JoVE Journal > Medicine
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Resultados
Discussion
Divulgaciones
Acknowledgements
Materials
Referencias
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
Medicina

Kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak Lipid düşürücü ilaçlar farklı etkileri

Published: November 10, 2017
doi:
10.3791/56596
, , , , , , ,
1Plaxgen Inc, 2Millipore Sigma, 3Cytometry Laboratories,Purdue University, 4San Francisco General Hospital, 2M16 Clinical Chemistry,University of California, San Francisco, 5Molecular Medicine Research Institute

Summary

Bu çalışmanın amacı kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal vitro lipid düşürücü ilaç etkileri değerlendirmek için yapıldı. Karşılaştırma lipid düşürücü ilaçların kolesterol parçacıkları Morfolojik özellikleri oransal olarak etkileri varyasyonlar saptandı.

Abstract

Lipid düşürücü ilaçlar hastalarda dislipidemi tedavisinde düşük yoğunluklu lipoproteinler (LDL) seviyesi ve düşük yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol plazma artış makul ses seviyelerinde olarak önemli bir azalma yol açar. Ancak, bu ilaçların morfoloji ve kolesterol parçacıkları dağılımı değiştirme içinde olası bir rol kötü anlaşılmaktadır. Burada, Akış Sitometresi Imaging ile plak array yöntemi kullanarak kolesterol parçacıkların Morfolojik özellikleri oransal lipid düşürücü ilaç etkileri vitro değerlendirilmesi açıklayın. Kolesterol parçacıkların görüntü analizleri belirtilen lovastatin, simvastatin, ezetimibe ve atorvastatin iplikçik şeklinde parçacıkları, hem küresel hem de doğrusal oluşumu teşvik Niasin, Fibratlar, fluvastatin ve rosuvastatin neden ise Sadece küresel şekilli parçacıkların oluşumu. Sonraki, saflaştırılmış çok düşük yoğunluklu lipoprotein (VLDL) ve bu ilaçlar ile inkübe LDL partikülleri değişiklikleri kolesterol morfoloji ve görüntü doku parçacıkları altgrupları gösterdi. Ayrıca, tarama 50 serum örneklerinin doğrusal şekilli HDL kolesterol parçacıkları yaş eşlemeli normal (%11,1 ortalaması) örnekleri karşılaştırıldığında dislipidemi (%18,3 ortalaması) olan bireylerde daha yüksek düzeyde varlığı ortaya koydu. Biz de doğrusal azaltmak lipid düşürücü ilaç etkileri önemli değişimler serum numuneleri LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumu şeklinde gözlenen. Bu bulgular yanı sıra Hücre-aracılı hypolipidemic etkileri, lipid düşürücü ilaçlar doğrudan bir enzimatik olmayan etki mekanizmaları tarafından kolesterol parçacıkları morfolojisi modüle göstermektedir. Bu sonuçlar sonuçlar tanı ateroskleroz bilgilendirmek ve en uygun lipid düşürücü tedavi tahmin potansiyeline sahiptir.

Introduction

Birçok klinik çalışma plazma düzeyleri düşük yoğunluklu lipoproteinler (LDL) kolesterol ve düşük artış yüksek yoğunluklu lipoprotein (HDL) kolesterol, makul ses seviyelerinde azaltılmasında lipid düşürücü ilaçların yararlı etkileri göstermiştir ki birincil ve ikincil olaylar istenmeyen kardiyovasküler olaylar ateroskleroz ile ilgili1,2,3,4,5engeller. Statinler, HMG-CoA redüktaz enzim inhibitörleri, bir grup endojen kolesterol düşürmek için sıra kurşun kan6,7LDL kolesterol düzeyleri dolaşan karaciğer sentezinde engelleyin. Aynı şekilde, lipid düşürücü etkisini Niasin onun doğrudan ve noncompetitive Hepatosit diacylglycerol asiltransferaz-2, trigliserid sentezi8içinde yer alan bir anahtar karaciğer enzim inhibisyonu tarafından aracılık ettiği. Nispeten, ezetimibe9ince bağırsak epitel hücrelerinde bulunan Niemann-Pick C1-Like 1 (NPC1L1) protein bağlama yaparak eksojen kolesterol emilimini sınırlayarak LDL plazma düzeyini düşürür. Fenofibrate, başka bir lipid düşürücü ilaç, trigliserid plazma konsantrasyonları önemli ölçüde azaltır ve ayrıca orta LDL kolesterol ile peroxisome reseptörleri proliferatör-harekete geçirmek yolu10azalır. Ayrıca, omega-3 yağ asidi LDL11plazma düzeylerini düşürmek için onun yetenek nedeniyle anti-aterosklerotik etkisinin olmadığı bildirilmektedir.

Lipid düşürücü ilaçlar LDL kolesterol düşürücü üzerinde birincil onların etkisi ek olarak HDL düzeyi artırılması, endotel fonksiyonları geliştirmek, iltihabı azaltır ve trombosit inhibe dahil olmak üzere faydalı pleiotropic etkileri bir dizi var toplamalardan12,13,14. Ancak, HDL kolesterol parçacıkları artan ve yapısal özellikleri değiştirme bu ilaçların temel mekanizması tam olarak anlaşılamamıştır. Bu ilaçlar yaygın ateroskleroz bağlı kardiyovasküler hastalıklar (CVDs) tedavisi için reçete edilir beri Morfolojik özellikleri ve dağıtım lipid parçacıkların belirlemede olası rolleri daha ayrıntılı araştırmaya esastır. Yaklaşık 600 farklı lipidler ve 22 moleküler farklı çeşitli boyut, şekil, yoğunlukları ve besteleri15,16,17 içinde mevcut bıraktırırsanız insan plazma lipidome oluşur . Ultra-Santrifüjü, NMR ve degrade Jel Elektroforez gibi analitik yöntemleri LDL ve HDL parçacıklar ve onların subfractions18,19karakterize etmek için kullanılır. Ancak, uygulama bu yöntemlerin morfoloji ve lipid parçacıklar Meclisi oransal olarak ilaç etkisini belirlemede yönelik çalışmalar sınırlıdır. Akış Sitometresi tabanlı plak işlevsel bir biyokimyasal tahlil tespiti için geliştirilen ve görselleştirme serum lipid ve amiloid plak parçacıklar20türetilmiş dizidir. Bu çalışmada açıklanan yöntemi Imaging vitro avantajları morfoloji ve kolesterol parçacıkları tampon ve serum örneklerinde dağılımı değiştirme lipid oransal uyuşturucu etkileri tanımlaması etkinleştirin.

Protocol

1. hazırlık floresan etiketli kolesterol ve Lipid düşürücü ilaçlar Not: floresan etiketli kolesterol toplamları ve statinler hazırlanan bizim önceki makalede açıklandığı gibi 21. lütfen Malzemeler tablo düşsel Akış Sitometresi, kimya Analizörleri ve veri analiz yazılımı bu çalışmada kullanılan reaktifler, ilgili ayrıntılar için bkz:. Liyofilize kolesterol floresan etiketli solubilize (1 mg, Ex / Em 495 nm/507 nm =) tozu 0 alkol 1 ml. Örnek 2.040 x g de 3 dk santrifüj kapasitesi ve plak dizi tahlil çözünür Floresans etiketli kolesterol toplamları içeren supernatants kullanın. Uyuşturucu hazırlanması için ayrı ayrı simvastatin, lovastatin, atorvastatin, ezetimibe ve omega-3 yağ asidi % 100 alkol 1 ml tozlar (2 mg) solubilize. Tahlil uyuşturucu içeren supernatants 2.040 x g de 3 dk aralıklarla sonra kullanın. Tozlar (2 mg) fluvastatin, rosuvastatin, niasin, solubilize benzer şekilde, tek tek ve fibrate hisse senedi bir çözüm olarak 2 mg/mL deiyonize su 1 ml. Uyuşturucu plak dizi tahlil içeren supernatants 2.040 x g de 3 dk aralıklarla sonra kullanın. 2. Plak dizi tahlil inceleme In Vitro kolesterol parçacıkları oluşumu için Kullanım kimya analizörü-1 (bakınız tablo reçetesi plak dizi tahlil kolesterol parçacıkları oluşumu için ayarlamak için). Tahlil yuvarlak bir alt bölüm 1’de hazır reaktifler kullanarak düşük protein bağlayıcı 96-şey plaka gerçekleştirin. 200 µL her kuyuda son tepki hacmindeki korumak ve tüm deneyleri nüsha gerçekleştirmek. Önce yük 194.5 µL fosfat, arabelleğe alınmış serum (PBS) için her şey. Her şey, her lipid düşürücü ilaç çözüm 2.5 µL (5 µg) eklemek ve 30 plaka sallamak için düzgün ilaç çözüm karıştırmak için kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Hiç uyuşturucu negatif kontrol örnekleri eklenir. Son olarak, her şey için 2 µL (2 µg) floresan etiketli kolesterol toplu çözüm ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Plaka 2 h 37 ° C ve 200 devir/dakika olarak ayarlamak için bir laboratuvar shaker üzerinde kuluçkaya. Kuluçka sonra Akış Sitometresi Imaging tarafından parçacıklar görüntülerini elde. 3. Görüntüleri, kolesterol parçacıkları kullanarak Imaging Akış Sitometresi yakalama doğru araç ayarları yüklemek için veri alma şablonu aç. ‘ I tıklatın " dosya ", o zaman seçme " şablonunu aç … " ve şablon dosyası seçin. ‘I tıklatın " floş, kilit, yük " enstrüman örnek yükleme için hazırlamak için. Ne zaman " yük örnek " diyalog kutusu açılır,’ı tıklatın " Tamam " her bölüm 2’de görüntüleme Akış Sitometresi hazır örnekleri 50 µL yüklemeye. Tıklama " çalıştırmak | Kur " parçacıklar gerçek zamanlı görüntüleme alanını görüntülemek için. Görüntüleme alanını parçacıkları iyi odakta olduğunda ‘ı tıklatın " çalıştırmak | Elde " görüntüleri, her bir nesnenin aynı anda bir yüksek-den geçerek şekilde karanlık alan (yan dağılım/SSC), parlak alan (BF), yeşil Floresans ve sarı Floresans elde etmek için. 5,000-10,000 parçacıkların her örnek almaya 3.2-3.5 arasındaki adımları yineleyin. Nesne floresan yoğunluğu ve morfolojik varyasyon belirlemek için görüntü analiz yazılımı kullanarak tüm raw görüntü dosyalarını çözümlemenize. ‘I tıklatın " araçlar " düğmesi görüntü analiz yazılımı üstündeki sonra seçin " toplu veri dosyaları " aþaðý açýlan menüsünden, hangi açılacaktır " toplu işlemleri " penceresi. İçinde " toplu işlemleri " pencere,’ı tıklatın " Ekle toplu " düğme, hangi-ecek açık " bir toplu iş tanımlayın " penceresi. İçinde " bir toplu iş tanımlayın " pencere,’ı tıklatın " dosyaları ekle " düğme ve raw resim dosyalarını seçin, tıklatın " şablon " düğmesi ve uygun veri çözümleme şablon dosyası seçin sonra seçin " Tamam " ve " gönder toplu işlemleri " işleme ve raw resim dosyalarını analiz başlamak için. 4. Saf kolesterol parçacıkları üzerinde plak dizi tahlil dayalı değerlendirme, Lipid düşürücü ilaçlar etkisi 2.1, adımda anlatıldığı gibi gerçekleştirmek arıtılmış VLDL, LDL ve HDL lipoproteinler/parçacıklar kullanarak kolesterol parçacıkları oluşumu tahlil. Plak dizi tahlil bir 96-şey tabak içinde gerçekleştirmek. İlk olarak, Bütün wells PBS ile yük; 200 µL son hacim için her iyi kullanın. Negatif kontrol için 4 µg VLDL, LDL, eklemek veya HDL proteinler/parçacıklar tek tek her şey ilaç kullanmadan ve 30 plaka sallamak s. Lipid düşürücü ilaç etkisi inceleyerek için 4 µg VLDL, LDL, eklemek veya HDL proteinler/parçacıklar tek tek her şey ve 30 plaka sallamak s. 4 µg VLDL, LDL veya HDL ile eklendi kuyular için 2.5 µL (5 µg) ezetimibe, lovastatin, simvastatin veya Niasin çözüm ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1’yerleştirerek s. Son olarak, 2 µL (2 µg) kolesterol Floresans etiketli toplu çözüm için tüm wells ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. 37 ° C ve 200 devir/dakika olarak ayarlamak bir laboratuvar shaker 2 h plaka kuluçkaya. Aşağıdaki adımları 3.1-3.5 görüntüleme Akış Sitometresi kullanarak örnekleri elde. 3.7 adımda anlatıldığı gibi görüntü analiz yazılımı kullanarak raw görüntü dosyalarını çözümlemenize. Analiz şablonunda, kolesterol parçacıkları altgrupları tanımlanması için aşağıdaki gating şemasını kullanın. Yeşil kanal doymuş piksel sayısı (x ekseni) ve karanlık alan kanal bir arsa üzerinde doymuş piksel sayısı (y ekseni), reddetmek her iki kanaldaki bir veya daha fazla doymuş pikselleri nesneleriyle. Çizim nesneleri/parçacıklar yeşil kanal yoğunluğu (x ekseni) ve SSC yoğunluğu (y ekseni) kullanarak doymuş piksel: nesneleri düşmek birine üç bölgeler (VLDL, LDL, HDL) kendi yeşil kanal ve SSC yoğunluklarda dayalı. Not: Bu kapılardan denetim arıtılmış VLDL, LDL ve HDL parçacıklar/proteinler olmadan ilaç kullanarak yapılan deneyler üretilen verilere dayanan oluşturulmuş. Her örnek için lipid düşürücü ilaç etkisini belirlemek için başlığı altında açıklandığı adım 6,5 olarak toplam lipoprotein partikülleri konsantrasyonları yanı sıra her subpopulation (VLDL, LDL, HDL) yüzdesi hesaplamak. Aşağıdaki denklemi kullanarak Hesaplama parçacık konsantrasyonu (parçacıklar/mL): Not: VLDL, LDL ve floresan nokta-arsa bölgelerde çoğunluğuna HDL algılamak ~ onların anılan sıraya göre altgrupları ve kalan % 80’i ~ parçacıkların % 20 üst üste gating diğer bölgeleriyle. 5. Lipid konsantrasyonlarının Serum örneklerinde ölçümü kimya analizörü-2 tarafından LDL, HDL, kolesterol ve trigliserit konsantrasyonları belirlemek için yaş eşlemeli dislipidemi ve normal konular elde edilen serum numuneleri kullanın. Anormal konsantrasyon LDL, HDL, kolesterol ve trigliserid serum numuneleri alt ve üst başvuru değerleri ötesinde tespit onların konsantrasyon dayalı define. Normal referans değer recommen izleyinReaktif üretici tarafından ded: kolesterol (4-200 mg/dL), HDL (3.0-65 mg/dL), LDL (4-100 mg/dL) ve trigliserid (9-200 mg/dL). Gibi ya alt referans değeri altında veya üstünde yüksek başvuru değer kolesterol ve trigliserid için ve bunları kullanmak için tarama lipid düşürücü ilaçlar da anormal bir değere sahip serum örnekleri tanımlamak. 6. Kolesterol parçacıkları oluşumu Serum örneklerinde uyuşturucu etkisi analiz Kullanım kimya analizörü-1 plak dizi tahlil serum numuneleri kolesterol parçacıkları oluşumu için ayarlamak için. Tahlil bir yuvarlak alt, düşük protein bağlayıcı 96-şey plaka gerçekleştirin. 200 µL/iyi son tepki hacmi kullanın ve tüm deneyleri nüsha gerçekleştirmek. Kademeli bir şekilde reaktifler yükleyerek plaka hazırlayın. Kontrol wells hazırlayın. PBS yük 193 µL için her şey. %2,5 (v/v) hasta serumu (iyi başına yalnızca bir serum örneği) ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü tepki tabağa yerleştirerek s. Ekleyin 2 µL (2 µg) kolesterol Floresans etiketli her kuyuya çözüm toplamak ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Uyuşturucu Wells’le hazırlayın. Her şey için PBS, yük 191 µL. %2,5 (v/v) hasta serumu (iyi başına yalnızca bir serum örneği) ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Ekleyin 2 µL ezetimibe, lovastatin, simvastatin veya Niasin çözüm (4 µg) negatif kontrol wells hariç bütün wells. İyi başına yalnızca bir uyuşturucu ekleyin ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Ekleyin 2 µL Floresans etiketli kolesterol her kuyuya çözüm (2 µg) toplamak ve 30 plaka sallamak kimya analizörü-1 tepki tabağa yerleştirerek s. Sadece tüm wells sonra uyuşturucu yüklemek (kontrol ve uyuşturucu tedavi) ile onların anılan sıraya göre serum numuneleri yüklendikten ve floresan etiketli kolesterol bu adımın sonunda ekleyin. Bir laboratuvar shaker 37 ° C, gerekse 200 devir/dakika 2 h plaka kuluçkaya. Örnekleri 3.1-3.6 adımlarda açıklanan ayarları aşağıdaki Akış Sitometresi Imaging tarafından elde. Toplu 3.7 adımlarda açıklandığı gibi aynı şablonu kullanan tüm resim dosyaları işleme için yazılım analiz görüntü kullanın. Veri çözümlemesi gates arsa üzerinde 4.5 ve 4,6 adımlarda açıklandığı gibi çizerek. Lipid düşürücü ilaç etkisi/yanıt (düşük, orta ve yüksek) her örnek için belirlemek için toplam lipoprotein parçacık konsantrasyonu yanı sıra toplam parçacıklar VLDL, LDL ve HDL oluşan yüzdesi hesaplamak altgrupları. Çizim nesnesi bir çubuk grafik üzerinde VLDL, LDL ve HDL nüfus ' s parlak alan resim, uzunluğu (Uzunluk – Genişlik) ve kapı küresel ya da doğrusal bölgeleri düşülen Genişlik: nesneleri (Uzunluk – Genişlik) ile ≤ 2 µm düşmek içine küresel ve doğrusal yüzdesini hesaplamak için küresel bölge şeklinde parçacıklar. Olan ve olmayan her uyuşturucu inkübe her serum örneği için tanımlanan küresel ve doğrusal şekilli LDL ve HDL kolesterol parçacıkları yüzdesi karşılaştırın. Küresel ve doğrusal yüzdesi şeklinde SD ±2 uyuşturucu etkisi belirlenmesi için aralıkta LDL ve HDL parçacıkları her serum örneği için elde edilen onaylatılacak değerler arasında kabul.

Representative Results

Plak dizi tahlil analiz Lipid düşürücü ilaç etkileri kolesterol parçacıkları oluşumu üzerinde tabanlı: Statinler kolesterol parçacıkları morfolojisi oransal olarak etkisini değerlendirmek için floresan etiketli kolesterol toplamları ayrı ayrı lovastatin, simvastatin, atorvastatin, rosuvastatin ve arabellek fluvastatin ile inkübe. Bu örnekler şekil 1 ve Şekil 2gösterildiği gibi Morfoloji analizi için kolesterol parçacıkları görüntülerini yakalamak için görüntüleme Akış Sitometresi kullanarak satın alınan. İlginçtir, kolesterol parçacıkları oluşumu arabelleği uyuşturucu etkisi analiz simvastatin, lovastatin ve atorvastatin çeşitli ebat ve şekillerde görüntüleme kolesterol parçacıkları türdeş olmayan nüfusu oluşumu teşvik belirtilen, Şekil 3a -c. Tersine, kolesterol parçacıkları varlığında rosuvastatin, fluvastatin, oluşmuş ve negatif kontrol (olmadan ilaç) şeklinde ve şekil 3d-fiçinde gösterildiği gibi Morfoloji homojen. Buna ek olarak, simvastatin, lovastatin ve atorvastatin rosuvastatin ve fluvastatin kolesterol oluşumunu indüklenen ise hem küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji sergilenmesi kolesterol parçacıkları oluşumu indüklenen gözlenmiştir Sadece küresel görünümdeki parçacıklar. Doğrusal iplikçikleri oluşumu inducing üzerinde statinler etkisi sırasına göre lovastatin için % 16, simvastatin için % 2 ve % 0,2 atorvastatin için bulundu. Daha fazla parçacıkların oluşumu lipid düşürücü ilaçlar etkisini değerlendirmek için floresan etiketli kolesterol toplamları tek tek ezetimibe ile fibrate, niasin ve omega-3 yağ asidi inkübe. Statinler ile gözlemlediği gibi bu ilaçların kolesterol parçacıkları ile farklı boyut ve şekil 4a-diçinde görüntülendiği gibi şekillerde oluşumu indüklenen. Bunlar arasında ezetimibe formasyonu indüklenen kolesterol parçacıkları ise hem küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji sergileyen fibrate, niasin ve omega-3 yağ asidi tek küresel şekilli kolesterol parçacıkları oluşumu indüklenen. Buna göre ezetimibe, %0 için % 3 sırasına göre uyuşturucu etkisi kolesterol parçacıkları oluşumu şeklinde doğrusal iplikçikteki oldu fibrate, niasin için % 0 ve omega-3 yağ asidi için % 0. Morfolojik analiz her küresel veya doğrusal iplikçik şeklinde kolesterol parçacık birbirine bağlı çok sayıda daha küçük parçacıkların oluşmaktadır saptandı. ~ 2-60 µm2aralığında doğrusal şekilli partiküller boyutları vardır Oysa ~ 2-30 µm2, aralıkta floresan olumlu küresel kolesterol parçacıkları tanımlanan boyutları vardır. Arıtılmış VLDL ve LDL partikülleri Lipid düşürücü ilaçların etkisi çözümleme: Daha fazla kolesterol parçacıkları oluşumu lipoproteinler huzurunda incelemek için floresan etiketli kolesterol toplamları tek tek saflaştırılmış VLDL, LDL ve HDL proteinler/parçacıkları ile inkübe. Kuluçka kolesterol toplamları kolesterol parçacıkları, şekil 5daha yüksek bir dizi oluşumuna neden VLDL proteinler ile inkübe LDL ve HDL parçacıkları ile karşılaştırıldığında sonuçlar gösterdi. Buna ek olarak, iki büyük kesirler kolesterol parçacıkların LDL kesir kısmi onların dönüşmesi floresan etiketli kolesterol toplamları ile kuluçka sırasında düşündüren VLDL nüfus tespit edildi. Parçacıkların görüntü analizi küresel (~ % 97’si) ve VLDL, LDL ve HDL popülasyonlar arasında doğrusal şekilli (~ %3) parçacıkların varlığı belirtti. Doğrusal parçacıkların boyutu aralıkları ~ 2-60 µm2ise küresel parçacıkların boyutu aralıkları ~ 2-30 µm2, vardır. Lipid düşürücü ilaç etkisi arıtılmış parçacıklar incelenmesi için VLDL ve LDL partikülleri tek tek ezetimibe, lovastatin, simvastatin ve Niasin ile inkübe. Sonuç olarak, uyuşturucu olmadan kontrol deneyleri ile karşılaştırıldığında, VLDL parçacıkların oluşumu gözlenen uyuşturucu etkisi daha yüksek ezetimibe, simvastatin, lovastatin ve Niasin. Uyuşturucu ile inkübe LDL parçacıkları büyük bir tek kesir gösterdi ve parçacıkların oluşumu üzerinde uyuşturucu kaynaklı etkisi daha yüksek ezetimibe, simvastatin, lovastatin ve Niasin, şekil 6. Kolesterol parçacıkları Serum örneklerinde dağılımı değiştirme Lipid düşürücü ilaç etkileri varyasyonları: İlaç etkisini değerlendirmek için saflaştırılmış lipoproteinler ile arabellek çözümde önceki deneyler yapıldı. Dolayısıyla, sonraki adımda, kolesterol parçacıkları oluşumu üzerinde lipid düşürücü ilaçların etkinliğini 25 dersler ile dislipidemi ve 25 yaş eşlemeli normal konular toplanan 50 serum numuneleri kullanılarak incelenmiştir. Uyuşturucu ve uyuşturucu yanıt her serum örneği olarak kolesterol parçacıkları oluşumu profil değişiklikleri temel alarak ölçülmüştür. Plak dizi tahlil ezetimibe, lovastatin, simvastatin ve Niasin uyuşturucu karşı her serum örneği gösterildi. Sonuçları bu ilaçlar arasında eşitsizlik dağıtım azaltılması LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumu artırmak üzerine etkilerini özellikle serum numuneleri, VLDL, LDL ve HDL parçacıkların oransal olarak saptandı. Lipid düşürücü ilaçlar için eşsiz cevaplar sergilenmesi dislipidemi serum numuneleri üç temsilcileri Şekil 7′ de gösterilir. Serum modülasyonlu Morfoloji uyuşturucu etkisi tanımlaması LDL ve HDL kolesterol parçacıkları elde: Serum kaynaklı kolesterol parçacıkları fenotip analiz doğrusal lifler ve küresel şekilli VLDL, LDL, varlığı ortaya ve HDL altgrupları, böylece deneylerde tespit benzer görünümdeki doğrulayan arabellek her ikisi de gerçekleştirilen ve şekil 8′ de gösterildiği gibi saf lipoprotein partikülleri ile. Ancak, küresel ve doğrusal şekilli kolesterol parçacıkları altgrupları dağıtımını yaygın olarak çeşitli dislipidemi ve yaş eşlemeli normal konular arasında. Özellikle, ilaç kullanmadan gerçekleştirilen kontrol deneyleri doğrusal strand dağılımı farklılıkları LDL kolesterol parçacıkları dislipidemi (ortalama %2.0) ve yaş eşlemeli normal (ortalama % 1.3) arasında serum numuneleri şeklinde gösterdi. Benzer şekilde, doğrusal strand HDL kolesterol parçacıkları şeklinde artan bir düzeyde yapılan yaş uyumlu karşılaştırıldığında dislipidemi (,3 ortalaması) gözlenmiştir (,1 ortalaması) serum numuneleri. İlişki, deneyleri oluşumunda doğrusal şekilli HDL kolesterol parçacıkları simvastatin (ortalama % 8.3), ezetimibe (ortalama ,5), lovastatin (ortalama % 11.7), önemli bir azalma gösterdi dislipidemi serum örneklerinde uyuşturucu huzurunda gerçekleştirilen ve hiçbir azaltma Niasin (,3 ortalaması) için. Ayrıca, doğrusal şekilli LDL kolesterol parçacıkları oluşumu bir düşüş ne zaman Tablo 1′ de görüntülenen uyuşturucu ile inkübe dislipidemi serum örneklerinde gözlendi. Ayrıca, yaş eşlemeli kontrol serumu samp uyuşturucu huzurunda deneyleri gerçekleştirilenLes, HDL kolesterol parçacıkları simvastatin (ortalama % 5.0), ezetimibe (ortalama % 8.2), lovastatin (ortalama % 8.7) ve Niasin (ortalama .8) olarak gösterildiği Tablo 2şeklinde önemli azalma doğrusal gösterdi. Dislipidemi ve yaş eşlemeli normal serum örnekleri uyuşturucu kaynaklı küresel şekilli kolesterol parçacıkları (veri gösterilmez) göreli bir artış gösterdi doğrusal şekilli LDL ve HDL kolesterol parçacıkları azalma sergilenmesi. Resim 1: Diyagram kolesterol parçacıkları Morfoloji vitro görselleştirme süreci gösteren. (a, b) Lipid düşürücü ilaç arabellek veya serum örneklerinde ek. (c) çözünür kolesterol Floresans etiketli ek örnekler için toplar. (d) görüntüleme Akış Sitometresi kullanarak çözünmez kolesterol parçacıkların morfolojik analiz için elde edilen örnekleri alınıyor. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 2: iki farklı türleri Morfoloji görüntüleme Akış Sitometresi kullanarak kolesterol parçacıkların tanımlaması. (bir) parçacıkları içine parlak alan görüntülerin dokusal analize dayalı doğrusal veya küresel nüfus ayrılmış. Özellikle, nokta-arsa H homojenliği (x ekseni) demek ve demek H entropi (y ekseni) küresel (kırmızı) algılamak için iki kapılı bölgeleri içeren ve doğrusal iplikçik (mavi) kolesterol parçacıkları şeklinde. (b) resimlerini Morfoloji nüfus 1 tanımlanan küresel şekilli parçacıkların görüntüleme. (c) görüntüleri doğrusal Strand nüfus 2 tespit parçacıklar şeklinde. (d) onların konsantrasyon ve altgrupları belirlemek için kullanılan tüm floresan olumlu kolesterol parçacıkları dağıtımını görüntüleme Histogram. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 3: resim galerileri etkisi statinler kolesterol parçacıkları oluşumu oransal görüntüleme. Parlak alan geleneksel Akış Sitometresi FSC için benzer bölgeyi ifade eder. 505-560 nm tespit Floresans emisyon yeşil kanal başvurduğu ve sarı kanal 560-595 nm tespit Floresans emisyon anlamına gelir. (a-e) Kolesterol parçacıkları Morfoloji gösteren resim galerileri lovastatin, simvastatin, atorvastatin, rosuvastatin ve fluvastatin, huzurunda sırasıyla kurdu. (f) kolesterol parçacıkları oluşumu semptomlar (negatif kontrol) yokluğunda. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 4: kolesterol parçacıkları oluşumu oransal olarak lipid düşürücü ilaçlar fark etkisini gösteren. (a-d) Kolesterol parçacıkları Morfoloji gösteren resim galerileri ezetimibe, niasin, fibrate ve omega-3 yağ asidi, huzurunda sırasıyla kurdu. 505-560 nm tespit Floresans emisyon yeşil kanal başvurduğu ve sarı kanal 560-595 nm tespit Floresans emisyon anlamına gelir. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 5: analiz VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşum yokluğunda uyuşturucu. Nokta-araziler: Yeşil Floresans kanal (505-560 nm) tespit kolesterol parçacıkları bir spektrum x ekseni ve y ekseni yan dağılım görüntüler. Perdeleme Floresans nokta-araziler içinde tespit VLDL, LDL ve HDL parçacıkların bölgeleri gösterir. (bir) huzurunda arıtılmış VLDL kolesterol parçacıkları oluşumu. dolaşım sırasında VLDL parçacıkların (b) temsilcisi görüntüler. (c) huzurunda arıtılmış LDL kolesterol parçacıkları oluşumu. (d) temsilcisi görüntülerini LDL parçacıkları. (e) huzurunda arıtılmış HDL kolesterol parçacıkları oluşumu. HDL parçacıkların (f) temsilcisi görüntüler. Ölçek çubukları 10 µm. = Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 6: lipid düşürücü ilaçlar üzerinde etkisini gösteren saf VLDL ve LDL kolesterol parçacıkları. Uyuşturucu olmadan (bir) VLDL parçacıklar. (b) VLDL parçacıklar ezetimibe ile inkübe. (c) VLDL parçacıklar lovastatin ile inkübe. (d) VLDL parçacıklar simvastatin ile inkübe. (e) VLDL parçacıklar Niasin ile inkübe. (f) LDL partikülleri uyuşturucu inkübe. (g) LDL parçacıkları ezetimibe ile inkübe. (h) LDL partikülleri lovastatin ile inkübe. (ben) LDL partikülleri simvastatin ile inkübe. (j) LDL partikülleri Niasin ile inkübe. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 7: nokta araziler lipid düşürücü ilaçlar VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumunda serum numuneleri oransal olarak fark etkisini gösteren Floresans. Üst satır, serum 1 gösteren düşük düzey uyuşturucu yanıt %0 15 HDL parçacıkların oluşumu için artan tarama; orta sıra, serum 2 gösteren orta düzey uyuşturucu yanıt 50 HDL parçacıklara artan tarama; Alt satır, serum 3 gösteren daha yüksek düzey uyuşturucu yanıt 100 HDL parçacıkları ile artan testi ile taranması. (a, f, k) Serum numuneleri ilaçsız. (b, g, l) Serum numuneleri ezetimibe ile inkübe. (c, h, m) Serum numuneleri lovastatin ile inkübe. (d, i, n) Serum numuneleri simvastatin ile inkübe. (e, j, o) Serum numuneleri Niasin ile inkübe. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Şekil 8: serum içinde tanımlanan kolesterol parçacıkları Morfoloji gösteren resim galerileri Örnek 1. Yeşil kanal Floresans emisyon saçılan görüntülerini gösterir; yan dağılım (camgöbeği kanal) uyarma lazer görüntülerini moleküller tarafından dağınık ışık gösterir. (bir) küresel ve doğrusal şekilli kolesterol parçacıkları uyuşturucu kurdu. (b, c, d, e) Kolesterol parçacıkları ezetimibe, lovastatin, simvastatin ve Niasin, huzurunda sırasıyla kurdu. Ölçek çubukları= 10 µm. Bu rakam daha büyük bir versiyonunu görüntülemek için buraya tıklayınız. Serum kimliği Uyuşturucu (Denetim) Ezetimibe ile Lovastatin ile Simvastatin ile Niasin ile % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar PNDS-01 1.73 45.2 0,81 18,1 0,61 16,1 0.59 13,9 2.26 33.6 PNDS-02 2,86 35.9 1.26 30.9 1,27 22,7 0,73 15,2 3.03 37.7 PNDS-03 2.04 35,8 0,87 4.82 1,02 4.14 0,36 3.06 0,45 9,57 PNDS-04 2.56 32.9 1.15 21,8 1.12 18,6 0.77 17,2 3.37 36,5 PNDS-05 0,42 29.2 0,24 5,62 0,22 8.72 0,16 9.91 0,35 22,2 PNDS-06 1.8 28,1 0,4 16,8 0.62 15 0,42 9.27 2.28 38.4 PNDS-07 1.8 26,5 0.85 10,5 1,18 19,9 0.62 7,32 1.29 23,4 PNDS-08 0,98 22,8 0.86 7,28 1,55 10,2 0,14 5.98 0.59 13,3 PNDS-09 3.87 22,1 1,98 9,56 1.87 10.3 1.46 7,96 2,86 9,88 PNDS-10 4,46 21,9 2,57 13,6 4,04 17,1 2.28 11,9 0.71 25,7 PNDS-11 1.57 19,2 1.15 9,24 1.37 6.98 0,74 5,03 1.37 16 PNDS-12 1.06 16,7 0.66 4.38 0,7 4,74 0,99 6.36 1.14 4,73 PNDS-13 4,85 16,6 1.28 30,4 1.4 32,6 0.8 16,6 4.02 31 PNDS-14 2.08 16 0,68 15,4 inç 0.64 16,5 1,97 10,2 1,25 20.11 PNDS-15 1.5 11,9 1.14 13,3 1.21 11,4 0.8 6.12 1,38 4,59 PNDS-16 1,82 10,4 2.04 9.59 1,24 5,62 0,91 5,38 1.31 7.61 PNDS-17 1,05 10.3 1,02 4.7 1,78 15,1 0,93 7.81 1,27 13 PNDS-18 1.11 8,76 0.54 3,68 0,61 3.51 1,01 5,03 1,02 6,69 PNDS-19 1 8,52 0,75 6,67 0,76 5,86 0,91 8.36 1,22 11,9 PNDS-20 3.54 7,92 3,78 12 3.56 5.81 3,28 8.28 3,44 12,3 PNDS-21 1,88 7.69 2.12 11,4 1.73 9,54 1,77 8.34 2.32 16,7 PNDS-22 1.64 7,17 0,35 5.75 0.56 13,2 0,14 4.33 1.23 17,8 PNDS-23 1,54 6.27 1,25 7.24 1,02 6.12 0,73 3,58 1,42 6,69 PNDS-24 0,53 6.22 0,52 4,49 0,91 5,57 0.54 4.01 0.65 10,5 PNDS-25 2.97 5.1 1.59 11 1,88 9 1.03 6.54 2.61 29.1 Tablo 1: dislipidemi eleme plak dizi tahlil örneklerinde serum lipid düşürücü ilaçlar fark etkisini göstermek. Denetimleri olmadan ilaç (sütun 2, 3) karşılaştırıldığında, serum numuneleri ile ezetimibe (sütunlar 4, 5), lovastatin (sütunlar 6, 7), simvastatin (sütunlar 8, 9) ve doğrusal şeklinde LDL ve HDL kolesterol inducing üzerinde gösterdi Niasin (sütunlar 10, 11) varyasyonları inkübe parçacıkların oluşumu. Serum kimliği Uyuşturucu Ezetimibe ile Lovastatin ile Simvastatin ile Niasin ile % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar % Doğrusal, LDL partikülleri % Doğrusal, HDL parçacıklar PNAN-01 2,05 26,8 0.62 11,9 0.56 16,9 0,52 9,28 1.4 11,9 PNAN-02 1.35 26,3 1,68 21,8 2,59 23,6 0,79 kadar 6,92 2.16 29,7 PNAN-03 2.4 24,9 0,53 7,54 0,57 13,8 0,55 5,82 1.7 4.7.1 PNAN-04 1,99 21,5 1,54 9,45 1,56 8,25 0.31 3.74 2,88 20,8 PNAN-05 1,77 18,8 1.49 6.03 1.65 5.5 0.54 4,67 1.2 8.19 PNAN-06 1.12 15,2 0,67 4.42 2,68 13,3 0,5 2.37 1,54 16,3 PNAN-07 1.03 14,4 0,79 6.83 1,45 7.91 0,67 5.36 1.57 12 PNAN-08 0,98 14,3 0,88 4,48 2 7.1 0,19 2,66 1,02 18,1 PNAN-09 2.85 14,1 1,95 12,6 2,34 12,5 0,7 6,24 1,84 18,7 PNAN10 1,01 10,4 0.8 5,07 0.51 5,9 0,87 6.5 1,63 10,9 PNAN-11 0.92 12,4 0.21 9.94 0,29 3.31 0,29 6.52 0,58 10,4 PNAN-12 0,6 10,5 0.56 5,78 1.06 4,74 0,4 3.32 0,91 11,8 PNAN-13 1,25 10.3 0,45 3.79 0,67 6.53 0,27 3,17 0.8 6.28 PNAN-14 1.03 9.86 1.12 8,51 1,05 6,91 0,6 5.94 1,05 8.14 PNAN-15 2.28 8.1 1.93 10,4 2.14 8,86 1,56 6.84 2,31 8,61 PNAN-16 1,98 7.69 0,45 4.36 1 5.46 0,27 2,89 0,49 4.12 PNAN-17 1,72 6.72 0,75 14,8 0,74 9,26 0,49 5,58 1,98 12,8 PNAN-18 2.45 6.38 0.85 16,8 0,89 14,2 0,58 5,9 1.8 20,6 PNAN-19 1.67 5.12 0,58 8,63 0.65 5,7 0.64 8.8 1,88 2.08 PNAN-20 1.17 4.41 0.85 7,77 0,91 6,43 0,69 5,08 1.21 6.12 PNAN-21 0.31 4,18 0.48 6,95 0,19 5,09 0,15 2.1 0,29 5.93 PNAN-22 0.77 4.02 1,24 7,41 0,61 5.02 0,29 3.49 0,42 3.98 PNAN-23 0,4 1,25 0,75 6.25 0,88 5,91 0,9 5,06 0.82 6,71 PNAN-24 0,45 1.1 0,63 2.5 0,55 5.32 0,9 4.3 0.71 3.5 PNAN-25 0,36 1 0,73 2.4 0.66 5.1 0.82 4 0,7 3.4 Tablo 2: Yaş eşlemeli denetim serum numuneleri plak dizi tahlil testi ile taranması göstermek lipid düşürücü ilaçlar diferansiyel etkisi. Denetimleri olmadan ilaç (sütun 2, 3) karşılaştırıldığında, serum numuneleri ile ezetimibe (sütunlar 4, 5), lovastatin (sütunlar 6, 7), simvastatin (sütunlar 8, 9) ve doğrusal şeklinde LDL ve HDL kolesterol inducing üzerinde gösterdi Niasin (sütunlar 10, 11) varyasyonları inkübe parçacıkların oluşumu.

Discussion

Genel olarak, dağıtım ve kan dolaşımını VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkların fonksiyonel özellikleri esas olarak metabolik, genetik, epidemiyolojik, cep ve plazma faktörler22,23tarafından belirlenir. Bu da çalışmanın, lipid değiştirmenin etkileri inceleyerek uyuşturucu arabellek ortaya ezetimibe, simvastatin, lovastatin ve atorvastatin gibi son derece lipofilik ilaçların kolesterol parçacıkları morfolojisi üzerinde daha yüksek bir düzey karmaşıklık indüklenen yüksek hidrofilik rosuvastatin ve fluvastatin ilaçlarla gözlenen alt düzey etkisi ile karşılaştırıldığında. Bu sonuçlar iyi anlaşma statinler LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumunda tampon ve serum örnekleri21oransal olarak enzimatik olmayan mekanizması dayalı etkisini açıklayan bizim önceki çalışma ile bulunmaktadır. Buna göre bu da çalışmanın sonuçlarından bir enzimatik olmayan etki mekanizması ezetimibe, niasin, fibrate, ve kolesterol parçacıkları oluşumu oransal doğrudan bir rol oynayabilir omega-3 yağ asidi ilaçlar ortaya koydu. Uyuşturucu ve kolesterol toplamları arasındaki etkileşimler küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji sergilenmesi Meclisi 2-60 µm2, büyük boy kolesterol parçacıkları için yol mümkündür.

Ayrıca, saf lipoprotein partikülleri kullanarak elde edilen sonuçları kolesterol toplamları ve besteleri ve kolesterol Morfolojik özellikleri değiştirebilir VLDL, LDL ve HDL proteinler de dahil olmak üzere plazma faktörler arasındaki etkileşimleri önermek parçacıklar. Arıtılmış lipoprotein partikülleri içeren uyuşturucu tedavi sonuçları VLDL parçacıkların oluşumu LDL kolesterol parçacıkları oluşumu gözlenen etkileri kıyasla daha yüksek bir düzey uyuşturucu etkisi belirtti. Lovastatin, simvastatin ve ezetimibe uyuşturucu pro-ilaç olarak kullanılan ve deneyleri kendi dozlarda fizyolojik konsantrasyonları yüksek olabilir.

İlginçtir, VLDL, LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumu profilleri değiştirme üzerinde uyuşturucu etkisi varyasyonları gösterdi serum örneklerinin eleme, doğrusal oluşumlar üzerindeki etkileri özellikle LDL ve HDL parçacıklar şeklinde. Bu ilaçlar LDL ve HDL kolesterol parçacıkları oluşumunda dislipidemi ve yaş eşlemeli normal serum numuneleri şeklinde azaltma doğrusal olarak indüklenen. Doğrusal şekilli parçacıkların oluşumu azaltılması üzerinde gözlenen uyuşturucu etkileri daha yüksek simvastatin, ezetimibe, lovastatin ve Niasin. Kolesterol parçacıkları ile küresel ve doğrusal strand türleri Morfoloji dislipidemi ve normal serum örneklerinde tanımlaması parçacıkları ile benzer türleri Morfoloji in vivo koşullarda oluşabilir öneriyor. Önceki çalışmalarda disk ve insan ve ApoE– / – LDLR– / – fare modelleri24,25,26 aterosklerotik plaklar iğne gibi kolesterol kristaller varlığı belirledik ,27,28.

Türdeş olmayan bir karışımı ve küçük ve büyük boy HDL parçacıkları ile birlikte fonksiyonel etkinlik düzeyini ters kolesterol taşıma araçları ile onların kardiyo-koruyucu etki gösterirler gereken önemli faktörlerdir kanda dolaşan HDL parçacıklar mevcut yolu29,30. Son yıllarda yapılan çalışmalarda HDL kolesterol parçacık subfractions kolesterol sızma, anti-inflamasyon, Anti-trombotik ve anti-oksidatif gibi birden çok Biyolojik işlevleri içindeki rollerine31 elucidating için tanımlama önemini vurguladıktan . Ayrıca, çalışmalar bir dizi düşük HDL düzeyini plazma1,5,21ılımlı artan lipid düşürücü tedavi etkisi bildirdin. Buna göre bu çalışmanın sonuçlarından kolesterol parçacıkları Morfolojik özellikleri hakkında yeni bilgiler sağlar. Özellikle, dislipidemi deneklerin serum numuneleri doğrusal şekilli HDL kolesterol parçacıkları daha yüksek düzeyde tespiti onlar tanı ve lipid değiştirme etkilerini değerlendirmek için güvenilir biyomarker olabileceğini düşündürmektedir hastalarda ilaç. Ancak, daha fazla araştırma farklı türleri morfoloji ve CVD için onların dernek ile kolesterol parçacıkları daha iyi anlamak için büyük klinik numuneleri kullanılarak gereklidir.

Kolesterol parçacıkları Meclisi uyuşturucu etkisi incelenmesi için plak dizi assay olarak, biz çünkü kolesterol toplamları ve 5 µgof uyuşturucu etiketli floresan 2 µg kullanılır: (1) uyuşturucu rekabetçi kolesterol etiketli her iki floresan bağlamak ve endojen lipidler serum örneklerinde sunmak; (2) her örnek, biz büyük ebat ve şekillerde ~ 2-60 µ2den değişen içine monte 5.000-10.000 kolesterol parçacıkları elde; (3) biz uyuşturucu yanıt uyuşturucu (5 µg doz 300 ng) ve bunların yüksek dozlarda kolesterol parçacıkları oluşumu profilinde tespit değişiklik gösterdi inkübe ~ 1-%5 ile inkübe serum örnekleri arasında geniş bir varyasyon gözlenen; ve (4) kolesterol toplamları ve lipid düşürücü ilaçlar arasındaki etkileşimi enzimatik olmayan bir işlem tarafından aracılık ettiği. Bu nedenle, tahlil kullanılan reaktifler konsantrasyonları kendi fizyolojik düzeyi daha yüksek olabilir.

Sonuç olarak, başarılı bir şekilde morfoloji ve kompozisyon kolesterol oransal olarak lipid düşürücü ilaçlar geniş bir yelpazede etkisini belirlemek için bu çalışmada açıklanan yöntemi Imaging bir vitro avantajlarını göstermiştir parçacıklar. Görselleştirme ve morfolojisi lipid parçacıkların görüntü analiz algoritmaları bir takımyıldızı istihdam ederek miktarının bir yaklaşım her iki ateroskleroz ve hastalarda lipid düşürücü tedavinin sonuçları değerlendirmek için tanı yardımcı olabilir.

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Bu eser bir Plaxgen araştırma tarafından finanse edildi grant SM (PLX-1008) verilmiştir. Palo Alto tıbbi araştırma Vakfı Araştırma Enstitüsü ateroskleroz konulardan IRB onay altında serum numuneleri toplamak için teşekkür ediyoruz.

Materials

TopFluor fluorescent cholesterol Avanti Polar lipids store 100 µl aliquots at -20 °C
simvastatin (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
lovastatin (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
rosuvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
atorvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
fluvastatin Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
ezetimibe (pro-drug) Cayman Chemicals store 100 µl aliquots at -20 °C
Niacin MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
fibrate MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
omega-3 fatty acid MilliporeSigma store 100 µl aliquots at -20 °C
purified VLDL proteins/particles Lee Bio
purified LDL proteins/particles Lee Bio
purified HDL proteins/particles Lee Bio
Human age-matched serum Dx Biosamples
Human atherosclerosis serum Bioserve
Human normal serum Stanford Blood center
LDL measurement reagent pack Roche Diangostics
HDL measurement reagent pack Roche Diangostics
Total cholesterol measurment Roche Diangostics
96-well microtitre plates
Triglycerides measrument Roche Diangostics
Amnis Imaging Flow cytometer Amnis Inc
IDEAS image analysing software Amnis Inc
Chemistry Analyzer-1, ChemWel 2902 Awarness Technology
Chemistry Analyzer-2, Intergra 400 Roche Diangostics
DOWNLOAD MATERIALS LIST

Referencias

  1. Pahan, K. Lipid-lowering drugs. Cell Mol Life Sci. 63, 1165-1178 (2006).
  2. Laforest, L., et al. Prevalence of low high-density lipoprotein cholesterol and hypertriglyceridaemia in patients treated with hypolipidaemic drugs. Arch Cardiovasc Dis. 102, 43-50 (2009).
  3. Roberts, W. C. Preventing and arresting coronary atherosclerosis. Am Heart J. 130, 580-600 (1995).
  4. Goldstein, J. L., Brown, M. S. A century of cholesterol and coronaries: from plaques to genes to statins. Cell. 16, 161-172 (2015).
  5. Drexel, H. Statins, fibrates, nicotinic acid, cholesterol absorption inhibitors, anion-exchange resins, omega-3 fatty acids: which drugs for which patients?. Fundam Clin Pharmacol. 23, 687-692 (2009).
  6. Camelia, S., Anca, S. Statins: Mechanism of action and effects. J.Cell.Mol.Med. 5, 378-387 (2001).
  7. Schaefer, E. J., et al. Comparisons of effects of statins (atorvastatin, fluvastatin, lovastatin, pravastatin, and simvastatin) on fasting and postprandial lipoproteins in patients with coronary heart disease versus control subjects. Am J Cardiol. 93, 31-39 (2004).
  8. Meyers, C. D., Kamanna, V. S., Kashyap, M. L. Niacin therapy in atherosclerosis. Curr Opin in Lipid. 15, 659-665 (2004).
  9. Phan, B. A., Dayspringm, T. D., Toth, P. P. Ezetimibe therapy: mechanism of action and clinical update. Vasc Health Risk Mana. 8, 415-427 (2012).
  10. Leitersdorf, E., Fruchart, J. C. Mechanism of action of fibrates on lipid and lipoprotein metabolism. Circulation. 98, 2088-2093 (1998).
  11. Backes, J., Anzalone, D., Hilleman, D., Catini, J. The clinical relevance of omega-3 fatty acids in the management of hypertriglyceridemia. Lipids Health Dis. 15, 118 (2016).
  12. Davidson, M. H. Clinical Significance of Statin Pleiotropic Effects Hypotheses Versus Evidence. Circulation. 111, 2280-2281 (2005).
  13. Chinetti-Gbaguidi, G., Fruchart, J. C., Staels, B. Pleiotropic effects of fibrates. Curr Atheroscler Rep. 7, 396-401 (2005).
  14. McTaggart, F., Jones, P. Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit Effects of Statins on High-Density Lipoproteins: A Potential Contribution to Cardiovascular Benefit. CardiovascDrugs Ther. 22, 321-338 (2008).
  15. Quehenberger, O., et al. The Human Plasma Lipidome. N Engl J Med. 365, 1812-1823 (2011).
  16. Lund-Katz, S., et al. Mechanisms responsible for the compositional heterogeneity of nascent high density lipoprotein. J. Biol Chem. 288, 23150-23160 (2013).
  17. Krauss, R. M. Lipoprotein subfractions and cardiovascular disease risk. Curr Opin Lipidol. 21, 305-311 (2010).
  18. Krauss, R. M., Burke, D. J. Identification of multiple subclasses of plasma low density lipoproteins in normal humans. J Lipid Res. 23, 97-104 (1982).
  19. Rosenson, R. S., et al. HDL measures, particle heterogeneity, proposed nomenclature, and relation to atherosclerotic cardiovascular Events. Clinic Chemi. 57, 392-410 (2011).
  20. Madasamy, S., et al. Plaque array method and proteomics-based identification of biomarkers from Alzheimer’s disease serum. Clin Chim Acta. 441, 79-85 (2015).
  21. Madasamy, S., et al. Nonenzymatic Mechanism of Statins in Modulating Cholesterol Particles Formation. Am J Cardiol. 118, 1187-1191 (2016).
  22. Peter, O. K. Clinical relevance of the biochemical, metabolic, and genetic factors that influence low-density lipoprotein heterogeneity. Am J Cardiol. 90, 30-47 (2002).
  23. Weissglas-Volkov, D., Pajukanta, P. Genetic causes of high and low serum HDL-cholesterol. J Lipid Res. 51, 2032-2057 (2010).
  24. Abela, G. S. Effect of statins on cholesterol crystallization and atherosclerotic plaque stabilization. Am J Cardiol. 107, 1710-1717 (2011).
  25. Nidorf, S. M., Eikelboom, J. W., Thompson, P. L. Targeting cholesterol crystal-induced inflammation for the secondary prevention of cardiovascular disease. Cardiovasc Pharmacol Ther. 19, 45-52 (2014).
  26. Thacker, S. G., Zarzour, A., Chen, , et al. High density lipoprotein reduces inflammation from cholesterol crystals by inhibiting inflammasome activation. Immunol. 149, 306-319 (2016).
  27. Kim, S. H., Lee, E. S., Lee, J. Y., et al. Multiplex coherent anti-stokes Raman Spectroscopy images intact atheromatous lesions and concomitantly identifies distinct chemical profiles of atherosclerotic lipids. Circ Res. 106, 1332-1341 (2010).
  28. Lim, R. S., Suhalim, J. L., Miyazaki-Anzai, S., et al. Identification of cholesterol crystals in plaques of atherosclerotic mice using hyperspectral CARS imaging. J Lipid Res. 52, 2177-2186 (2011).
  29. Rothblat, G. H., Phillips, M. C. High-density lipoprotein heterogeneity and function in reverse cholesterol transport. Curr Opin Lipidol. 21, 229-238 (2011).
  30. Kontush, A. HDL particle number and size as predictors of cardiovascular disease. Front in Pharmacol. , (2015).
  31. Karathanasis, S. K., Freeman, L. A., Gordon, S. M., Remaley, A. T. The changing face of HDL and the best way to measure it. Clin. Chem. 63, 196-210 (2017).

Tags

Cholesterol ParticlesLipid-lowering DrugsPlaque ArrayMorphological FeaturesIn Vitro ImagingBiomarkersAtherosclerosisChemistry AnalyzerImaging Flow CytometryData Analysis

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Citar este artículo
Madasamy, S., Liu, D., Lundry, J., Alderete, B., Kong, R., Robinson, J. P., Wu, A. H., Amento, E. P. Differential Effects of Lipid-lowering Drugs in Modulating Morphology of Cholesterol Particles. J. Vis. Exp. (129), e56596, doi:10.3791/56596 (2017).
Descargar cita
Reimpresiones y permisos

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image