Summary

ザリガニの心臓と行動活動の継続的な非侵襲的測定

Published: February 06, 2019
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Summary

連続録画とザリガニの心臓と自発活動の分析のための非侵襲的バイオモニタ リング システムを提案する.このシステムは、近赤外光センサー、ビデオ追跡モジュール、およびその生理状態を反映し、心拍ゆらぎの中にザリガニの動作を特徴付けるザリガニ ハートビートを評価するためのソフトウェアで構成されています。

Abstract

ザリガニは、無脊椎動物の行動生理学的研究の実用的な生物学的モデルとして、水質の生物指標としての両方を提供する極めて重要な生物です。ザリガニは、水質悪化の原因物質を直接指定できません、にもかかわらず、すぐに (数秒) 内、心と行動の活動に急性の変化によって水質の悪化が人間を警告できます彼ら。

本研究では十分なシンプルさと信頼性の 1 つのモデルの組み合わせにより様々 な条件下で実装する単純な非侵襲的手法を提案します。

生物的有機体が環境評価プロセスの実装は、このアプローチは、警告と急性水周囲の環境悪化を防止するための信頼性の高い、タイムリーなアラームを提供します。したがって、ザリガニ生理に基づくこの非侵襲的システム、子豚パラメーター録音は水生環境の変化の検出について検討しました。飲料の製造に使用される水の質を制御するためのローカル ビール醸造所でこのシステムが適用される今が連続的な実時間の水質評価と定期的検査に任意の水処理と供給施設で使用できます。ザリガニの心臓の生理学および行動の調査。

Introduction

水生生物のアプリケーションでは、様々 な実験室調査1,2のためのモデル有機体と産業と自然/環境水品質3,4を監視するためのツールとしての対象、勉強もするが表示されます。それにもかかわらず、このトピックは、まだ科学的なコミュニティまたは他の職業に属しているかどうかに関係なく、人間のための注目すべき興味のです。特定パラメーター (いわゆる「バイオ」)5,6,78を選択するための最も重要な要件を監視する高度な方法の数の存在にもかかわらず、3 つの単純な要素から成っているインジケーター: シンプル (i)、(ii) 信頼性、および (iii) 一般の可用性。

ザリガニ、淡水動物の重要な代表として一線を画してそれ世界的な発見は、広まっている、操作に適した十分に大きく、固い甲羅があるほとんどの場合9、ので。この甲殻類は、比較的単純な組織10を維持する、同時に重要な生理学的システムとしながら、各部位の十分な開発を提供する高い無脊椎動物のグループに属しています。

科学文献で説明されているように、ざりがに類の生物学的および/または行動パラメーターの範囲の評価に基づく方法は一般的にバイオモニタ リングやザリガニ研究の発展に大きく貢献しています。ザリガニ心拍数測定のため現在入手可能な侵襲的方法のほとんどは、複雑で精密な手術11,12,13; が必要な心電図記録に基づいていますこのような操作に重大なストレスを引き起こすことができ、ザリガニによって長期適応を必要があります。また、それが知られていない長いザリガニがそのような電極を運ぶことができる方法、それは正常にこのような添付ファイルを運んでいる間脱皮されるかどうか。説明の非侵襲的方法ハードウェアの複雑性により、複雑な信号フィルタ リング14と増幅または精密で高価な光コンポーネント15 の調整回路を必要とするプレチスモ グラフの記録に基づいています ,16

本研究では、既存の結果に貢献し、現在ザリガニ心拍数測定手順を改善するための新たな選択肢を提供するアプローチについて説明しました。利点の中で、(i) 長期生理学的な適応を必要としない高速かつ非侵襲的添付ファイル(ii) アメリカザリガニの脱皮; に脱皮から数ヶ月の期間内にセンサーを行う能力(iii) 複数のザリガニ; から同時に得られたデータの評価と行動活動リアルタイム心筋を監視できるソフトウェア(iv) の低価格とシンプルさ。述べるバイオモニタ リング システムは、非侵襲的、ざりがに類の etho 生理特性の変化に基づいてザリガニの心臓と自発活動の連続モニタリングを許可します。このシステムは、ザリガニの心臓の生理学や動物行動学、水治療、供給設備の水質を制御するための産業の実装に加えて検査で簡単に適用できます。

Protocol

1. ザリガニの選択 現在のアプローチをザリガニに正常に適用するためにセンサーの取り付けについて (これは頭胸甲長 30 mm 以上の) 十分な甲羅サイズそれぞれ大人標本を選択、視覚的に、疾患の有無の確認、チェックかどうかそれにタッチしたときに、両方の鉗脚を持ち上げます。上記のパラメーターは、ザリガニ健康の対象となる状態を示します。注:実験群をいく?…

Representative Results

その結果、心と行動の活動、記録および txt 形式ファイル (図 3) に保存されたザリガニの組み合わせを得た。3 つの列の実験ザリガニ、日付、およびサンプリング レートの数、以外にもファイルので構成されています: (1) hh:mm:ss 形式で継続時間(2) 心拍数は 1 分当たりのビートで自動的に計算されます。(3) の歩行は不在 (0) または任意の運動の存?…

Discussion

常に発生しない行動応答の評価よりもザリガニの反応を記録するためのより信頼性の高いメソッドを (心または換気量または両方) など特定の生理学的パラメーターの測定にはそれ広く示唆されています。すぐに11。しかし、それはザリガニ ハートビートの理由を参照してくださいすることが可能となるので、実質ザリガニ環境の変化に反応を評価するための最も効率的な方…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

本研究に支えられた教育省・青年・ チェコ共和国プロジェクト”CENAKVA”号のスポーツCZ.1.05/2.1.00/01.0024 と「CENAKVA II」号国家の持続可能性の下で LO1205 プログラム、助成機関南ボヘミア大学 České ブジェヨヴィツェ (012/2016/Z) のチェコスロバキア共和国 (第 16 – 06498S) の助成機関

Materials

IR LED diode KINGBRIGHT ELECTRONIC KP-3216F3C
Phototransistor EVERLIGHT ELPT15-21C
Resistor ROYAL OHM 0805S8J0201T5E
Resistor ROYAL OHM 0805S8F2200T5E
Capacitor KEMET C0805C334K5RACTU
Cable TECHNOKABEL FTP KAT.5E 4X2X0,14C
Connector HARTING 21348100380005
Connector HARTING 21348000380005
Dielectric gel KRAYDEN Sylgard 535
Analogue-to-digital convertor TEDIA UDAQ-1416CA
Glue KUPSITO.SK 7338723044
Kinect video camera ABCSTORE.CZ GT3-00002
Analysis software University of South Bohemia in Ceske Budejovice, Faculty of Fisheries and Protection of Waters, Institute of Complex Systems Link to the software: www.frov.jcu.cz/crayfishmonitoring
User name: frov
Password: CF2018

Referencias

  1. Bownik, A., Sokołowska, N., Ślaska, B. Effects of apomorphine, a dopamine agonist, on Daphnia magna: Imaging of swimming track density as a novel tool in the assessment of swimming activity. Science of the Total Environment. 635, 249-258 (2018).
  2. Jeong, T. Y., Yoon, D., Kim, S., Kim, H. Y., Kim, S. D. Mode of action characterization for adverse effect of propranolol in Daphnia magna. based on behavior and physiology monitoring and metabolite profiling. Environmental Pollution. 233, 99-108 (2018).
  3. do Nascimento, M. T. L., et al. Determination of water quality, toxicity and estrogenic activity in a nearshore marine environment in Rio de Janeiro, Southeastern Brazil. Ecotoxicology and Environmental Safety. 149, 197-202 (2018).
  4. Xiao, G., et al. Water quality monitoring using abnormal tail-beat frequency of crucian carp. Ecotoxicology and Environmental Safety. 111, 185-191 (2015).
  5. Aagaard, A., Andersen, B. B., Depledge, M. H. Simultaneous monitoring of physiological and behavioral activity in marine organisms using non-invasive, computer aided techniques. Marine Ecology Progress Series. 73 (2), 277-282 (1991).
  6. Bloxham, M. J., Worsfold, P. J., Depledge, M. H. Integrated biological and chemical monitoring: in situ. physiological responses of freshwater crayfish to fluctuations in environmental ammonia concentrations. Ecotoxicology. 8 (3), 225-237 (1999).
  7. Depledge, M. H., Andersen, B. B. A computer-aided physiological monitoring system for continuous, long-term recording of cardiac activity in selected invertebrates. Comparative Biochemistry and Physiology. A, Comparative Physiology. 96 (4), 473-477 (1990).
  8. Depledge, M. H., Galloway, T. S. Healthy animals, healthy ecosystems. Frontiers in Ecology and the Environment. 3 (5), 251-258 (2005).
  9. Holdich, D. M., Reynolds, J. D., Souty-Grosset, C., Sibley, P. J. A review of the ever increasing threat to European crayfish from non-indigenous crayfish species. Knowledge and Management of Aquatic Ecosystems. 11, 394-395 (2009).
  10. Vogt, G., Holdich, D. M. Functional anatomy. Biology of freshwater crayfish. , 53-151 (2002).
  11. Bierbower, S. M., Cooper, R. L. Measures of heart and ventilatory rates in freely moving crayfish. Journal of Visualized Experiments. (32), e1594 (2009).
  12. Li, H., Listerman, L. R., Doshi, D., Cooper, R. L. Heart rate in blind cave crayfish during environmental disturbances and social interactions. Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology. 127 (1), 55-70 (2000).
  13. Listerman, L. R., Deskins, J., Bradacs, H., Cooper, R. L. Heart rate within male crayfish: social interactions and effects of 5-HT. Comparative Biochemistry and Physiology Part A: Molecular & Integrative Physiology. 125 (2), 251-263 (2000).
  14. Burnett, N. P., et al. An improved noninvasive method for measuring heartbeat of intertidal animals. Limnology and Oceanography: Methods. 11 (2), 91-100 (2013).
  15. Fedotov, V. P., Kholodkevich, S. V., Strochilo, A. G. Study of contractile activity of the crayfish heart with the aid of a new non-invasive technique. Journal of Evolutionary Biochemistry and Physiology. 36 (3), 288-293 (2000).
  16. Kholodkevich, S. V., Ivanov, A. V., Kurakin, A. S., Kornienko, E. L., Fedotov, V. P. Real time biomonitoring of surface water toxicity level at water supply stations. Environmental Bioindicators. 3 (1), 23-34 (2008).
  17. Kuznetsova, T. V., Sladkova, S. V., Kholodkevich, S. V. Evaluation of functional state of crayfish Pontastacus leptodactylus in normal and toxic environment by characteristics of their cardiac activity and hemolymph biochemical parameters. Journal of Evolutionary Biochemistry and Physiology. 46 (3), 241-250 (2010).
  18. Sladkova, S. V., Kholodkevich, S. V. Total protein in hemolymph of crawfish Pontastacus leptodactylus as a parameter of the functional state of animals and a biomarker of quality of habitat. Journal of Evolutionary Biochemistry and Physiology. 47 (2), 160-167 (2011).
  19. Pautsina, A., Kuklina, I., Štys, D., Císař, P., Kozák, P. Noninvasive crayfish cardiac activity monitoring system. Limnology and Oceanography: Methods. 12 (10), 670-679 (2014).
  20. Císař, P., Saberioon, M., Kozák, P., Pautsina, A. Fully contactless system for crayfish heartbeat monitoring: Undisturbed crayfish as bio-indicator. Sensors and Actuators B: Chemical. 255, 29-34 (2018).

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Citar este artículo
Kuklina, I., Ložek, F., Císař, P., Pautsina, A., Buřič, M., Kozák, P. Continuous Noninvasive Measuring of Crayfish Cardiac and Behavioral Activities. J. Vis. Exp. (144), e58555, doi:10.3791/58555 (2019).

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