Un protocollo per la caratterizzazione di composizione chimica di respiro esalato in tempo reale tramite ionizzazione secondaria nanoelectrospray accoppiato ad alta risoluzione in spettrometria di massa è dimostrata.
Espirata composti organici volatili (COV) hanno suscitato notevole interesse, dal momento che possono servire come biomarcatori per la diagnosi della malattia e l’esposizione ambientale in modo non invasivo. In questo lavoro, vi presentiamo un protocollo per caratterizzare i COV espirati in tempo reale tramite ionizzazione secondaria nanoelectrospray accoppiata alla spettrometria di massa ad alta risoluzione (Sec-nanoESI-HRMS). L’origine di Sec-nanoESI fatti in casa è stato prontamente istituito basata su un’origine commerciale nanoESI. Centinaia di picchi sono stati osservati negli spettri di massa sottratta a sfondo di respiro esalato, e i valori di accuratezza di massa sono -4,0-13,5 ppm e -20,3-1,3 ppm in modalità di rilevamento di ioni positivi e negativi, rispettivamente. I picchi sono stati assegnati con accurata composizione elementare secondo il modello isotopico e massa accurata. Meno di 30 s è utilizzata per la misurazione di una espirazione, e si impiegano circa 7 minuti per sei misurazioni replicate.
Con il rapido sviluppo di moderne tecniche analitiche, centinaia di composti organici volatili (COV) è state identificate nel condensato del respiro umano1. Questi COV derivano principalmente da aria alveolare (~ 350 mL per un adulto sano) e spazio morto anatomico aria (~ 150 mL)2, che sono influenzati da corpo metabolismo3,4,5,6,7 ,8 e inquinamento ambientale9, rispettivamente. Di conseguenza, se identificato, questi composti organici volatili sono promettenti per essere utilizzate come biomarcatori per la diagnosi di malattia e l’esposizione ambientale in modo non invasivo.
Anche se la gas cromatografia spettrometria di massa (GC-MS) è la tecnica più ampiamente usata per l’analisi qualitativa e quantitativa di espirata COV2, tecniche dirette di MS, che sono stati sviluppati per l’analisi in tempo reale respiro, presentano i vantaggi di elevata risoluzione temporale e pre-preparazione semplice del campione. Tecniche dirette di MS, come reazione di trasferimento di protone (PTR-MS) MS10, selezionato tubo di flusso dello ione MS (SIFT-MS)11, (anche denominato come electrospray estrattive secondaria electrospray ionizzazione MS (SESI-MS)12,13 ionizzazione MS, EESI-MS14,15), traccia gas atmosferico analyzer (TAGA)16 e plasma ionizzazione MS (PI-MS)17 sono stati studiati anni recenti.
Tra tutte le tecniche di MS dirette, SESI è ben noto come un’ionizzazione morbida universale tecnica19,20,21; e la fonte è facile da essere personalizzati e accoppiato a diversi tipi di spettrometri di massa, ad esempio, il tempo di volo spettrometro di massa8,15, presa dello ione di massa spettrometro14 e orbitrap spettrometro di massa12 ,18. Fino ad ora, SESI-MS è usato con successo nella diagnosi di malattie respiratorie22, ritmo circadiano3,6,23, farmacocinetica7,8, di misura e rivelando le vie metaboliche4, ecc. Più recentemente, una fonte commerciale di SESI è diventato disponibile.
In questo studio, una sorgente di ionizzazione facile e compatto nanoelectrospray secondario (Sec-nanoESI) è stata istituita e accoppiata ad uno spettrometro di massa ad alta risoluzione. Misurazioni in tempo reale di COV nell’aria espirata in respiro sono stati presentati.
Costruire la fonte di Sec-nanoESI basata su un’origine commerciale nanoESI, l’efficienza di ionizzazione è superiore a quello dell’utilizzo di un’ origine ESI30. Inoltre, l’efficienza di ionizzazione è ulteriormente migliorata in una camera chiusa, come si isola il processo dall’aria sfondo dell’ambiente e allo stesso tempo facilita la miscelazione tra il campione di gas e il pennacchio di spruzzo. Utilizzando un Sec-nanoESI, meno i parametri devono essere ottimizzati rispetto ad una sorgente ES…
The authors have nothing to disclose.
Quest’opera è stata sostenuta finanziariamente dalla Fondazione nazionale di scienze naturali della Cina (No. 91543117).
Ultrapure water | Merck Millipore, USA | MPGP04001 | Resistance >18.2 MΩ·cm |
Formic acid | Sigma-Aldrich, USA | F0507 | Corrosive to the respiratory tract. |
Nitrogen gas | Guangzhou Shiyuan Gas Co. Ltd., China | N.A.a | Purity >99.99% |
Q Exactive hybrid quadrupole-orbitrap mass spectrometer | Thermo Scientific, USA | 02634L(S/N) | Beware of high voltage and high temperature |
NanoESI source | Thermo Scientific, USA | ES002373(S/N); ES071(P/N) | Beware of high voltage and high temperature |
Nano LC pump | Thermo Scientific, USA | 5041.0010A(P/N) | / |
Xcalibur software (Version 3.0) | Thermo Scientific, USA | BRE0008596 | / |
Dino-Lite Digital Microscope | Tech Video System (SuZhou) Co.Ltd., China | CQ401833R(S/N) | / |
Nafion tubing | Perma Pure LLC, USA | ME60 | / |
PTFE tubing (I.D. 4 mm) | Dongguan Hongfu Insulating Material Co. Ltd., China | N.A. | Beware of the possible loss of polar compounds |
Mass flow controller | Line-Tech, Korea | M15122007 (S/N) | / |
Flow meter | Yuyao Industrial Automation Meter Factory, China | 40784 | / |
aN.A.: not available. |