В 1961 году Хейфлик и Moorhead сообщили, что первичный фибробластов в культуре потерять их пролиферативный потенциал после последовательных проходов¹. Этот процесс является причиной последовательных укорочение теломер после каждого деления клеток. Когда теломеры достигают критически короткой длины, они признаются в повреждения ДНК ответ (РДР), который активирует необратимым арест распространения — также определен как репликативной старение. Репликативной старения в настоящее время является одним из многих раздражителей, которые известны побудить государство ареста постоянного клеточного цикла, что делает клетки нечувствительны митогены и apoptotic сигналы^2,3. Программа старения обычно характеризуются дополнительными функциями, включая высокую активность лизосомальных, митохондриальной дисфункции, ядерные изменения, перераспределений chromatin, эндоплазматического ретикулума стресс, повреждение ДНК и старение связанных секреторный фенотип (SASP)^3,4. Стареющей клетки имеют несколько функций в организме: развития, ранение исцеления и опухоли подавления². Кроме того они известны играть важную роль в старения и, как ни парадоксально, в прогрессии опухоли⁵. Отрицательный и частично противоречивой, эффекты старения часто приписывают SASP⁶.

Недавно было показано, что ликвидация стареющей клетки от мышей приводит к продлению жизни и ликвидации многих старения функции^{7,8,9,10,11, 12}. в то же время, несколько препаратов были разработаны для либо устранить стареющей клетки (senolytics) или целевой SASP^13,14. Антивозрастной лечебный потенциал недавно привлекло больше внимания к полю.

Изучение механизмов, связанных с сотовой старение и показы для фармакологического вмешательства сильно полагаться на ex vivo модели, особенно на первичной фибробластов. Хотя есть некоторые общие черты, активируются различные старение индукторов, большой изменчивости в старение фенотип наблюдаемыми и зависит от различных факторов, включая ячейки типа, стимулов и времени точки^{3,15, 16,17}. Это необходимо учитывать гетерогенность для изучения и ориентации стареющей клетки. Таким образом этот протокол направлен на обеспечение ряда методов, используемых для вызывают старение в первичной фибробластов с помощью различных методов лечения. Как это будет объяснено, методы может быть легко адаптирована для других типов клеток.

Помимо репликативной старение, мы опишем пять других вызывающих старение лечения: ионизирующего излучения, ультрафиолетовые (УФ) излучения, доксорубицин, оксидативный стресс и эпигеномные изменения (а именно, поощрение ацетилирование гистона или деметилирования ДНК) . Ионизирующего излучения и УФ излучения вызывают прямого повреждения ДНК и, в соответствующих дозах вызывают старение^18,19. Доксорубицин также вызывает старение главным образом через повреждения ДНК, интеркалирующие в ДНК и нарушая функцию топоизомеразы II и таким образом остановить ДНК ремонт механизмов²⁰. Экспрессии генов, необходимых для старения обычно контролируется ацетилирование гистона и метилирования дна. Как следствие Ингибиторы гистоновых деацетилаз (например, натрия бутират и Саха) и ДНК-demethylating агентов (например, 5-Аза) вызывают старение в противном случае нормальных клеток^21,22.

Наконец, четыре из наиболее распространенных маркеров, связанные для стареющей клетки будет объяснено: активность старение связанные β-галактозидазы (SA-β-gal), скорость синтеза ДНК, EdU включения анализа, гиперэкспрессия регуляторов клеточного цикла и p16 ингибиторы Циклин зависимая киназа p21, гиперэкспрессия и и секрецию членов SASP.