Dişi farelerde yumurtalık yaşlanma ve sağlık-ömrü etkisini araştırmak için Orthotopic yumurtalık nakli yordamları
Summary
Burada açıklanan orthotopic alıcı fare fizyolojisi yumurtalık etkisi değiştirmek için yumurtalık nakli iletişim kurallarıdır. Bu cerrahi işlem yumurtalık etkisi çeşitli türlerde dişi fareler duyurmak için kullanılan ve heterochronic nakillerine ve ex vivo tedaviler uğramıştır yumurtalık nakli içerebilir.
Abstract
Yumurtalık nakli 1963 yılında ilk Utah State Üniversitesi’nde yapılmıştır. Daha yeni çalışmalarında, memeli yumurtalık heterochronic nakli genç kadın genç yumurtalıklarda sağlık-koruyucu etkilerini araştırmak için kullanılır. Geçerli yordamlar nerede allojenik yumurtalık yumurtalık Bursa’da özgün konumlarına geri nakledilen bir orthotopic ekimi yöntemi kullanır. Bu yumurtalık/yumurtalık dokusu daha yaygın olarak kullanılan heterotopik transplantasyon aksine subkutan veya böbrek kapsülü altında olacaktır. Tüm bu üç yerde etkili revaskülarizasyon transplante dokuların sağlar. Ancak, orthotopic transplantasyon yumurtalık ile en doğal sinyal ortamı sağlar ve hayvan doğal olarak post-operatively çoğaltmak için fırsat sağlar tek işlemdir. Bir ovariectomy işlem sırasında tüm endojen yumurtalık dokusu kaldırmak için dikkat çekmek gerekir. Eğer herhangi bir endojen doku kalır ya da bir yumurtalık kaldırılması yalnızca, varolan doku senescent olur kadar nakledilen doku uykuda kalır. Sırasında transplante yumurtalık revaskülarizasyon çok hızlı bir şekilde oluşur, organ nakli alıcı sinyal rejimi transplante ile ilişkili yeni hipotalamik/hipofiz/Gonad/böbrek üstü (HPG/A) eksene uyum için zaman önemli miktarda alabilir doku. Bu normalde fare yaklaşık 100 gün sürer. Bu nedenle, nakli deneyler bu adaptasyon dönemi karşılamak için tasarlanmış olması. Yumurtalık nakli ile tipik sonuçlar transplante yumurtalık yaş yerine alıcının kronolojik yaş yansıtmak alıcı sağlığında değişiklikleri içerir.
Introduction
Üreme sağlığı ve yaşam süresi çoğu zaman yanlışlıkla biri olarak sadece üreme yetkinlik kapsayan dönemle sınırlı düşündüm. Yaşam tarzı ve yaşam süresi çoğalma yetkili aşaması ile ilişkili fenotipleri kolayca ön ve postreproductive aşamaları ayrıştırılan iken, sağlık yaşam süresi tüm aşamaları boyunca üreme durumu etkiler. Üreme yetkinlik süre kez kendisi kronolojik hayatı yayılma alanından ayırt üreme yaşam süresi olarak adlandırılır. Bu terminoloji zaman gerçekte iki ömrü belirtme yapay bir ayrılması için oldukça rahat, her ikisi de olayları ile her diğer için yakından bağlı etkileyen, daha sık sık–dan değil, diğeri de etkileyen sensin.
Kanıt son on yıl içinde bireyin üreme durumu kronik sağlık koşulları1geliştirme riski ile ilişkili olduğunu gösterir. Bir çalışmada daha kısa ömürleri ve üreme başarısızlık arasındaki erkekler2bir kohort için belgelenmiştir. Kadınlarda daha da çarpıcı bir ilişkilendirmedir. Kardiyovasküler hastalık Premenopozal kadınlar3‘ te nadirdir, ancak keskin menopoz4 ve erken yumurtalık yetmezliği5genç kadınlarda kalp-damar hastalıkları yumurtalık yetmezliği artar. İnsülin direnci6 ve kemik kaybı menopoz7 ‘ de artırmak ve neredeyse üçte iki Amerikalılar Alzheimer hastalığı olan kadınların8vardır. Yumurtalık sinyal sabit değişiklikler Premenopozal, hastalık dayanıklı bir devlet, geçiş Postmenopozal, hastalık yükü devlet için işaretleyin. Bu kararlı geçiş yaşlanma hastalığı riskler hızlandırmak mekanizmaları tanımlamak için bir fırsat sunuyor.
Son zamanlarda, cryopreserved Yumurtalık dokusunun nakli germ hattı hücreleri kemoterapi gibi ortamlardan tıbbi prosedürler geçmesi kadınlarda doğurganlık geri yüklemek için kullanılır. Yumurtalık dokusunun nakli transgenik fareler9dahil olmak üzere yumurtalık tabanlı infertilite ile hayvanlarda uygun yavrular üretmek için kullanılabilir. Yumurtalık nakli üreme işlevi veya kronolojik yaşlanma başına gelen üreme yaşlanma etkisi ayırmak için verimli bir yöntemdir.
Sağlık birçok yönleriyle Yumurtalık hormonlarının köklü destekleyici rolüyle aktif olarak germ hücreleri, artan hastalık riskleri asıl nedeni, menopoz olarak Bisiklete binme üzerinden hormon üretim kaybı implicates. Kadın sağlığı Yumurtalık hormonlarının değeri tartışılmaz olmakla birlikte, bu hormonların peri – ve Postmenopozal Kadınlarda yerine restorasyon genç yumurtalık olan genç kadın tarafından zevk sağlık yararları güvenilmez oldu. Bu sağlık yararları güvenilir heterochronic nakli postreproductive dişi fareler10,11,12,13,14genç yumurtalıklar tarafından geri yüklenir.
Donör ve alıcı fareler üreme durumunu öncesinde ve nakli veya ovariectomy yordamlar sonra tespit edilmelidir. Gonad giriş 12 ay-in yaş, ameliyat öncesi belirtileri görüntülemek meşru postreproductive fareler Bu deneylerden hariç tutulur. Gonad giriş vajinal Sitoloji tarafından belirlenir. Vajinal Sitoloji Datası alıcı fare postreproductive bir durumda ve aktif olarak Bisiklete binme yumurtalık donör farelerde emin olmak en az 10 gün üst üste ön-cerrahi için toplanır. İlk gözükmek bir estrous döngüsü gün döneminden epitel hücreleri parçalanmayabilir olarak tanımlanır (örneğin, proestrus) leukocytic bir süre koşuluyla vajinal smear, çekirdekli epitel hücrelerinin sonraki görünümü önceki gün (örneğin, diestrus) varlığı arasında. Estrus büyük, Skuamöz epitel hücreleri veya hücre çekirdeği olmadan varlığı tarafından belirlenir. Fareler bu döngüsel aktivite önce 10 gün süreyle ekran ve/veya cerrahi belirlenir sonra Gonad girdi süre için sahip olmak. Fareler bu 10 günlük süre önce ve/veya cerrahi belirlenir sonra süre için Gonad giriş için en az bir tam estrous döngüsü görüntüler. Dişi fareler erkek fare varlığında yer alan ya da kirli yatak için gelen bir erkeğin kafes döngüsü-inducing uyaranlara karşı tutarlı pozlama sağlamak için ortaya çıkar.
Bu nakli yordamları iki cerrahlar aynı anda donör ve alıcı fareler üzerinde çalışma ile en verimli bir şekilde gerçekleştirilir. Ancak, yordamları kolayca en sık alıcı fare ovariectomy yordama başlamadan önce Kurtarılan donör yumurtalık ile bir cerrah tarafından yapılır. Bu iletişim kuralı için tek cerrah ile ilgili yordamı açıklamaktadır. Kaldırma ve değiştirme yumurtalık yapılıyor ise mikroskop altında pozlama üreme sistemi ve site kapatma normal bir mikroskop yapılır. Her cerrahi işlemde öğrenme ile kesi siteleri daha büyük olabilir ve ameliyatlar yordamı öğrenirken daha uzun sürer ve genellikle olacak deneyim ile azaltabilirsiniz.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ovariectomy ve bozulmamış ve germ hücreli tükenmiş yumurtalık nakli için 18 ay-in yaş 21 gün arasında değişen farelerde yapılmıştır. Nerede bu yumurtalık bursa olduğu gibi korumak için arzu edilir bir ovariectomy işlemi sırasında bursal doku incising zaman bakım alınması gerekir. Fareler altı ay-in yaş büyük, bursa çoğunu erişim için kullanılan alanları sınırlar yağ yastığı ile overlaid olur. Bu gibi durumlarda, bursa yağ yastığı sınırına yakın açık gözyaşı daha avant…
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu yayında bildirilen Araştırma Ulusal Enstitüsü yaşlanma, kemirgen kolonisi (Nancy Nadon) Yaş 14 aylık dişi CBA farelerin cömert bir hediye tarafından ve Utah State University, veteriner tıp Fak., hayvan bölümü, süt tarafından desteklenmiştir ve veterinerlik bilimleri.
Materials
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2×2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
Referencias
- National Institutes of Health, Eunice Kennedy Shriver National Institute of Child Health and Human Development, Fertility and Infertility Branch. ‘Fertility Status as a Marker of Overall Health’. “Support studies that investigate fertility status as a marker of overall health for both men and women”. New Research Priorities. , (2016).
- Eisenberg, M. L., Li, S. F., Behr, B., Cullen, M. R., Galusha, D., Lamb, D. J., Lipshultz, L. I. Semen quality, infertility and mortality in the USA. Hum. Reprod. 29 (7), 1567-1574 (2014).
- Thom, T., et al. American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Heart disease and stroke statistics – 2006 update – A report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 113 (6), E85-E151 (2006).
- Shuster, L. T., Rhodes, D. J., Gostout, B. S., Grossardt, B. R., Rocca, W. A. Premature menopause or early menopause: Long-term health consequences. Maturitas. 65 (2), 161-166 (2010).
- Jacobsen, B. K., Knutsen, S. F., Fraser, G. E. Age at natural menopause and total mortality and mortality from ischemic heart disease: The Adventist health study. J Clin Epidemiol. 52 (4), 303-307 (1999).
- Kulaksizoglu, M., et al. Risk Factors for Diabetes Mellitus in Women with Primary Ovarian Insufficiency. Biol Trace Elem Res. 154 (3), 313-320 (2013).
- Johnell, O., Kanis, J. A. An estimate of the worldwide prevalence and disability associated with osteoporotic fractures. Osteoporos Int. 17 (12), 1726-1733 (2006).
- Rosario, E. R., Chang, L., Head, E. H., Stanczyk, F. Z., Pike, C. J. Brain levels of sex steroid hormones in men and women during normal aging and in Alzheimer’s disease. Neurobiol Aging. 32 (4), 604-613 (2011).
- Cargill, S. L., Medrano, J. F., Anderson, G. B. Infertility in a line of mice with the high growth mutation is due to luteal insufficiency resulting from disruption at the hypothalamic-pituitary axis. Biol Reproduction. 61 (1), 283-287 (1999).
- Mason, J. B., et al. Transplantation of young ovaries restored cardioprotective influence in postreproductive-aged mice. Aging Cell. 10 (3), 448-456 (2011).
- Mason, J. B., Terry, B. C., Merchant, S. S., Mason, H. M., Nazokkarmaher, M. Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Trabecular and Cortical Bone Volume, Architecture and Density in Mice at Death. Plos One. 10 (12), 15 (2015).
- Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. Manipulation of Ovarian Function Significantly Influenced Sarcopenia in Postreproductive-Age Mice. J. Transplant. , (2016).
- Peterson, R. L., Parkinson, K. C., Mason, J. B. Restoration of immune and renal function in aged females by re-establishment of active ovarian function. Reprod. Fertil. Dev. , (2017).
- Parkinson, K. C., Peterson, R. L., Mason, J. B. Cognitive behavior and sensory function were significantly influenced by restoration of active ovarian function in postreproductive mice. Exp. Geront. 92, 28-33 (2017).
- Cargill, S. L., Carey, J. R., Muller, H. G., Anderson, G. Age of ovary determines remaining life expectancy in old ovariectomized mice. Aging Cell. 2 (3), 185-190 (2003).
- Brooks, H. L., Pollow, D. P., Hoyer, P. B. The VCD Mouse Model of Menopause and Perimenopause for the Study of Sex Differences in Cardiovascular Disease and the Metabolic Syndrome. Physiology. 31 (4), 250-257 (2016).
- Rivera, Z., Christian, P. J., Marion, S. L., Brooks, H. L., Hoyer, P. B. Steroidogenic Capacity of Residual Ovarian Tissue in 4-Vinylcyclohexene Diepoxide-Treated Mice. Biol. Reprod. 80 (2), 328-336 (2009).
- Yuan, R., et al. Aging in inbred strains of mice: study design and interim report on median lifespans and circulating IGF1 levels. Aging Cell. 8 (3), 277-287 (2009).
- Mason, J. B., Cargill, S. L., Anderson, G. B., Carey, J. R. Transplantation of Young Ovaries to Old Mice Increased Life Span in Transplant Recipients. J. Gerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 64 (12), 1207-1211 (2009).
- Harrison, D. E., et al. Acarbose, 17-alpha-estradiol, and nordihydroguaiaretic acid extend mouse lifespan preferentially in males. Aging Cell. 13 (2), 273-282 (2013).
- Manay, K., et al. 17α-Estradiol Attenuates Neuron Loss in Ovariectomized Dtg AβPP/PS1 Mice. J. Alzheimers Dis. 23 (4), 629-639 (2011).
- Parker, W. H., et al. Ovarian conservation at the time of hysterectomy and long-term health outcomes in the nurses’ health study. Obstet Gynecol. 113, 1027-1037 (2009).
