Ortotópico trasplante ovárico procedimientos para investigar la influencia de la vida y salud de la senescencia ovárica en ratones hembra

La influencia de la reproducción sobre la salud y la vida es a menudo erróneamente considerado como restringido sólo al período que abarca la competencia reproductiva. Mientras que el estilo de vida y fenotipos asociados a la fase reproductivamente competente de la vida se distinguen fácilmente de las fases previas y postreproductive, estado reproductivo influye en la salud en todas las fases de la vida. El período de capacidad reproductiva se refiere a menudo como la vida reproductiva, diferenciarse de la vida cronológica. Esta terminología se presta a una separación artificial de las dos designaciones de vida cuando en realidad, ambos están estrechamente ligada entre sí con los eventos que afectan a uno, más a menudo que no, que afectan a la otra así.

Evidencia en la última década indica que estado reproductivo de un individuo se asocia con un mayor riesgo de desarrollar condiciones de salud crónicas¹. Un estudio documentaron una asociación entre vidas más cortas y falla reproductiva para una cohorte de hombres². La asociación es aún más llamativo en las mujeres. La enfermedad cardiovascular es rara en las mujeres premenopáusicas³, pero fallo ovárico aumenta la enfermedad cardiovascular considerablemente en la menopausia⁴ y en mujeres jóvenes con falla ovárica prematura⁵. Pérdida de hueso y⁶ de resistencia de insulina aumentan en la menopausia⁷ y casi dos tercios de los estadounidenses con la enfermedad de Alzheimer son mujeres⁸. Cambios bien definidos en la señalización de ovario marcan la transición de un estado premenopáusico, resistentes a enfermedades, a un estado posmenopáusico, carga de enfermedad. Esta transición estable, presenta una oportunidad para identificar mecanismos que aceleren los riesgos de enfermedad en el envejecimiento.

Recientemente, el trasplante de tejido ovárico criopreservado se ha utilizado para restaurar la fertilidad en las mujeres que se someten a procedimientos médicos que pueden poner en peligro las células de la línea del germen, como la quimioterapia. Trasplante de tejido ovárico también puede utilizarse para producir descendencia viable en animales con infertilidad en base no ovárico, incluyendo ratones transgénicos⁹. Trasplante de ovario es un método eficiente para separar la influencia de la función reproductiva o envejecimiento reproductivo de envejecimiento cronológico por sí.

El papel de apoyo bien establecido para las hormonas ováricas en muchos aspectos de la salud implica la pérdida de producción de la hormona de ciclismo activamente las células germinales, como la principal causa de los riesgos de la enfermedad creciente en la menopausia. Mientras que el valor de las hormonas ováricas en la mujer salud es incuestionable, reemplazo de estas hormonas en peri y postmenopáusicas ha sido poco fiable en la restauración de los beneficios de salud de mujeres jóvenes con ovarios pequeños. Estos beneficios para la salud se restauran confiablemente por heterocrónicas trasplante de ovarios joven a ratones hembra postreproductive^{10,11,12,13,14}.

Estado reproductivo de los ratones tanto donante como receptor debe determinarse antes y después del trasplante o procedimientos de ovariectomía. Ratones postreproductive presuntivos que muestran signos de entrada gonadal antes de la cirugía a los 12 meses de edad quedan excluidos de estos experimentos. Entrada gonadal está determinado por citología vaginal. Se recogen datos sobre citología vaginal cirugía previa por lo menos 10 días consecutivos para un estado postreproductive en ratones receptores y ciclismo activamente los ovarios de ratones donantes. Un ciclo estral se define como el período comprendido entre el día nucleated células epiteliales aparecen por primera vez (es decir, proestro) hasta el día anterior a la próxima aparición de las células epiteliales nucleadas en el frotis vaginal, siempre que exista un período de leucocitos presencia (es decir, diestro) en el medio. Estro es determinado por la presencia de células epiteliales escamosas, grandes, con o sin núcleos. Ratones no mostrar ninguna actividad cíclica para un período de 10 días antes o después de la cirugía están decididos a no tener ninguna entrada gonadal para dicho período. Ratones mostrar al menos un ciclo estral completo en un período de 10 días antes o después de la cirugía están decididos a tener entrada gonadal para dicho período. Ratones hembra deben ubicados en presencia de ratones machos o expuestos a la ropa de cama sucia de la jaula del macho para asegurar la constante exposición a los estímulos inductores de ciclo.

Estos procedimientos de trasplante se logran más eficientemente con dos cirujanos trabajando simultáneamente en donante y receptoras ratones. Sin embargo, los procedimientos se logran fácilmente por un cirujano, con los ovarios de la donante suele recuperados antes de iniciar el procedimiento de la ovariectomía sobre el ratón receptor. Este protocolo describe el procedimiento para el cirujano solo. Exposición del tracto reproductivo y el cierre del sitio normalmente se hacen sin un microscopio, mientras que la remoción y reemplazo de los ovarios se hace bajo un microscopio. Como con cualquier procedimiento quirúrgico de aprendizaje, sitios de la incisión pueden ser más grandes y cirugías pueden durar mientras el procedimiento de aprendizaje primera y generalmente disminuyen con la experiencia.