Тромбоз глубоких вен, индуцированных застой в мышей, под контролем УЗИ высокой частоты
Summary
Настоящий Протокол описывает шаги для получения венозного тромбоза с использованием модели застой. Кроме того мы используем неинвазивный метод измерения тромбообразованию и резолюции с течением времени.
Abstract
Тромбоз является общим условием, влияющих на 1-2% населения, Ежегодная заболеваемость 1 в 500. Тромбоз вен может привести к смерти через легочную эмболию или результаты в постсоветском тромботических синдром, характеризуется хроническим ногу боль, отек и изъязвления, или хронической легочной гипертензии, что приводит к значительным хронических респираторных компромисс. Это наиболее распространенных сердечно-сосудистых заболеваний после инфаркта миокарда и ишемического инсульта и клинической проблемой для всех медицинских дисциплин, как это может осложнить ход других расстройств, таких как рак, системные заболевания, хирургии и основные травмы.
Экспериментальные модели необходимы для изучения этих механизмов. Стасис модель индуцирует последовательной тромб размер и количественной количество тромбов. Однако необходимо систематически перевязать боковые ветви нижней полой вены, чтобы избежать изменчивость тромб размеров и любой интерпретации ошибочных данных. Мы разработали неинвазивный способ измерить размер тромба, с помощью УЗИ. Используя эту технику, мы можем оценить развитие тромба и резолюции со временем в то же самое животное. Данный подход ограничивает количество мышей, необходимых для количественной оценки венозного тромбоза в соответствии с принципом замещения, сокращение и уточнение животных в научных исследованиях. Мы продемонстрировали, что вес тромбов и гистологический анализ тромб размер коррелируют с измерением полученных с УЗИ. Таким образом нынешнее исследование описывает способы побудить тромбоз глубоких вен у мышей с использованием модели нижней полой вены стаза и контролировать его с помощью высокой частоты ультразвука.
Introduction
Венозной тромбоэмболии (ВТЭ), который состоит из тромбоз глубоких вен (ТГВ) и эмболии легочной артерии, является третьей по значимости причиной сердечно-сосудистой смертности после инфаркта миокарда и инсульта. Это является общим условием, влияющих на 1-2% населения, Ежегодная заболеваемость 1 в 5001. ВТЭ может привести к: 1) смерть через легочную эмболию; 2) после тромботических синдром, характеризуется хронической нога боли, отек и язв; или 3) хронической легочной гипертензии, что приводит к значительным хронических респираторных компромисса. ВТЭ является многофакторных заболеваний и может быть результатом застоя кровотока, повреждения сосудистой стенки, и/или гиперкоагуляции государств из-за нарушения баланса между коагуляции и фибринолитической системы, как это было описано более ста лет назад по Вирхов и известен как Вирхов триады.
Потому что в большинстве случаев это невозможно получить образцы человеческого ТГВ, исследователи разработали экспериментальных животных моделей ТГВ. Были использованы несколько животных, включая2крысы, мыши3, кролик4, свинья5, собака6и нечеловеческих приматов7 . Мышь может быть генетически модифицированные и являются наиболее часто используемых животных для изучения ТГВ. Однако как и все животные, спонтанное тромбоза глубоких вен не наблюдается у мышей. Таким образом физические или химические изменения стенки вен используются для создания тромбоза у мышей. Ранее мы использовали модель хлорного побудить тромбоза в нижней полой вены (IVC) мышах8,9,10. Эта модель имеет преимущество надежно производить окклюзионной тромбов в течение нескольких минут и может использоваться для изучения роли анти коагулянта и анти-тромбоцитарный лекарств во время острого тромбоза глубоких вен. Однако это процедура, терминал. Таким образом изучение острых и хронических ТГВ, застой модель является более подходящим. В этой модели образование тромбов индуцируется полного прерывания потока крови в МКВ, одним из факторов в триады Вирхов для развития тромбоза глубоких вен. Эта модель может использоваться для изучения формирования ТГВ и резолюции, что является преимуществом по сравнению с FeCl3 модель11.
Мы разработали неинвазивный метод следовать образование тромбов и резолюции течением времени с помощью системы микро изображений высокой частоты ультразвука12. Ранее мы показали, что измерение венозного тромбоза ультразвуковым положительно коррелирует с тромбов, полученные патологически. В двух последующих исследованиях мы подтвердили, что измерения, полученные с УЗИ коррелируют с весом тромбов и тромбов области количественной гистохимии9,10. Что еще более важно мы показали, что ультразвук высокой частоты может использоваться для мониторинга формирования тромбоз глубоких вен в мышей12. Он также может использоваться для количественного определения тромб резолюции неинвазивным способом.
Здесь мы будем описывать протокол, позволяющий тромбообразованию, используя модель мыши стазис индуцированной тромбоза и как образование тромбов могут контролироваться неинвазивно со временем с помощью высокой частоты ультразвука.
Protocol
Representative Results
Discussion
Есть несколько важнейших шагах для его успешной венозной тромбообразованию, с использованием модели застой. Индукции тромбоза вен является более сложным, в старых мышей за счет накопления жира вокруг аорты и нижней полой вены. В идеале мышей, переживает эта процедура должна быть 8 – 10-не…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Эта работа была поддерживает грант от сердца и инсульта Фонд Канады и Моррис и Фонда семьи Fainman Белла. Авторы хотели бы поблагодарить Veronique Мишо за ее техническую помощь VEVO770 ультразвуковой визуализации системы.
Materials
| 6-0 perma-hand silk suture | Ethicon | 706G | |
| Surgical Scissors | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Suture tying forceps | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| blunt forceps (straight and curved) | Fine Science Tools | 20830-00 | |
| Needle Driver | Fine Science Tools | 13002-10 | |
| Moria Spring Scissors | Fine Science Tools | 15396-00 | |
| 1ml syringes | BD Biosciences | ||
| 26G needles | Becton Dickinson & Co. | ||
| VEVO 770 High Resolution Imaging System | Visualsonics | No longer sold | |
| SR Buprenorphine | ZooPharm | Given to LDI by Vet | |
| Surgery Microscope | Leica | Leica M651 | |
| Systan eye oinment | Alcon | 288/28062-0 | |
| 2×2 sterile Gauze | CDMV | #104148 | |
| Cotton Tip Applicators | from JGH | ||
| Transpore hypoallergenic surgical tape | CDMV | #7411 | |
| Ultrasound gel (Aquasonic-100) | Dufort & Lavigne | #AKEN4061 | |
| Incubator | From JGH | ||
| Isoflurane | Dispomed | ||
| Anesthetic chamber,hoses, and adminstration equipment | Dispomed | ||
| Hair remover | Nair | ||
| Water heated hard pad | Braintree Scientific, Inc. | #HHP-2 | |
| Gaymar heater water pump TP500 | MATVET Inc. | #R-500305 | |
| Infra-red heating lamp | electrimat inc. | #1R175R-PAR | |
| Mouse rectal temperature prope | emkaTECHNOLOGIES | ||
| Sterile water | From JGH |
Referencias
- Fowkes, F. J., Price, J. F., Fowkes, F. G. Incidence of diagnosed deep vein thrombosis in the general population: systematic review. Eur J Vasc Endovasc Surg. 25 (1), 1-5 (2003).
- McGuinness, C. L., et al. Recruitment of labelled monocytes by experimental venous thrombi. Thromb Haemost. 85 (6), 1018-1024 (2001).
- Singh, I., et al. Failure of thrombus to resolve in urokinase-type plasminogen activator gene-knockout mice: rescue by normal bone marrow-derived cells. Circulation. 107 (6), 869-875 (2003).
- Itoh, K., Ieko, M., Hiraguchi, E., Kitayama, H., Tsukamoto, E. In vivo kinetics of 99mTc labeled recombinant tissue plasminogen activator in rabbits. Ann Nucl Med. 8 (3), 193-199 (1994).
- Kang, C., Bonneau, M., Brouland, J. P., Bal dit Sollier, C., Drouet, L. In vivo pig models of venous thrombosis mimicking human disease. Thromb Haemost. 89 (2), 256-263 (2003).
- Knight, L. C., Baidoo, K. E., Romano, J. E., Gabriel, J. L., Maurer, A. H. Imaging pulmonary emboli and deep venous thrombi with 99mTc-bitistatin, a platelet-binding polypeptide from viper venom. J Nucl Med. 41 (6), 1056-1064 (2000).
- Wakefield, T. W., et al. Venous thrombosis prophylaxis by inflammatory inhibition without anticoagulation therapy. J Vasc Surg. 31 (2), 309-324 (2000).
- Robins, R. S., et al. Vascular Gas6 contributes to thrombogenesis and promotes tissue factor up-regulation after vessel injury in mice. Blood. 121 (4), 692-699 (2013).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Bertin, F. R., Blostein, M. D. Prostaglandin E synthase is upregulated by Gas6 during cancer-induced venous thrombosis. Blood. 127 (6), 769-777 (2016).
- Laurance, S., et al. Gas6 (Growth Arrest-Specific 6) Promotes Inflammatory (CCR2hiCX3CR1lo) Monocyte Recruitment in Venous Thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. , (2017).
- Diaz, J. A., et al. Critical review of mouse models of venous thrombosis. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 32 (3), 556-562 (2012).
- Aghourian, M. N., Lemarie, C. A., Blostein, M. D. In vivo monitoring of venous thrombosis in mice. J Thromb Haemost. 10 (3), 447-452 (2012).
- Brandt, M., et al. Deep vein thrombus formation induced by flow reduction in mice is determined by venous side branches. Clin Hemorheol Microcirc. 56 (2), 145-152 (2014).
- Diaz, J. A., Farris, D. M., Wrobleski, S. K., Myers, D. D., Wakefield, T. W. Inferior vena cava branch variations in C57BL/6 mice have an impact on thrombus size in an IVC ligation (stasis) model. J Thromb Haemost. 13 (4), 660-664 (2015).
- Luther, N., et al. Innate Effector-Memory T Cell Activation Regulates Post-Thrombotic Vein Wall Inflammation and Thrombus Resolution. Circ Res. , (2016).
- Subramaniam, S., et al. Distinct contributions of complement factors to platelet activation and fibrin formation in venous thrombus development. Blood. 129 (16), 2291-2302 (2017).
- Diaz, J. A., et al. Thrombogenesis with continuous blood flow in the inferior vena cava. A novel mouse model. Thromb Haemost. 104 (2), 366-375 (2010).
