Altın katyonlar (Au(III)). Sığır serum albumin (BSA) de konformasyon bağımlı benzersiz BSA-Au floresans karakterize gelince sunulan çeşitli biçimler için bağlama eğitimi iletişim kurallarını
Sunulan iletişim kurallarının amacı biçimi değişikliği indüklenen kırmızı floresans verimli BSA, Au(III) bağlama işlemi incelemektir (λem 640 = nm) BSA-Au(III) kompleksleri. Yöntem kırmızı floresans ortaya çıkması BSA biçimler denge pH kaynaklı geçişler ile ilişkili göstermek için pH ayarlar. Kırmızı floresan BSA-Au(III) kompleksleri sadece BSA “A-biçimli” biçimi için karşılık gelen pH ya da 9,7 üzerinde bir ayarlama ile oluşmuş olabilir. Au molar oranı BSA ayarlamak için ve Au(III) bağlama işlemi saat ders izlemek için iletişim kuralı açıklanmıştır. Au(III) kırmızı floresans üretmek için BSA, başına en az sayıda daha az yedi yaşında. Biz iletişim kuralı birden çok Au(III) bağlayıcı siteleri BSA içinde varlığını göstermek için adımlar açıklanmaktadır. İlk, bakır ekleyerek (Cu(II)) veya nikel (Ni(II)) Özellikler Au(III) tarafından takip, bu yöntem ortaya bir bağlama sitesi kırmızı fluorophore değil Au(III). İkinci olarak, BSA ajanlar kapatma thiol tarafından değiştirerek, başka bir nonfluorophore oluşturan Au(III) bağlama site ortaya çıkıyor. Üçüncü olarak, BSA conformation fizyon ve disülfür bağları kapatma değiştirme, mümkün Au(III) bağlama site (ler) gösterilmiştir. Diğer proteinler ve metal katyonlar etkileşimler çalışmaya, BSA biçimler ve Au(III) bağlama, kontrol etmek için açıklanan protokol genel olarak uygulanır.
Bir ultraviyole (UV) sergileyen bir BSA-Au bileşik-dikkat çekici ile heyecanlı kırmızı floresans shift stokes, başlangıçta Xie ve arktarafından sentezlenen. 1. benzersiz ve istikrarlı kırmızı floresans alanlarda2,3,4,5,6,7görüntüleme veya nanomedicine8 algılama gibi çeşitli uygulamalar bulabilirsiniz ,9,10,11,12,13. Bu bileşik, nano-bilim son yıllarda14,15,16, alanında birçok araştırmacılar tarafından kapsamlı bir şekilde çalışılmıştır. BSA-Au bileşik Au25 nanoclusters yorumlanır. Bu bileşik ayrıntılı incelemek ve kırmızı floresans kökenini anlamak için sunulan Yöntem hedefidir. Sunulan yaklaşım takip ederek, birden çok Au bağlayıcı siteleri, varlığı ve floresan, Au25 nanoclusters, tek-site çekirdekleşme alternatif kökeni resimli. Aynı yaklaşım diğer proteinler17,18,19 Au(III) ile complexed içsel floresan özelliklerini değiştirebilirsiniz nasıl eğitim için istihdam edilebilir.
Kırmızı-floresan BSA-Au bileşik sentezi BSA floresan yoğunluğu ve uyarma-emisyon harita (EEM)20Peaks’e konumunu en üst düzeye çıkarmak için Au (BSA:Au) için molar oranları dar bir denetimi gerektirir. Bu birden çok bağlayıcı siteleri Au(III) bağlamak, mevcut Asparagine parçası (veya Asp parça, ilk dört amino asit kalıntıları, N-terminus, BSA) de dahil olmak üzere gösterilebilir21,22. BSA (Cys-34) 34th amino asit de Au(III) koordine etmek ve kırmızı fluorescence([Cys34-capped-BSA]-Au(III))20yönteminde dahil olmak gösterilir. Tüm Cys-Cys disülfür bağları fizyon ve tüm thiols, kırmızı floresans kapatma üzerine üretilen ([all-thiol-capped-BSA]-Au(III)). değil Bu kırmızı floresans üretmek için Au(III) bağlama site olarak Cys-Cys disülfür bağları gerekliliğini gösterir.
Protein Kimya teknikler yaygın olarak BSA-Au(III) kompleksleri nano-bilim toplumda eğitim için kullanılmış değil. Ancak, BSA Au(III) bağlama sitelerin detaylı bilgi sahibi olarak bu komplekslerin, de bazı yönlerini anlamak için bu teknikler istihdam için değerli olacaktır. Bu makalede bazı teknikler göstermek için tasarlanmıştır.
PH 12 hazırlanan BSA-Au(III) bileşikler kırmızı floresans bir emisyon dalga boyu λemadlı sergi 640 = ultraviyole (UV) ışık λexile heyecanlı zaman nm = 365 nm (Şekil 1A). Kırmızı floresans ortaya çıkması yavaş bir süreçtir ve bir kaç gün için maksimum yoğunluğu artırmak için oda sıcaklığında alacak. Yüksek sıcaklık kırmızı floresans daha hızlı üretmek için kullanılan rağmen tepki 37 ° C’de çalıştıran optimum sonu…
The authors have nothing to disclose.
S.E. Duke bağış özel girişim Fonu, Wells Fargo Fonu, ilaç Vakfı yanı sıra başlangıç fonlar üzerinden University of North Carolina, desteğinden Charlotte kabul eder.
Bovine Serum Albumin (BSA), 96% | Sigma-Aldrich | A5611 | |
gold (III) chloride trihydrate, 99.9% | Sigma-Aldrich | 520918 | |
Copper (II) chloride dihydrate, 99.999% | Sigma-Aldrich | 459097 | |
Nickel (II) chloride hexahydrate, 99.9% | Sigma-Aldrich | 654507 | |
N-Ethylmaleimide (NEM), >99.0% | Sigma-Aldrich | 4259 | |
Tris(2-carboxyethyl)phosphine hydrochloride (TCEP), >98.0% | Sigma-Aldrich | C4706 | |
Sodium hydroxide, >98.0% | Sigma-Aldrich | S8045 | |
Urea, 99.5% | Chem-Implex Int'l | 30142 | |
Phospate buffered saline (PBS) | Corning | MT21040CV | |
Ammonium bicarbonate, 99.5% | Sigma-Aldrich | 9830 |