 량 정량 실시간 중 합 효소 연쇄 반응에 의해 Zika 바이러스 감염에 뎅기열 바이러스에 대 한 기존의 면역의 효과 평가 하는 방법을 설명 합니다.
Abstract
Flavivirus Zika Guillain-바레 증후군 등 유아, microcephaly 신경 합병증의 최근 출현은 심각한 공공 안전 문제를 가져왔다. 위험 요인 중 항 체 의존 향상 (ADE) 포즈 가장 중요 한 위협을 Zika 바이러스 (ZIKV)의 최근 재 출현은 주로 지역 인구는 다른 밀접 하 게 관련을 사전 면제의 상태 flaviviruses, 특히 뎅기열 바이러스 (DENV) 여기, 우리 ZIKV 감염 기본 인간 세포 또는 세포에 DENV에 대 한 인간의 혈 청 항 체의 효과 측정에 대 한 프로토콜을 설명 합니다.
Introduction
모기 품 어진 바이러스 성 질병 가운데 Zika 감염1가장 임상적으로 중요 한 중 하나입니다. 감염은 flavivirus ZIKV는, 대부분의 경우에는 기본 벡터1,2 Aedes aegypti 사용에 의해 발생 합니다. 그러나, 일부 ZIKV 발생3주 벡터로 Aedes albopictus 보고 연구 있다. 많은 경우에서 무 증상 감염 이지만, 가장 일반적인 증상은 발열, 두통, 근육 통증2. 아무 치료 또는 백신 ZIKV 감염에 사용할 수 있는 이며 사용 가능한 치료는 주로 지원. 남아메리카에 있는 ZIKV의 최근 발발 microcephaly2라는 태아에 neurodevelopmental 장애에 약 20-fold 증가 질병의 심한 경우에 지도 했다. 남미 지역 여러 arboviruses DENV 및 웨스트 나 일 바이러스에 발병으로 조사 여부 다른 flavivirus(es)에 이전 면역 역할 ZIKV 감염 및 질병의 심각도에 결정적 이다.
연령대에 걸쳐 바이러스는 호스트 셀 기계를 정복 하 고 항 바이러스 반응 억제 infectivity의 그들의 기회를 증가 하는 다른 전략을 진화 했다. 모두의 가장 매혹적인 중 현상 에이드4그들의 복제를 향상 시키기 위해 바이러스에 의해 호스트 미리 면역 항 체의 사용 이다. DENV의 모든 4 개의 serotypes에 걸쳐 ADE 잘 공부 하 고 바이러스 titers 및 질병 결과5,,67증가 입증 되었습니다. 이전 체 외 연구에서 우리는 기존의 기본 인간의 면역 세포8DENV 면제 때문에 ZIKV 복제의 향상을 나타났습니다. 우리는 또한 관련 생체 외에서 메서드 기본 셀에 ZIKV 복제 향상 DENV 기존의 항 체의 기능을 정량화를 시연 했다.
우리가 개발한 프로토콜 DENV 중화 TCID 50에 대 한 테스트는 인간의 혈 청 샘플 사용 또는 플 라크 감소 중립화 시험 (PRNT) 분석 실험, 생물학으로 관련 된 셀 또는 셀 ZIKV 감염 시킬 수 있는 조직에서 파생 된 ZIKV 함께.
Protocol
Representative Results
Discussion
다른 DENV serotypes 에이드로 이어지는 DENV 항 체의 분11효과적인 백신 개발을 방해 했다. ZIKV 같은 가족 Flaviviridae에 속해 있으며 다른 flaviviruses, 특히 DENV12와 상당한 상 동. ZIKV와 DENV에 대 한 항 체를 중화의 주요 목표 두 바이러스13,,1415사이 매우 높은 구조 및 제 사기 순서 상 동을 공유 하는 봉…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품 (T.M.C.)에 1R21AI129881-01, 국가 신흥 전염 성 질환 연구소, 그리고 보스턴 대학 학부에서 시작 자금 아낌없이 지원 했다.
Materials
| Fetal Bovine Serum | GEMINI | 100-106 | |
| iCycler | BioRad | 785BR02188 | Model No. CFX96 Optics Module |
| Microfuge 18 Centrifuge | Beckman Coulter | 367160 | |
| Nanodrop-1000 | Thermoscientific | 1072 | |
| Quantifast SYBR-One step RT-PCR kit | Qiagen | 204154 | Used for 1 step RT-qPCR |
| RNeasy RNA Isolation Kit | Qiagen | 74106 | Used for RNA extraction |
| RPMI-medium | Gibco | 11875093 |
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