Procedure di trapianto ovarico di Orthotopic per studiare l'influenza di durata di vita e di salute della senescenza ovarica nei topi femmina

L’influenza di riproduzione sulla salute e la durata di vita è spesso erroneamente pensato come limitato solo al periodo che comprende la competenza riproduttiva. Mentre il lifestyle e fenotipi associati con la fase riproduttivo competente della durata sono facilmente distinguibili dalle fasi pre- e postreproductive, lo stato riproduttivo influenza la salute in tutte le fasi della durata. Il periodo di competenza riproduttiva si riferisce spesso come la durata della vita riproduttiva, differenziandosi dall’arco cronologico di vita. Questa terminologia si presta ad una separazione artificiale delle due denominazioni durata quando in realtà, entrambi sono strettamente legato un l’altro con gli eventi che interessano uno, più spesso, che colpisce l’altro pure.

Prova nell’ultimo decennio indica che lo stato riproduttivo di un individuo è associato con un rischio aumentato di sviluppare cronici delle condizioni¹. Uno studio ha documentato un’associazione tra durate più brevi e problemi riproduttivi per un gruppo di uomini². L’associazione è ancora più evidente nelle donne. La malattia cardiovascolare è rara in donne premenopausal³, ma insufficienza ovarica aumenta la malattia cardiovascolare acutamente a menopausa⁴ e in giovani donne con guasto ovarico prematuro⁵. Perdita di osso e⁶ di resistenza di insulina aumentano a menopausa⁷ e quasi due terzi degli americani con il morbo di Alzheimer sono donne⁸. Cambiamenti ben definite nella segnalazione ovarico segnano il passaggio da uno stato di premenopausa, resistenti alle malattie, a uno stato postmenopausa, gravati di malattia. Questa transizione stabile, rappresenta un’opportunità per identificare i meccanismi che accelerano i rischi di malattia nell’invecchiamento.

Recentemente, il trapianto di tessuto ovarico crioconservati è stato utilizzato per ripristinare la fertilità in donne che subiscono le procedure mediche che potrebbero compromettere le cellule germinali, come la chemioterapia. Trapianto di tessuto ovarico può essere utilizzato anche per produrre la prole vitali in animali con sterilità di base non-ovarico, compreso topi transgenici⁹. Trapianto ovarico è un metodo efficace per separare l’influenza della funzione riproduttiva o invecchiamento riproduttivo da invecchiamento cronologico per sé.

Il ruolo di sostegno ben consolidato per ormoni ovarici in molti aspetti della salute femminile implica la perdita di produzione di ormoni da ciclismo attivamente le cellule di germe, come la principale causa dei rischi di malattia aumentata a menopausa. Mentre il valore degli ormoni ovarici in salute della donna è indiscutibile, sostituzione di questi ormoni in peri – e postmenopausa è stato inaffidabile nel restauro di benefici per la salute apprezzato da giovani donne con le ovaie giovane. Questi benefici per la salute vengono ripristinati in modo affidabile da eterocronico trapianto delle ovaie giovane a topi femmina postreproductive^{10,11,12,13,14}.

Lo stato riproduttivo dei topi del donatore e del ricevente dovrebbe essere determinato prima e dopo trapianto o ovariectomia procedure. Presuntivi topi postreproductive che mostrano segni di input gonadica prima dell’intervento a 12 mesi dell’età sono esclusi da questi esperimenti. Ingresso gonadica è determinata dalla citologia vaginale. Dati su citologia vaginale sono raccolti per la pre-chirurgia almeno 10 giorni consecutivi garantire uno stato postreproductive in topi destinatari e ovaie attivamente-ciclismo nei topi di donatore. Ciclo di estro è definito come il periodo dal giorno epiteliale cellule nucleate prima che venga visualizzato uno (cioè, proestro) fino al giorno precedente la successiva apparizione di cellule nucleate epiteliale nello striscio vaginale, purché non vi sia un periodo di leucocitic presenza (cioè, diestro) in mezzo. Estro è determinato dalla presenza di cellule epiteliali squamose, grandi, con o senza nuclei. Topi che non visualizzare alcuna attività ciclica, per un periodo di 10 giorni prima e/o dopo la chirurgia sono determinato ad non avere nessun input gonadico per detto periodo. Topi che visualizzare almeno un ciclo estrale completo in un periodo di 10 giorni prima e/o dopo la chirurgia sono determinato ad avere ingresso gonadica per detto periodo. Topi femmina dovrebbero essere alloggiati in presenza di topo maschio o esposti a biancheria sporca dalla gabbia di un maschio per garantire la costante esposizione a stimoli che inducono ciclo.

Queste procedure di trapianto sono compiute in modo più efficiente con due chirurghi operano simultaneamente sul donatore e destinatari topi. Tuttavia, le procedure sono facilmente realizzabile da un chirurgo, con ovaie donatore più spesso recuperate prima di iniziare la procedura di ovariectomia sul destinatario mouse. Questo protocollo descrive la procedura per il singolo chirurgo. Esposizione del tratto riproduttivo e la chiusura del sito avviene normalmente senza un microscopio, considerando che la rimozione e la sostituzione delle ovaie è fatto sotto un microscopio. Come con qualsiasi procedura chirurgica di apprendimento, siti di incisione possono essere più grandi e gli ambulatori possono richiedere più tempo durante la procedura di apprendimento prima e sarà generalmente diminuisce con l’esperienza.