Summary

미세 드라이 회전 및 재생성된 실크 Fibroin 섬유의 특성

Published: September 04, 2017
doi:

Summary

미세 회전 및 재생성된 실크 fibroin monofilament의 미세 특성화에 대 한 프로토콜 제공 됩니다.

Abstract

프로토콜 누의 회전 과정을 흉내 낸에 대 한 메서드를 보여 줍니다. 기본 회전 과정에서 계약 회전 덕트 실크 단백질을 콤팩트 하 고 전단 및 신장 힘에 의해 정렬 될 수 있습니다. 여기, biomimetic 미세 채널 누의 회전 덕트의 특정 기하학을 모방 하도록 설계 되었습니다. 재생성 된 실크 fibroin (RSF) 회전 높은 농도, 첨가 온도 압력에서 드라이 스핀 섬유 아닌 통해 돌출 했다. 사후 처리 과정에서로 냈 지 섬유 했다 그려지고 에탄올 용액에 저장 됩니다. 싱크 로트 론 방사선 광각 x 선 회절 (SR-WAXD) 기술은 RSF 섬유 축 x-레이의 microbeam에 샘플 홀더를 고정 하는 단일 RSF 섬유의 미세를 조사 하기 위해 사용 되었다. 화도, crystallite 크기 및 결정 방향 섬유의 WAXD 데이터에서 계산 했다. 2 차원 WAXD 패턴의 적도 근처 회절 호 사후 처리 RSF 섬유 높은 방향 정도 나타냅니다.

Introduction

거미 및 누 주위 온도 압력에서 수성 단백질 해결책에서 뛰어난 실크 섬유를 생산할 수 있다. 전단 및 extensional 흐름 실크 동맥1액정 텍스처의 형성을 유도할 수 있다. 최근 몇 년 동안, 고 강도 인공 섬유를 생산 하기 위해서는 거미의 회전 과정을 흉내 낸에 큰 관심이 되었습니다. 그러나, 거미 실크 단백질의 대량 수 없습니다 효율적이 고 경제적으로 의해 생산 농업 식인 풍습으로 인해 거미. 상당한 양의 누 실크는 농업에 의해 쉽게 얻어질 수 있다. 그렇지 않으면, 누와 거미 유사한 회전 과정과 아미노산 성분이 있다. 따라서 누 실크 fibroin 선택 대신 인공 동물 실크 스핀 많은 연구자에 의해.

거미 및 누에에서 섬유에 그들의 회전 덕트를 통해 단백질 해결책을 압출 성형. 가장 가능성이 회전 덕트를 따라 생성 높은 스트레스 힘 더 확장 구조2실크 fibroin 분자 스트레칭. 인공 실크 섬유 기존의 젖은 회전 및 회전 건조 프로세스3,4, 고려 하지 않는 사용 하 여 회전 된 유체 힘 회전 덕트에서 생성 된 계정.

첫째, 미세 접근 실크 단백질5,6의 어셈블리를 조사 하기 위해 사용 되었다. 다음, RSF의 미세 제조 전단 및 extensional 세력7,8모델링을 통해 연구 했다. 영의 계수 및 RSF 섬유의 직경이 미세 젖은 회전에 의해 조정 될 수 있다 하지만 그려진된 섬유의 인장 강도 100 MPa7. 마지막으로, 고 강도 RSF 섬유 미세 드라이 회전 메서드를 사용 하 여 성공적으로 준비 하지만 섬유의 직경은 2 µ m8만. 최근, 미세 젖은 회전 강도 재조합 거미 실크 섬유의 생산에서 성공적으로 사용 되었다. 공기에서 후 회전 그리기9인공 섬유 표면 및 내부 결함 개선.

이 연구에서는 향상 된 미세 회전 RSF 섬유에 대 한 과정 소개 된다. 그것은 회전 마약, 전단 세력, 그리고 드라이 회전 과정을 포함 하 여 누 실크 회전 과정을 모방 하는 것을 목표로. 이 회전 방법은 고 강도 인공 실크 섬유를 생산할 수 있다 뿐만 아니라 또한 섬유의 직경을 조정할 수 있습니다. 첫째, RSF 마약 회전 전단 이었고 두 번째 순서 지 수 감퇴와 biomimic 채널에 길쭉한. 둘째, 섬유 형태와 속성에 상대 습도 (RH)의 영향 미세 드라이 회전 과정10에서 공부 했다. 기존의 회전 spinneret에 비해, 우리의 미세 시스템 높은 생체 모방 이며 건조 하 여 주위 온도에 솔루션에서 고 강도 섬유를 생산 또는 회전 방법 젖은 사용할 수 있습니다.

때문에 고해상도, 고휘도, 고 에너지 싱크 로트 론 방사선 미소 초점 x 선의를 사용할 수 있습니다 몇 마이크로미터4,11 의 직경을 가진 단 하나 섬유의 미세 하 , 12 , 13 , 14. 여기, SR WAXD 기술은 화도, crystallite 크기 및 RSF 섬유의 결정 방향 계산에 사용 되었다.

Protocol

주의: 사용 하기 전에 모든 관련 물질 안전 데이터 시트를 참조 하십시오. 성형을 준비에 사용 되는 화학 물질의 일부는 심하게 독성이 있습니다. 개인 보호 장비 (안전 안경, 장갑, 실험실 코트, 전장 바지 및 폐쇄 발가락 신발)를 사용 하십시오. 1. 미세 회전의 RSF 용액 준비의 RSF 마약 회전 수성 4 , 15 , <ol…

Representative Results

고 강도 RSF 섬유 미세 회전 메서드를 사용 하 여 성공적으로 생산 되었다. 응력-변형 곡선 및 뻗어 RSF 섬유 C44R40의 SEM 이미지는 그림 2에 표시 됩니다. 적어도 10 섬유는 인장 시험에서 측정 되었다. 응력-변형 곡선 섬유의 주요 스트레스와 긴장의 평균 값에 따라 선택 되었다. 섬유의 WAXD 데이터는 그림 3에 나와 있습니다. 화도 및…

Discussion

RSF 솔루션의 투 석 동안 pH 값이 다음 농도 과정에 대 한 중요 합니다. 이온된 수의 pH 값이 6 보다 작은, RSF 솔루션 집중 과정에서 젤 쉬울 것 이다. 겔 화를 피하기 위해, CaCl2 RSF 솔루션에 추가 됩니다. CaCl2 의 농도 1 mmol RSF의 무게 당.

우리의 이전 작품의 미세 드라이-8RSF 수성 해결책 가능성을 보여주었다. 미세 채널의 형상을 단순화 된 단일 ?…

Divulgaciones

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 주최 국립 자연 과학 재단의 중국 (21674018), 국가 핵심 연구 및 중국의 개발 프로그램 (2016YFA0201702 /2016YFA0201700), 그리고 “Shuguang 프로그램” 상하이 교육 개발 지원 재단과 상하이 시 교육 위원회 (15SG30), 상해시 영 교수 프로그램 (A201302), 중앙 대학 및 111 프로젝트 (No.111-2-04)에 대 한 근본적인 연구 자금을 구별.

Materials

B. mori Cocoons Farmer in Tongxiang, Zhejiang Province, China
Sodium carbonate, anhydrous, 99.8% Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd., China Analytically Pure
Lithium bromide, 99.1% Shanghai China Lithium Industrial Co., Ltd., China Analytically Pure
Calcium chloride, anhydrous, 96.0% Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd., China Analytically Pure
Ethanol, anhydrous, 99.7% Sinopharm Group Chemical Reagent Co.,Ltd., China 10009218 Analytically Pure
SU-8 photoresist MicroChem Corp., USA
Developing solution MicroChem Corp., USA
Sylgard 184 Dow Corning, USA
Isopropanol Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd., China Analytically Pure
Concentrated sulfuric acid Pinghu Chemical Reagent Factory, China Analytically Pure
30 vol% hydrogen peroxide Shanghai Jinlu Chemical reagent Co., Ltd., China Analytically Pure
Acetone Shanghai Zhengxing Chemical Reagent Factory, China Analytically Pure
Oxygen plasma treatment DT-01, Suzhou Omega Machinery Electronic Technology Co., Ltd., China
Syringe pump  KD Scientific, USA KDS 200P
Humidifier SEN electric
Driller Hangzhou Bo Yang Machinery Co., Ltd., China bench drilling machine Z406c
Material testing system Instron, USA Model: 5565
PeakFit Systat Software, Inc., USA Version 4.12

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Peng, Q., Shao, H., Hu, X., Zhang, Y. Microfluidic Dry-spinning and Characterization of Regenerated Silk Fibroin Fibers. J. Vis. Exp. (127), e56271, doi:10.3791/56271 (2017).

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