体外分化マウス顆粒球マクロファージ ・ コロニー刺激因子 (GM-CSF)-(T_HGM) ヘルパー T 細胞の生産

ヘルパー (T_H) cd4 T 細胞、微生物病原体に対する生体防御、癌サーベイランスおよび自己免疫^1,2,3重要な役割を持つ免疫システムに不可欠なコンポーネントです。T 細胞受容体 (TCR) 活性化 T_HT_H2 1 ナイーブ cd4 陽性 T 細胞が分化することができます、異なるサイトカイン ミリュー^2,4,の影響の下で T (Treg) 細胞を T_H 17、または規制⁵します。 最近、GM-CSF を主に生産、新しい T_Hセルのサブセットを特定され、T_HGM⁶の名前。T_HGM 細胞の分化は、信号変換器の活性化と転写 5 (STAT5) の活性化を介して IL-7 によって駆動されます。これらの細胞は他の T の_Hの低発現しながら GM-CSF の大量を表現-署名サイトカイン肝腎と IL-17⁶などを携帯します。GM-CSF cd 4 + T 細胞を介した neuroinflammation^7,8の開発に重要な役割を果たすことがわかった。肝腎- または IL-17-を表現する自己反応性 T 細胞と比較して、GM CSF 表現 T 細胞、野生型に転送 (WT) マウス以前の発症および重症度高いです。また、 Csf2-/- T 細胞は WT の受信者に転送される利用後実験的自己免疫性脳脊髄炎 (EAE) を誘導するために失敗しました肝腎や IL 17A 欠けて T 細胞 EAE⁷を仲介する能力を保持するのに対し。また、中和抗体を用いた GM-CSF の封鎖は EAE 病重症度⁸を改善しました。さらに、マウスの T 細胞に STAT5 の欠乏は、EAE 開発⁶に減少 T_HGM 世代と、それゆえ、マウスの抵抗を起因しました。これらの調査結果は、自己免疫性アミロイド疾患における GM CSF 表現 T_H細胞の重要性を強調します。したがって、ナイーブ cd4 陽性 T 細胞から GM CSF 表現 T_H細胞を区別する方法を確立する自己免疫 neuroinflammation と T 細胞を介した免疫反応の機序の解明に重要となります。しかし、プロトコルを効率的にセルを生成する T_HGM マウス ナイーブ cd4 が確立されていないから。

ナイーブ cd4 陽性 T 細胞からマウスの T_HGM 細胞を区別する方法をご紹介します。このプロトコルはマウスから脾臓の抽出、T_H細胞蛍光活性化セル (FACS) を並べ替え、CD4 の正の選択単一細胞懸濁液の準備などを含む全体の手順を記述します。微分法と解析。差別化されたヘルパー T 細胞は、細胞内サイトカインの mRNA レベルでのサイトカインの発現を決定する定量的リアルタイム PCR による単一細胞レベルでのサイトカインの発現をフローサイトメトリーと組み合わせて染色によって分析されるとタンパク質レベルでのサイトカインの発現を評価するために ELISA によるこのメソッドは、惹起、GM-CSF が病因に重要な役割を果たしているなど、様々 な条件の下で T_HGM 細胞生物学の研究に適用できます。